Investigación Clínica

Superar las dificultades es nuestra meta en el 2011

Detection of human papilloma virus (HPV) in liquid-based cervical samples: Correlation with protein p16INK4a expression

La citología del cuello uterino en base líquida mejora la calidad de la muestra y el material residual podría ser utilizado para realizar pruebas complementarias, como la detección del virus papiloma humano (HPV) y estudio inmunocitoquímico de biomarcadores. El propósito de este estudio fue correlacionar la presencia de HPV y la inmunoexpresión de p16INK4a en las muestras citológicas en base líquida para examinar la utilidad de estas nuevas herramientas en la detección de cáncer de cuello uterino. Las pacientes incluidas (n=67) presentaban una citología anormal o patología cervical previa. La detección y genotipificación de HPV se realizó con PCR-SPF10/LiPA (INNOLiPA Extra Amp) y para la inmunodetección de p16INK4a se utilizó el anticuerpo clon E6H4. La citología convencional proporcionó los mismos hallazgos citológicos que la citología en base líquida. La prevalencia general del HPV fue de 43,3% (29/67). El HPV16 fue el tipo viral mas frecuente (31,03%) y el 48,3% de los casos presentó infección múltiple. En el 35,8% de las muestras cervicales se detectó inmunoexpresión de la p16INK4a y ésta fue significativamente (p<0,020) asociada a la presencia de HPV. Estos resultados apoyan la evidencia que la implementación de nuevas tecnologías en la rutina diaria del laboratorio contribuye significativamente en la detección precoz del cáncer de cuello uterino y en el aporte de datos importantes para facilitar en el manejo clínico adecuado de la paciente. La detección de HPV combinada con la p16INK4a podría ser utilizado en la evaluación de pacientes con mayor riesgo a desarrollar lesiones cervicales significativas

The liquid-based cervical cytology improves the quality of the sample and the residual sample could be used efficiently to carry out complementary tests, such as the detection of HPV DNA and the immunocytochemical biomarkers study. The purpose of this study was to correlate the presence of HPV and immunoexpression of p16INK4a in liquid-based cervical samples to examine the utility of these new tools in the detection of cervical cancer. The included patients (n=67) presented an abnormal cytology or previous cervical pathology. The HPV detection and genotyping were carried out with PCR-SPF10/LiPA (INNOLiPA Extra Amp) and for p16INK4a immunodetection was used antibody clone E6H4. The conventional cytology provided the same cytologic interpretations that those of liquid-based cytology. The overall HPV prevalence was 43.3% (29/67). HPV16 was the most frequent viral type (31.03%) and 48.3% of the cases were infected with multiple HPV types. p16INK4a immunoexpression was observed in 35.8% of liquid-based cytological samples and this was significantly (p < 0.020) associated to the HPV presence. These results support the evidence that the implementation of new technologies in the daily routine of the laboratory, contribute significantly in the early detection of cervical cancer and provide important data to help in the patients efficient management. The combined use of HPV detection and p16INK4a expression could be used for evaluation of patients with more risk to develop significant cervical lesions

The effect of montelukast in a model of gouty arthritis induced by sodium monourate crystals

Non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDS) are the first line of therapy in acute gouty arthritis. NSAIDs inhibit the cyclooxygenase pathway, but not the lipooxygenase activity and can have many adverse effects and thus have a limited effect on the control of inflammation in this disease. In this work we studied the effect of montelukast on the cellular inflammatory infiltrate in a model of murine arthritis induced by sodium monourate crystals (SMU), using a subcutaneous air cavity (air pouch) in BALB/c mice. Seven groups of BALB/c mice (n = 4) were distributed into five experimental groups and two inflammatory control groups, a positive and a negative one. Previous to SMU exposure, the experimental groups received montelukast (1 and 0.01 mg/Kg/w) and/or indomethacine (2.5 mg/Kg/w), followed by administration of SMU in the air pouch. The total and differential counts of inflammatory cells were analyzed after 2, 6, 12 and 24 hours. Montelukast, significantly reduced the total number of cells (p<0.05), with a predominant impact on polymorphonuclear over mononuclear cells, especially after 12 hours of the medication. The montelukast/indometacine combination showed an additive effect. Our data show that montelukast has an anti-inflammatory effect in the model of gouty arthritis. Consequently, anti-leukotrienes could represent a new and effective therapy, either isolated or combined with conventional therapy of gouty arthritis

