Kasmera

Reaparición de Enfermedades Tropicales

Molecular Characterization and Extended Spectrum Betalactamase Detection in E. coli and K. pneumoniae Strains Isolates from Intensive Care Units in a Teaching Hospital

La producción de Betalactamasas de Espectro Extendido por cepas de E. coli y K. pneumoniae, es un grave problema de salud pública ya que causa la pérdida de la eficacia terapéutica a los antibióticos ß-lactámicos. En este trabajo se investigó la presencia de betalactamasas de espectro extendido en cepas de E. coli y K. pneumoniae aisladas de pacientes de las unidades de cuidados intensivos de un hospital universitario. Se estudiaron 41 cepas de E. coli y 59 de K. pneumoniae, aisladas de los cultivos bacteriológicos realizados en el Centro de Referencia Bacterológica del Sevicio Autónomo Hospital Universitario de Maracaibo (SAHUM). Para la detección de betalactamasas de espectro extendido se utilizaron los métodos normalizados por el Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). El 39,02% de las cepas de E. coli y el 52,54% de las de K. pneumoniae fueron betalactamasas de espectro extendido positivas, en estas cepas se observó resistencia acompañante a quinolonas, aminoglicósidos, cloranfenicol, tetraciclina y trimetoprima/sulfametoxazol. El estudio epidemiológico mediante Electroforesis de Campo Pulsado, mostró una gran diversidad genética entre los aislamientos, esta policlonalidad indica que la diseminación dentro del ambiente hospitalario no se da por transmisión de una cepa entre pacientes, sino que se da por transferencia de plásmidos entre diferentes cepas producto de la alta presión selectiva ejercida por la mala utilización de cefalosporinas de tercera generación.

Extended Spectrum Betalactamases production from E. coli and K. pneumoniae strains, is a serious public health problem since cause loss of therapeutic effectiveness of betalactams antibiotics. In this research the presence of extended spectrum betalactamases was investigated in E. coli and K. pneumoniae strains isolated from intensive cares unit patients in a teaching hospital. 41 E. coli and 59 K. pneumoniae strains isolated from bacteriological cultures carried out in the Bacteriological Reference Centre at Autonomous Service Maracaibo´s University Hospital (SAHUM) were studied. For the detection of extended spectrum betalactamases the normalized methods proposed by Clinical and Laboratory Standards Institute were used. 39,02% of E. coli and 52,54% K. pneumoniae was positive for extended spectrum betalactamases production, in these isolates accompanying resistance to quinolones, aminoglycosides, chloramphenicol, tetracycline and trimethoprim/sulfamethoxazole was detected. The epidemiological research by means of pulsed field gel electrophoresis showed a great genetic diversity among these strains, this polyclonal pattern, allows to determine that dissemination inside the hospital services is not given by transmission of a single clone among patients, but rather it is given by plasmids transfer among different strains product of the selective high pressure exercised by third generation cephalosporins bad use.

Antibiotic and Antifungi activity of B. cepacia originating of nosocomial environmental: Independent Service University Hospital Antonio Patricio Alcalá. Cumaná, Venezuela

Burkholderia cepacia, es un bacilo Gram negativo, no fermentador, reconocido como causal de infecciones oportunistas; además de producir compuestos con actividad antimicrobiana. En el presente estudio se evaluó el antagonismo de nueve (9) aislados nosocomiales de B. cepacia contra hongos filamentosos, levaduras y bacterias de ambientes hospitalarios. La detección antibacteriana y antifúngica, se determinó según la técnica de la doble capa y de los cortes cilíndricos en agar, respectivamente. Cuatro aislados de B. cepacia (CVCM: 626,1328, 1331 y 1332) inhibieron los diferentes géneros bacterianos analizados. B. cepacia CVCM 1332, inhibió a cinco (5) de las seis (6) especies de bacterias indicadoras, con halos de inhibición entre 11 y 22 mm; a excepción de P. fluorescens. Tres (3) aislados de B. cepacia no presentaron actividad antibacteriana. Dos aislados de B. cepacia inhibieron los hongos estudiados (Fusarium solani, Penicillium citrinum, Penicillium frequentans, Aspergillus niger, Aspergillus ochoraceus, Penicillium echinulatum, Candida tropicalis, Candida famata). Las cepas CVCM 626, 1328 y 1331 presentaron tanto actividad antibacteriana como antifúngica. Se comprobó el antagonismo de aislados nosocomiales de B. cepacia contra bacterias y hongos de ambientes hospitalarios, representando un factor importante en la colonización de áreas críticas, facilitando la aparición de cuadros infecciosos en pacientes allí recluidos.

