Investigación Clínica

La redacción de un trabajo científico

Detection of Human Papillomavirus in gingival fluid of Venezuelan HIV patients with periodontal disease

Evidencias sugieren que los virus pueden participar en la activación de la enfermedad periodontal, permitiendo el sobrecrecimiento de bacterias periodontopatógenas. El objetivo del estudio fué la detección molecular de VPH en fluido gingival (FG) de pacientes VIH+ con enfermedad periodontal. Se evaluaron muestras de FG de 20 pacientes VIH+ con enfermedad periodontal que asistieron al Centro de Atención de Pacientes con Enfermedades Infecciosas (CAPEI) de la Facultad de Odontología de la Universidad Central de Venezuela, 13 bajo terapia antirretroviral (HAART) y 7 VIH+ sin HAART. Se incluyeron 7 pacientes seronegativos con periodontitis crónica y como grupo control 7 pacientes seronegativos periodontalmente sanos. Se extrajo el ADN, se amplificó la región L1 de VPH con primers MY09 y MY11. Las muestras VPH+ fueron genotipificadas para los tipos 6, 11, 16, 18, 31 y 45. VPH fue detectado en 46% de los pacientes VIH+ bajo terapia. El contaje CD4+ en la población VPH+ no presentó diferencias con el grupo VPH-, y la carga viral mostró valores promedio significativamente mayores (200.470± 324.244 copias/mL) con respecto a los pacientes VPH- (10.246±23.805 copias/mL). Las muestras VPH+ presentaron los genotipos 6 y 11, de los cuales 66,6% estaban coinfectados con ambos tipos. Las condiciones periodontales no presentaron diferencias entre los individuos con doble infección viral por VPH y VIH, y los que solo portaban VIH. VPH fue detectado solamente en fluido gingival de pacientes VIH+ con HAART, indicando que esta terapia puede influir en el estado inmunológico independientemente de las condiciones periodontales.

Evidence suggests that viruses may be involved in the activation of periodontal disease, allowing the overgrowth of periodontal pathogens. The purpose of the present study was to detect the presence of Human Papillomavirus (HPV) in gingival crevicular fluid (GCF) in HIV+ Venezuelan patients with periodontal disease. We evaluated GCF samples from 20 HIV+ patients with periodontal disease from the Infectious Disease Center, Faculty of Dentistry, Central University of Venezuela, and were clinically examined to establish their periodontal conditions, 13 under HAART (antiretroviral therapy) and 7 without HAART. Seven seronegative patients with chronic periodontitis and 7 seronegative patients, without periodontal disease were included. DNA extraction was performed, the consensus primers MY09 and MY11 for the HPV L1 region were used for PCR amplification. Genotipification was made for the 6, 11, 16, 18, 31 and 45 genotypes. HPV were detected in 46% of HIV+ patients under therapy. The CD4 cell counts in the HPV+ patients were not significantly different from the HPV-group. The viral load in the HPV+ group was significantly higher (200,470 ± 324,244 copy/mL) than in the HPV- patients (10,246 ± 23,805 copy/mL). Genotypes 6 and 11 were observed in the HPV positive samples, of which 4/6 (66.6%) presented coinfection with both types. No significant differences in the periodontal conditions were observed between patients with HPV-HIV infection related to patients with only HIV. HPV was detected only in the gingival crevicular fluid of HIV+ patients under HAART independently of the periodontal conditions.

**Determination of the specificity of seric IgA produced in response to antigens of Leishmania (Leishmania) mexicana in murine leishmaniasis**

En la leishmaniosis experimental, la función de los anticuerpos no está completamente clara, ya que algunos autores consideran que dichas proteínas no participan en la protección contra la infección; sin embargo, estudios histopatológicos en lesiones con leishmaniosis humana y experimental, muestran infiltrados de células plasmáticas positivas para IgA y secreción de IgM, IgG e IgA que podrían mediar la formación de complejos inmunológicos con antígenos parasitarios o propios, favoreciendo la necrosis lo que conlleva a la eliminación del parásito. En este trabajo se determinó si la IgA sérica en el modelo murino posee reactividad específica contra antígenos de Leishmania (Leishmania) mexicana de utilidad diagnóstica. Para ello, se utilizaron ratones susceptibles y resistentes a leishmaniosis cutánea, demostrándose mediante ELISA indirecta que la IgA sérica de ratones susceptibles es elevada en comparación con la producida por ratones resistentes. Aunque otros estudios en modelos murinos demuestran que la IgG sérica de ratones infectados con L. (L) mexicana presenta reactividad cruzada con antígenos parasitarios no relacionados obtenidos de Trypanosoma cruzi, al analizar la especificidad de IgA por antígenos de L. (L) mexicana y T. cruzi, mediante Western Blot, se demostró que la IgA sérica de ratones infectados con T. cruzi también reaccionan con antígenos de L. (L) mexicana, estos hallazgos sugieren que la IgA puede ser útil para el manejo clínico y pronóstico de la enfermedad.