En artritis gotosa aguda las drogas antiinflamatorias no esteroideas son la primera línea terapéutica. Este tratamiento no es satisfactorio porque inhibe la ciclooxigenasa sin modificar la actividad de la lipooxigenasa, y puede acompañarse de numerosos efectos adversos. Investigamos el efecto de montelukast sobre el infiltrado celular inflamatorio en un modelo de artritis múrida inducida por cristales de monourato de sodio (MUS) en el modelo experimental de la bolsa de aire (air pouch). Siete grupos de ratones BALB/c (n = 4) fueron distribuidos en cinco grupos experimentales y dos grupos controles inflamatorios: positivo y negativo. Los grupos experimentales recibieron, montelukast (1 y 0,01 mg/Kg/p) y/o indometacina (2,5 mg/Kg/p) por vía oral, previo a la administración de MUS en la bolsa del aire. El conteo absoluto y diferencial de las células inflamatorias fue analizado después de 2, 6, 12 y 24 horas de tratamiento. El tratamiento con montelukast redujo significativamente el número total de células presentes en el infiltrado inflamatorio (p < 0,05), con un efecto mayor sobre polimorfonucleares que sobre las células mononucleares, y con un máximo efecto a las 12 horas después de la administración del medicamento. La combinación montelukast/indometacina mostró un efecto aditivo. Los resultados demuestran que montelukast tiene un efecto antiinflamatorio en el modelo de la artritis gotosa. Por lo tanto, los anti-leucotrienos podrían representar una nueva y eficaz terapia, aislada o en combinación con la terapéutica convencional, para la artritis gotosa

Diagnostic accuracy of immunological methods in patients with tuberculous pleural effusion from Venezuela

In recent years, better diagnostics for tuberculosis (TB) has received increasing attention, especially the diagnosis of tuberculous pleural effusion, which is difficult and at present the main tool in TPE diagnostic is pleural effusion smear and culture, but unfortunately, sensitivities are low, therefore better TPE diagnostic tools are needed. The aim of this study was to find a diagnostic algorithm to assess the progress in TPE diagnostic at the Hospital Vargas de Caracas, that permits identification of the majority of patients, at a satisfactory cost-benefit ratio, evaluating the levels of IFN-g and IL-12p40 in pleural effusion and serum, as well as the antibody reactivity in order to compare it with microbiological tests. A total of 60 individuals with pleural effusion were studied; 20 patients with tuberculous pleural effusion (TPE) formed the patient group and 40 patients with non-tuberculous pleural effusion (NTPE) formed the control group. The levels of IFN-g and IL-12p40 in effusion and serum and class and subclasses of IgG reactivity to Mycobacterium tuberculosis antigens were measured by ELISA. The utility of these methods for diagnosis of TPE was evaluated using receiver operating characteristic (ROC) curve analysis. The results of the 11 immunological methods evaluated showed that the anti-PPD IgG2 method was able to reach the highest specificity of 95% (CI: 88.3-101.8), positive predictive value (PPV)=75 (at 30% sensitivity); while that the overall sensitivity of methods was between 95% and 30%, of these, two methods reached higher sensitivities; increased levels of pleural IFN-g, with a sensitivity of 95% (CI: 85.5-104.5) with the highest negative predictive value (NPV)=97, (at 82.5% specificity), followed by decreased levels of serum IL-12p40 with a sensitivity of 95% (CI: 85.5-104.5), NPV=95.2 (at 50% specificity). In contrast, microbiological methods showed that smear had a sensitivity of only 20%, while smear plus culture had, a sensitivity of 70%. Considering that TPE represents approximately 15 percent of all the TB clinically diagnosed at the Hospital Vargas de Caracas, in those patients with preliminary microbiology negativity in the effusion, the combined analysis of pleural IFN-g and anti-PPD IgG2 could represent a fast and effective diagnostic algorithm for improving the diagnosis previous to obtain culture results. In this way treatment against TB could be initiated or the need to cytological and pleural biopsy could be considered