Burkholderia cepacia is a Gram-negative and non-fermenter bacilli, known as a causal agent of opportunistic infections, as well as producer of compounds with antimicrobial activities. In the present study, the antagonism of nine (9) nosocomial isolates of B. cepacia against filamentous fungi, yeast and bacteria from hospital environments was evaluated. The antibacterial and antifungal detection was determined according to the double layer technique and cylindrical sections in agar, respectively. Four B. cepacia isolates (CVCM: 626, 1328, 1331 and 1332) inhibited the different bacterial species analyzed. B. cepacia CVCM 1332 inhibited five (5) of the six (6) indicators of bacterial species, with inhibition halos between 11 and 22 mm, with the exception of P. fluoresecens. Three (3) B. cepacia isolates did not show antibacterial activity. Two B. cepacia isolates inhibited the studied fungi (Fusarium solani, Penicillium citrinum, Penicillium frequentans, Aspergillus niger, Aspergillus ochoraceus, Penicillium echinulatum, Candida tropicalis, Candida famata). The species CVCM 626, 1328 and 1331 showed both antibacterial and antifungal activities. The antagonism of nosocomial B. cepacia isolates against bacteria and fungi from hospital environments was demonstrated, representing an important factor in the colonization of critical areas, facilitating the appearance of infectious symptoms in hospitalized patients.

Neisseria Gonorrhoeae Susceptibility to ß-lactamics Antibiotic, Tetraciclines, and Quinolones

Se estudió la susceptibilidad de Neisseria gonorrhoeae a los antibióticos ß-lactámicos, tetraciclinas y quinolonas, en cepas aisladas de pacientes con cervicitis y/o uretritis gonocóccicas que asitieron a la consulta de Infecciones de Transmisión Sexual del Ambulatorio Urbano tipo II, El Perú en Ciudad Bolívar, Julio-Agosto del 2003. Las muestras fueron inoculadas en Agar Sangre, Agar Base GC con suplemento nutricional al 1% y Agar Thayer Martin; realizando simultáneamente coloración de Gram. Las colonias sospechosas fueron identificadas mediante el test de oxidasa, y la degradación de azúcares en medio CTA. Se investigó la producción de ß -lactamasa mediante el método acidimétrico. Las pruebas de susceptibilidad se hicieron en Agar Base GC con suplemento nutricional al 1% para los siguientes antimicrobianos: penicilina, ceftriaxona, tetracilina, y ciprofloxacina. Se aislaron 50 cepas de N. gonorrhoeae que representaron el 43,85% de pacientes consultantes, de las cuales 82% pertenecían a pacientes del sexo masculino. No se encontró evidencia de la producción de ß-lactamasas en las cepas estudiadas. En cuanto a la susceptibilidad a los antimicrobianos se encontró 46% de resistencia a penicilina, 42% a las tetraciclinas, ceftriaxona y ciprofloxacina mostraron buena actividad contra gonococo con 98 y 92% de sensibilidad respectivamente.