In experimental leishmaniasis, the role of antibodies is not entirely clear, as some authors consider that these proteins are not involved in protection against infection. However, histopathological studies in human and experimental leishmaniasis lesions, show plasma cell infiltrates positive for IgA and secretion of IgM, IgG and IgA could mediate the formation of immune complexes with parasite antigens or self components, favoring necrosis leading to the elimination of the parasite. In this study, we determined if the serum IgA in the murine model has specific reactivity against antigens of Leishmania (Leishmania) mexicana of diagnostic utility. To do this, we used mice either susceptible or resistant to cutaneous leishmaniasis, and demonstrated by indirect ELISA that serum IgA is elevated in susceptible mice compared with that produced by resistant mice. Although other studies in murine models show that the serum IgG from mice infected with L. (L) mexicana present cross reactivity with unrelated parasite antigens derived from Trypanosoma cruzi, the analysis of the specificity of IgA by antigens of L. (L) mexicana and T. cruzi, by Western Blot, showed that the IgA serum of mice infected with T. cruzi reacts too with antigens of L. (L) mexicana. These findings suggest that IgA may be useful for the clinical management and prognosis of the disease.

Use of warfarin and low range INR in the prevention of recurrent venous thrombosis

El objetivo de este trabajo fue determinar la efectividad de un rango de la Razón Normalizada Internacional (INR) entre 1,5 y 1,9 en la prevención de la recurrencia de trombosis venosa y de las complicaciones hemorrágicas asociadas al uso de warfarina. Entre enero del 2006 y noviembre del 2009, se estudiaron 39 pacientes, con edades entre 10 y 78 años y diagnóstico de trombosis venosa profunda y/o embolismo pulmonar que recibieron warfarina al menos durante 6 meses. Los sujetos fueron separados aleatoriamente en dos grupos: a 20 pacientes se le ajustó la dosis para mantener el INR entre 1,5 y 1,9 y a 19 pacientes se les mantuvo el INR entre 2 y 3. A cada individuo se le cuantificó la actividad plasmática de los factores II, VII, IX y X a la primera y entre la cuarta y quinta semanas, luego de estabilizado el INR. En ambos grupos, la actividad de los factores se encontró por debajo del valor normal con diferencia significativa entre los grupos (p<0,05). No se detectó recurrencia de trombosis durante el seguimiento. Solo se presentaron manifestaciones hemorrágicas menores en un sujeto con INR entre 1,5 y 1,9 y en cuatro del otro grupo (p = NS). Los resultados del presente trabajo sugieren que un rango de INR entre 1,5 y 1,9, provee un esquema de anticoagulación eficaz para la prevención de recurrencia de trombosis venosa con menor frecuencia de hemorragias. Sin embargo, es necesario seguir incorporando más individuos en el estudio para obtener mayor certeza en el análisis de estos resultados.

The object of this work was to determine the efficacy of a low range International Normalized Ratio (INR) between 1.5 and 1.9, in preventing recurrent venous thrombosis and the hemorrhagic manifestations that can complicate anticoagulation with warfarin. Thirty nine patients, 10 to 78 years of age were studied between January 2006 and November 2009. All of them had been treated with warfarin, for at least 6 months, due to deep venous thrombosis or pulmonary embolism. The subjects were separated, at random, into two groups. In group A (20 patients), the doses of warfarin were adjusted until the INR was stabilized between 1.5 and 1.9; in group B, the INR was maintained between 2 and 3. The coagulant activities of plasma factors II, VII, IX and X were determined in a week and between the fourth and fifth weeks, after stabilization of the INR. Plasma activities of the coagulation factors assayed were abnormally low in both groups, in the two opportunities they were determined, although significantly lower in group B (p<0.05). No thromboembolic episodes occurred during the study, in any of the patients. One of the patients from group A and four from group B, presented minor hemorrhagic manifestations (p N.S.) The above results suggest that a range on INR lower that 2, could be sufficient to prevent recurrent thrombotic episodes while diminishing the frequency of hemorrhagic complications associated with the use of warfarin. However, it is necessary to continue incorporating more individuals in the study to obtain greater certainty in the analysis of these results.