Recientemente existe un gran interés hacia un mejor y más rápido diagnóstico de tuberculosis (TB), especialmente de tuberculosis pleural, el cual es difícil. Al presente las principales herramientas diagnósticas son la baciloscopia y el cultivo de líquido pleural; desafortunadamente, las sensibilidades de estos métodos son bajas, por lo que el desarrollo de nuevas herramientas diagnósticas es necesario. El objetivo del presente estudio consistió en encontrar un algoritmo que permita la rápida identificación de la mayoría de los pacientes con TB pleural que ingresan en el Hospital Vargas de Caracas a un buen costo-beneficio. Para esto se evaluaron los niveles de las citocinas Interferón-gamma (IFN-g) y la Interleucina 12p40 (IL-12p40) en líquido pleural y suero, así como la reactividad de anticuerpos contra antígenos de Mycobacterium tuberculosis. Se estudiaron 60 individuos con derrame pleural; 20 individuos con líquido pleural tuberculoso (LPT) conformaron el grupo de pacientes y 40 individuos con líquido pleural no tuberculoso (LPNT) el grupo de controles. La técnica de inmunoensayo de ELISA fue utilizada para medir los niveles de IFN-g y IL-12p40; así como las reactividades de los diversos isotipos y subclases de inmunoglobulina G (IgG) frente a antígenos del bacilo. La utilidad de los métodos fue evaluada utilizando el análisis de las curvas ROC (receiver operating characteristic). Los resultados de los 11 métodos inmunológicos evaluados mostraron que el método IgG2 anti-PPD alcanzó la mayor especificidad de 95%, (CI: 88,3-101,8) con un valor predictivo positivo (VPP) de 75. La sensibilidad de los métodos estuvo entre 30% y 95%; dos métodos alcanzaron altas sensibilidades: los altos niveles de IFN-g en líquido pleural, con sensibilidad de 95% (CI: 85,5-104,5), con un valor predictivo negativo (VPN) de 97, seguido de los bajos niveles de IL-12p40 en suero, con una sensibilidad de 95% (CI: 85,5-104,5) con un VPN de 95,2. En contraste, los métodos microbiológicos mostraron una baja sensibilidad, en el caso de la baciloscopia sólo del 20%; mientras que la combinación baciloscopia más el cultivo alcanzó 70%. Considerando que las LPT representan el 15% de todos los casos de TB diagnosticados en el Hospital Vargas de Caracas; aquellos pacientes con una microbiología preliminar negativa en líquido pleural, la realización del análisis de IFN-g en líquido y el método serológico IgG2 anti-PPD podrían constituir un algoritmo diagnóstico rápido y efectivo, previo al resultado del cultivo para micobacteria, lo cual permitiría iniciar el tratamiento antituberculoso de forma más precoz o considerar la realización de la biopsia

Effect of antiphospholipid antibodies on the formation and lysis of fibrin network in patients with recurrent miscarriage

En el presente trabajo se estudió el proceso de formación y disolución de la malla de fibrina y la generación de plasmina en un grupo de pacientes con aborto recurrente (AR) debido a la presencia de anticuerpos antifosfolipídicos (N= 10), mujeres con AR sin el síndrome antifosfolipídico (SAF) (N= 6) y se comparó con un grupo de mujeres sanas (N= 8). Del grupo de pacientes estudiadas con SAF, nueve fueron positivas para anticuerpos anticardiolipina (aCL), cinco para la anti-b2-glicoproteína I (anti-b2GPI), cuatro para ambos anticuerpos, una para anticuerpos antiprotrombina (aPT) y anticoagulante lúpico (AL). El proceso de formación de la fibrina y su disolución fue estudiado por turbidimetría y la generación de plasmina mediante sustrato cromogénico S2251. Las curvas de polimerización de la(s) paciente(s) con AR sin SAF y AL presentaron un incremento en la pendiente y turbidez final, comparado con las del grupo control de mujeres sanas. La velocidad de disolución del coágulo fue mayor en la paciente con AL (21 ± 0) 10-4 DDO/seg y en las AR sin SAF (19,6 ± 5,7) 10-4 DDO/seg, comparado con el grupo control (14,5 ± 2,8) 10-4 DDO/seg. La generación de plasmina estuvo incrementada solamente en las AR sin SAF (85 ± 24%) comparado con 52 ± 3% en el grupo control, p= 0,005. Los cambios observados en el proceso de polimerización y fibrinólisis de la(s) paciente(s) con AR sin SAF y AL pudieran estar relacionados con el incremento en los niveles de fibrinógeno, mientras que los de la generación de plasmina con la entidad mórbida