Neisseria gonorrhoeae susceptibility to ß-lactamics antibiotic, tetraciclines, and quinolones was studied in strains isolated from patients with gonococcic cervicitis and/or urethritis that were to consultation of Infections of Sexual Transmission of The Ambulatory Urban type II, in a neighborhood of Ciudad Bolívar from July to August - 2003. The samples were seeded in Agar Blood, GC Agar Base and 1% defined growth supplement, Agar Thayer Martin; making simultaneously a Gram stain. Suspicious colonies were identified by means of oxidase test and sugar degradation in CTA medium. The production of ß-lactamases was investigated of by means of the acidimetric method. Susceptibility tests were made in GC Agar Base and 1% defined growth supplement. Penicilline, ceftriaxone, tetracicline, and Ciprofloxacin were used. 50 strains were isolated of Neisseria gonorrhoeae that represented 43.85% of patients with gonococci infections (Urethritis and/or cervicitis) of which 82% belonged to masculine sex. There was no evidence of production of ß-lactamases in the studied strains. As far as the susceptibility to the antimicrobial drugs it was found 46% strains resistant to penicillin, 42% to tetraciclines. Ceftriaxone and ciprofloxacin showed a good activity against N. gonorrhoeae with 98 and 92% of sensitivity, respectively.

Salmonella and Shigella in faecal specimen in the Santa Rosa population, Maracaibo-Venezuela

Las infecciones gastrointestinales, representan a nivel mundial unas de las mayores causas de morbi-mortalidad, principalmente en los países subdesarrollados, siendo comunes en aquellas poblaciones con escasas condiciones socio-sanitarias como la población indígena de Santa Rosa. El propósito de esta investigación fue detectar la presencia de Salmonella y Shigella a partir de muestras fecales en la población de Santa Rosa. Se procesaron 245 muestras de heces de individuos entre edades comprendidas entre 2 meses a 83 años con o sin diarrea, en los cuales se realizó la técnica del coprocultivo (8) y las pruebas de susceptibilidad a los agentes antimicrobianos siguiendo la metodología descrita por el CLSI (5). Del total de muestras procesadas, 7 de ellas (2,9%) resultaron positivas para los géneros Salmonella y Shigella. Salmonella se detectó en 85,7%, identificándose serogrupos Salmonella enterica grupo B en 66,7% y Salmonella enterica grupo C1 en 33,3%; mientras que Shigella se aisló en un 14,3%, siendo S. flexneri la única especie encontrada. En las pruebas de resistencia antimicrobiana para Salmonella resultó ser resistente a Ampicilina, Tetraciclina y Amoxicilina/ Acido Clavulánico con un 16,7% para cada uno. Shigella mostró un patrón de resistencia a Ampicilina, Tetraciclina, Cloranfenicol, Amoxicilina /Acido Clavulánico y Trimetoprim Sulfametoxazol. A pesar de la precarias condiciones del sector de Santa Rosa, la incidencia de patógenos bacterianos es baja, en comparación a otros sectores con características similares de vida.

The gastrointestinal infections, there represent worldwide some of the major reasons of morbid-mortality, principally in the underdeveloped countries, being common in those populations with scanty conditions associate sanitary as the population indigenous to Saint Rose. The purpose of this research was to detect the presence of Salmonella and Shigella from fecal samples in the town of Santa Rosa. It processed 245 stool samples of individuals between ages 2 months to 83 years with or without diarrhea, which was conducted technique coprocultive (8) and testing for susceptibility to antimicrobial agents following the methodology described by the CLSI (5). Of the total number of samples processed, 7 of them (2.9%) were positive for the genera Salmonella and Shigella. Salmonella was detected in 85.7%, identifying serogroups Salmonella enterica Group B in 66.7% and Salmonella enterica group C1 to 33.3%, while Shigella was isolated in a 14.3%, being S. flexneri the only species found. On the evidence of resistance to antimicrobial-resistant Salmonella proved Ampicillin, Amoxicillin Tetraciclina and / Acid Clavulánico with 16.7% for each. Shigella showed a pattern of resistance to Ampicillin, Tetraciclina, Chloramphenicol, Amoxicillin / Acid Clavulánico and Trimethoprim Sulfametoxazol. Despite the precarious conditions in the sector of Santa Rosa, the incidence of bacterial pathogens is low, compared to other areas with similar characteristics of life.

Superficial Mycoses in Old People Residents of the Geriatrical Unit Monseñor Dr. Rafael Arias Blanco, Juan Griego, Nueva Esparta State, Venezuela

Se evaluó la frecuencia de micosis superficiales en una población de 71 adultos mayores entre 62 y 98 años, de sexo masculino y femenino, residentes de la Unidad Geriátrica, durante el periodo octubre 2005-Febrero 2006, de los cuales 49 presentaron diagnóstico sugestivo. A las muestras obtenidas, se les practicó examen directo con KOH al 10%, se cultivaron en agar Fungobiotic y se incubaron durante 15 días a temperatura ambiente. Las colonias filamentosas se identificaron a través de las características macro y microscópicas, mientras que las levaduras del género Candida por el sistema de identificación API 20 C AUX®. Los resultados obtenidos fueron analizados a través del método de análisis porcentual (%) y la prueba de Chi-cuadrado (X²). Resultaron positivos 40 (81,63%) casos, de los cuales el 82,50% fueron para candidosis cutáneas, siendo la candidosis ungueal la más frecuente, seguido de la tinea unguium (12,50%) y las onicomicosis por hongos no dermatofitos (5,00%). No se detectó ningún caso de pitiriasis versicolor. C. albicans fue el hongo más frecuentemente aislado (64,81%), sobre todo en uñas de pies, seguido de C. parapsilosis (12,96%) y Trichophyton mentagrophytes (5,56%). En la vejez, se observa una alta incidencia de candidosis cutáneas, la cual es favorecida por las condiciones físicas propias del adulto mayor, enfermedades concomitantes, déficit en la inmunidad celular y ciertos factores predisponentes como el ritmo de vida, el uso de calzados cerrados, el clima cálido y la humedad de la región donde se reside.

The superficial mycoses frequency was evaluated in a population of 71 old people between 62 and 98 years old, males and females, residents of a geriatrical unit, during the October 2005-February 2006 period, of which 49 presented a suggestive diagnosis. A direct exam with KOH at 10% was done to the obtained samples, which were cultivated in fungobiotic agar and incubated during 15 days at room temperature. The colonies of filamentous bacteria were identified by macro and microscopic characteristics, while leavenings of Candida genus by the API 20 C AUX® identification system. The obtained results were analyzed trough method of percentage analysis (%) and test of Chi-square (X²). 40 (81.63%) cases resulted positive, of which 82.50% were cutaneous candidosis, being ungual candidosis the most frequent, followed by la tinea unguium (12.50%) and onychomycosis due to non-dermatophytic fungi (5.00%). No case of pityriasis versicolor was detected. C. albicans was the fungus most frequently isolated (64.81%), generally in nails of feet, followed by C. parapsilosis (12.96%) and Trichophyton mentagrophytes (5.56%). A high incidence of cutaneous candidosis was observed at old people, which was favoured by the physical conditions common in them, concomitant disease, deficiency in cellular immunity and certain predisponent factors, such as life style, the use of closed shoes, warm weather and the humidity in the region where they live.

Growth of Aspergillus niger ATCC 11414 in a media with Anacardium occidentale gum: Production of -D-Galactosidase

Aspergillus niger ATCC 11414 en un medio de cultivo con base en la goma de Anacardium occidentale mostró las características morfológicas (macro-y microscópicas) que permiten su identificación. Se estudiaron varias condiciones de crecimiento en comparación con el medio de referencia Czapeck Dox Agar. El mejor crecimiento del hongo, observado en pH 4,5 y 6,2 y en presencia de iones magnesio, se seleccionó para estudiar la interacción hongo-sustrato, la cual se demostró por la actividad enzimática. La producción de -D- galactosidasa, está de acuerdo con la presencia de -D-Galp-(1―6)- Galp en las ramificaciones de la estructura de la goma de A. occidentale y sugiere que la galactosa es usada por el hongo como fuente de carbono. Los resultados muestran que el medio con base en la goma de A. occidentale es adecuado para el crecimiento de A .niger y podría ser útil en aplicación biotecnológica.