The present work was intended to study the process of fibrin formation and lysis and plasmin generation in a group of patients with recurrent miscarriage (RM), due to the presence of antiphospholipid antibodies (N= 10); as well as in women with RM without the antiphospholipid syndrome (APS) (N= 6), compared with those of a group of healthy women (N= 8). In the group of patients with APS, nine were positive for antibodies against cardiolipin (aCL), five for anti-b2-glycoprotein I (anti-b2GPI), four for both antibodies, and one for antibodies against prothrombin (aPT) and lupus anticoagulant (LA). Fibrin formation and lysis was followed by turbidity and plasmin generation using chromogenic substrate S2251. The polymerization curves from RM patients without APS and the LA patient showed an increased slope and maximum turbidity compared to those of the control group. The speed of lysis was higher in the LA patient (21 ± 0) 10-4 DOD/seg and the RM patients without APS (19.6 ± 5.7) 10-4 DDO/seg, compared to that of the control group (14.5 ± 2.8) 10-4 DDO/seg. Plasmin generation increased only in RM patients without APS (85 ± 24%) against the control group (52 ± 3%), p= 0.005. The changes observed in the fibrin polymerization and lysis process of women with RM without APS and LA seem to be related to their higher fibrinogen levels, while the increased plasmin generation was related to the patients´ morbidity

**Development and evaluation of a serological protocol of fluorescence polarization for the preliminary study of Brucella spp antibodies in humans**

A objeto de mostrar el desarrollo y alcance de un método de análisis serológico basado en la técnica de fluorescencia polarizada (FPA) a partir de una gota de sangre obtenida mediante punción capilar, se realizó la determinación de anticuerpos antibrucelosis de un conjunto de 321 personas de alto riesgo laboral. Los resultados se compararon con la data proveniente del análisis de sueros sanguíneos mediante FPA e inmunoanálisis enzimático competitivo (ELISA-c). El número de concordantes fue 318 (99,06%), los 3 discordantes (0,93%) resultaron negativos con fluorescencia polarizada en suero (FPAs) y ELISA-c, pero positivos con FPA capilar (FPAc). Los resultados comparativos de FPAc fueron: sensibilidad: 100%; especificidad: 99,05%; valor predictivo positivo: 66,67%; valor predictivo negativo: 100,0%; proporción de falsos positivos: 0,95%; proporción de falsos negativos: 0%; exactitud: 98,0%; razón de probabilidades: 203,00. La J de Youden para ambos métodos de FPA fue de 0,667. La determinación se consideró confiable y la concordancia de ambos procedimientos de FPA y ELISA-c resultó sin diferencias estadísticas (P>0,05%), lo que permite recomendar ampliamente la implementación del estudio de la brucelosis humana con sangre proveniente de punción capilar como método preliminar

In order to show the development and scope of a serological analysis method based on fluorescence polarization assay (FPA) from a drop of blood obtained by the capillary technique, a Brucella antibody assay was performed on a group of 321 high-risk workers. The results were compared with data from the analysis of blood serum by FPA and a competitive enzyme immunoassay (ELISA-c). The number of concordance was 318 (99.06%), and discordant 3 (0.93%), which were negative in serum by fluorescence polarization (FPAs) and ELISA-c, but positive with capillary FPA (FPAc). The comparative results FPAc were: sensitivity 100%; specificity: 99.05%; positive predictive value 66.67%; negative predictive value 100.0%; false positive rate: 0.95%; false negative rate: 0%; accuracy: 98.0%; odds ratio: 203.00. The youden J for both FPA methods was 0.667. The identification was considered reliable and the correlation of both procedures, FPA and ELISA-c, was no statistically different (P> 0.05%), which allows to highly recommend the study implementation of human brucellosis with capillary blood as a preliminary method

Atrial fibrillation prevalence and treatment with oral anticoagulation in patients with permanent pacemakers

La fibrilación auricular (FA) es el factor de riesgo más importante para eventos tromboembólicos (ETE). El objetivo del presente estudio fue determinar la prevalencia de FA en pacientes con marcapasos definitivo (MCD), el porcentaje de anticoagulación y la prevalencia de ETE. El objetivo secundario fue determinar el nivel de conocimiento relacionado con las indicaciones de anticoagulación oral (AO) en pacientes con FA. Estudio descriptivo y retrospectivo de una serie consecutiva de pacientes. Se evaluaron factores de riesgo cardiovascular, motivos de indicación del MCD, antecedentes de FA, ETE y régimen de anticoagulación. Para determinar las potenciales causas de no AO, se realizó una encuesta a todos los médicos que habitualmente derivan sus pacientes a nuestro servicio. De 934 pacientes, el 26% (244) presentó FA, con una tasa de AO del 34%. El 77,3% presentaban un score CHADS2 ³2, solo el 2% presentó contraindicaciones para AO y la prevalencia de ETE fue del 9%. El 63% de los médicos contestó la encuesta. El 41% conocían el score CHADS2, el 33% pudo describir los parámetros clínicos que evalúa y un 23% respondieron correctamente el puntaje necesario para indicar AO. Se detectó una baja tasa de anticoagulación oral en pacientes con FA y MCD, con una elevada prevalencia de ETE y un sorprendente desconocimiento por parte de los médicos tratantes de las recomendaciones actuales de tratamiento