Aspergillus niger ATCCC 11414 in a media with Anacardium occidentale gum showed the morphological characteristics (macro- and microscopic) that led its identification. It was studied many growth conditions in comparison with Czapeck Dox Agar. The best growth of the fungus, observed at given conditions (pH 4.5; 6.2 , presence of magnesium ions), was chosen to study the interaction fungus-gum which was demonstrated by the enzymatical activity. The production of -D-galactosidase, supports by the presence of -D-Galp-(1―6)- Galp in the branches of A. occidentale gum structure, may suggest that galactose is used as carbon source by the fungus. The results showed that the media with A. occidentale gum is a good one for A.niger growth and may be useful for biotechnology application.

Detection of Histoplasma Capsulatum by Nested-PCR in Clinical Specimens

La histoplasmosis es una micosis profunda de distribución mundial cuyo diagnóstico se fundamenta en estudios clínicos, micológicos e inmunológicos. La identificación del agente etiológico en muestras biológicas es difícil de realizar. Se evaluó la técnica de PCR en dos rondas para identificar ADN de Histoplasma capsulatum en muestras clínicas (sangre y médula ósea) y cultivos del hongo. Se ensayaron 3 métodos de aislamiento de ADN basados en los reactivos Tiocianato de Guanidina, Cloruro de Bencilo y Triton-X-100. La técnica de aislamiento con Tiocianato de guanidina resultó de fácil aplicación en muestras clínicas. Sin embargo, se obtuvo un mayor rendimiento de ADN con el reactivo Triton-X-100. La aplicación de la prueba de PCR generó un amplificado de 210 pares de bases el cual fue identificado tanto en las cepas de referencia de H. capsulatum como en 5 muestras de sangre y 2 muestras de médula ósea. Para confirmar la especificidad de la prueba se analizaron cepas de otros hongos no relacionados, Paracoccidioides brasiliensis, Candida glabrata, Cryptococcus neoformans y Coccidioides immitis (C posadasii) las cuales resultaron negativas. La técnica de PCR mostró una sensibilidad de hasta 10pg de ADN de H. capsulatum confirmándose así su utilidad como herramienta de diagnóstico molecular.

Histoplasmosis is a systemic mycosis whose diagnosis is based on clinical, mycological and immunological criteria. Identification of its etiological agent in biological samples is difficult to perform. We evaluated a nested-PCR technique to identify Histoplasma capsulatum in clinical specimens (blood and bone marrow) and reference strains. Three different methods for DNA isolation were tested based on the reagents Guanidine thiocyanate, Benzoyl chloride and Triton X-100. Among these procedures, Guanidine thiocyanate-based method yielded by utmost good quality DNA and was easy to perform when used with clinical specimens. However, a better recovery of DNA was accomplished with the Triton-X-100 method. Reference strains of Paracoccidioides brasiliensis, Candida glabrata, Cryptococcus neoformans and Coccidioides immitis (C posadasii)were tested to assess PCR assay specificity. The samples were amplified by nested-PCR and analyzed by 3% agarose gel electrophoresis. Each of the reference strains showed the same signal upon amplification with a DNA band of 210 bases pairs, as well as 5 blood samples and 2 bone marrow specimens, with high sensitivity (10 picograms of Histoplasma capsulatum DNA) and specificity (no cross reactivity with P. brasiliensis, C. glabrata, C. neoformans and C. immitis). This technique has proved to be useful as a diagnostic technique.