Atrial Fibrillation (AF) is the most important risk factor for stroke and thromboembolic events (TE). The aims of this study were to determine the prevalence of AF among patients with permanent pacemakers (PPM), the percentage of anticoagulated patients and the prevalence on TE in this population. The secondary purpose was to determine the level of knowledge about indications of anticoagulation for AF patients. This was a descriptive and retrospective study on a consecutive series of patients referred for PPM implantation. Cardiovascular risk factors, indications for pacing, prior history of AF, TE and anticoagulation indication were analyzed. In order to determine possible causes for not indicating anticoagulation, an electronic survey was sent to all doctors that usually refer patients for PPM implant and follow-up to our clinic. Among 934 patients, 26% (244) presented AF of which 34% were anticoagulated. 77, 3% presented a CHADS2 score of ³2 while only 2% had absolute contraindication for anticoagulation. The prevalence of TE was 9%. More than 60% of the doctors answered the survey. More than 40% acknowledged the CHADS2 score but only 33% were able to recognize all variables included in the score and 23% were able to determine when to indicate anticoagulation properly. A low anticoagulation rate was detected among patients with AF and PPM with a high prevalence of TE and stroke. An extremely low adherence to international guidelines was detected among doctors that usually deal with this sort of patients

Near-death Experiences

Las experiencias cercanas a la muerte (ECM) son eventos lúcidos que ocurren cuando una persona está tan comprometida físicamente que moriría si su condición no lograra mejorar. Está inconsciente, sin latidos cardíacos detectables, sin respiración y los registros electroencefalográficos son planos. Las ECM pueden incluir algunos de los siguientes elementos: experiencias fuera del cuerpo o separación de la conciencia del cuerpo físico, incremento en la percepción sensorial, emociones intensas, viaje hacia o a través de un túnel, observación de una luz brillante, encuentro con seres místicos o familiares y amigos fallecidos, sentido de alteración del tiempo y el espacio, revisión de la vida, visualización de paisajes celestiales indescriptibles, encuentro con una barrera o límite, aprendizaje de un conocimiento especial y el regreso voluntario o involuntario al cuerpo físico. La similitud de las ECM en niños y adultos es una evidencia de que son reales y no debidas a creencias preexistentes, influencias culturales o experiencias previas en la vida actual. Las características de las ECM son parecidas en todo el mundo y en personas de diferentes culturas. No existen evidencias que apoyen las hipótesis psicológicas, fisiológicas, neuroquímicas y neuroanatómicas para explicar las ECM. Se han propuesto modelos multifactoriales basados en la combinación de todos los factores señalados (hipoxia cerebral, liberación de serotonina, endorfinas o compuestos similares a la ketamina). Aunque los factores fisiológicos, psicológicos y socioculturales pueden interactuar en las ECM, las hipótesis que se han propuesto son meras especulaciones sin soportes sobre lo que ocurre durante una ECM

Near-death experiences (NDE) are lucid events that take place when a person is so physically compromised that he would die if its condition does not improve. He is unconscious, without heartbeats and breath, and with a flat-line electroencephalogram. NDE may include some of the following elements: Out of the body experiences or separation of consciousness from the physical body, increase in sensory perception and intense emotions, travel into or through a tunnel, encounter with a brilliant light and mystical beings, deceased relatives or friends, a sense of alteration in time and space, visualization of unworldly realms and a special knowledge, encounter with a barrier or boundary, and a return to the body, either voluntary or involuntary. The fact that children NDE are similar to adult NDE is an evidence that these experiences are real and not due to pre-existing beliefs, cultural influences or previous experiences in the present life. The characteristics of NDE are similar worldwide. No evidence supports the physiological, psychological, neurochemical, and neuroanatomical hypothesis proposed to explain the NDE. Multifactorial models, based on the combination of all of them (brain anoxia or hypoxia, release of serotonin, endorphins and ketamine-like compounds) have also been proposed. Although physiological, psychological, and socio-cultural factors could interact in the NDE, the hypothesis proposed consist essentially in unsupported speculations about what might be happening during the NDE