**Oxidative stress in soleus and extensor digitorum longus (EDL) muscles of spontaneously hypertensive rats**

Las enfermedades sistémicas crónicas afectan el músculo esquelético, siendo la inflamación y el estrés oxidativo algunos de los mecanismos involucrados. El efecto de la hipertensión arterial esencial sobre el músculo esquelético no es bien conocido. Se estudiaron los músculos soleo y extensor digitorum longus (EDL) de ratas espontáneamente hipertensas (SHR), comparadas con las controles normotensas Wistar Kyoto (WKY). Se determinaron los niveles de nitritos y nitratos en µmoles/mg-proteína; las sintasas del óxido nítrico: endotelial (eNOS); neuronal (nNOS); e inducible (iNOS), nitrotirosina y el factor de necrosis tumoral-alfa (TNF-α) en ng/mg-proteína. En las SHR, en el soleo y el EDL respectivamente, se incrementó la nitrotirosina (24,4 ± 5,0 vs. 3,3 ± 0,3, p<0,001; 20,2 ± 4,3 vs. 4,5 ± 0,4, p<0,0037), iNOS (26,6 ± 3,7 vs. 8,3 ± 0,9; 21,3 ± 3,7 vs. 11,0 ± 0,8 ambos p<0,0001), y TNF-α (2,2 ± 0,5 vs. 0,6 ± 0,1, p<0,05; 1,9 ± 0,2 vs. 0,6 ± 0,1, p<0,02); hubo disminución de eNOS en el soleo (20,6 ± 1,4 vs. 30,3 ± 1,2, p<0,00001); de nNOS (soleo 16,8 ± 1,4 vs. 20,7 ± 1,8, p< 0,05; EDL 13,6 ± 1,3 vs. 21,9 ± 1,8, p<0,005) y de nitrito en el EDL (5,8 ± 0,3 vs. 7,1 ± 0,5, p<0,026). En las SHR se observó correlación positiva entre TNF-α vs. nitrotirosina: soleo (r=0,798; p<0,031) y tendencia en EDL (r=0,739; p<0,057); iNOS vs. nitrotirosina (soleo: r=0,908 p<0,0001; EDL: r=0,707; p=0,01), tendencia entre TNF-α vs. iNOS en EDL (r=0,736; p=0,059); y correlación negativa entre eNOS vs. nitrotirosina en soleo (r=-0,816; p=0,0012). En conclusión, las SHR presentan un proceso inflamatorio muscular, evidenciado por el incremento de TNF-α, nitrotirosina, e iNOS. La disminución de las sintasas constitutivas, con incremento de la iNOS es evidencia de la disfunción endotelial.

Systemic diseases affect skeletal muscle, and inflammation and oxidative stress are some of the involved mechanisms. There is scarce information about the effects of essential hypertension on skeletal muscle. The soleus and extensor digitorum longus (EDL) muscles of spontaneously hypertensive rats (SHR) were studied compared to control Wistar Kyoto (WKY) rats. The levels of nitrite and nitrate in µmol/mg-protein; endothelial (eNOS), neuronal (nNOS), and inducible (iNOS) nitric oxide synthases, nitrotyrosine and tumour necrosis factor alpha (TNF-α) in ng/mg-protein were determined. Compared with controls, the SHR showed increased levels of nitrotyrosine (soleus 24.4 ± 5.0 vs. 3.3±0.3, p<0.001; EDL 20.2 ± 4.3 vs. 4.5 ± 0.4, p<0.0037), iNOS (soleus 26.6 ± 3.7 vs. 8.3 ± 0.9; EDL 21.3 ± 3.7 vs. 11.0 ± 0.8, both p<0.0001) and TNF-α (soleus 2.2 ± 0.5 vs. 0.6 ± 0.1, p<0.05; EDL 1.9 ± 0.2 vs. 0.6 ± 0.1, p<0.02). A decrease of eNOS was found in soleus muscle (20.6 ± 1.4 vs. 30.3 ± 1.2, p<0.00001); of nNOS (soleus 16.8 ± 1.4 vs. 20.7 ± 1.8, p< 0.05; EDL 13.6 ± 1.3 vs. 21.9 ± 1.8, p<0.005) and nitrite in EDL (5.8 ± 0.3 vs. 7.1 ± 0.5, p<0.026).There was a positive correlation between TNF-α vs. nitrotyrosine in soleus (r=0.798; p<0.031) and a tendency in EDL (r=0.739; p=0.059); iNOS vs. nitrotyrosine (soleus: r=0.908; p<0.0001; EDL: r=0.707; p<0.01), a tendency between TNF-α and iNOS (EDL: r=0.736; p<0.059); and a negative correlation between eNOS vs. nitrotyrosine in soleus muscle (r=-0.816; p<0.0012). In conclusion, in skeletal muscles of SHR an inflammatory process was found evidenced by the increase in TNF-α, nitrotyrosine and iNOS. The decreased levels of constitutive synthases, together with the higher level of iNOS, are indicative of endothelial dysfunction.

Effectiveness of melatonin in tardive dyskinesia

Tardive Dyskinesia (TD) is a movement disorder associated with the clinical administration of antipsychotics. It is believed that TD is due, among other factors, to an increase in the oxidative damage produced by free radicals. Antioxidants, like vitamin E, have been used in the treatment of TD but there is no evidence of their effectiveness. Melatonin (MEL) is 6 to 10 times more effective, as an antioxidant, than vitamin E and it has been used with an apparent higher effectiveness in the treatment of TD, although the results have not been conclusive. A randomized, double blind, placebo controlled design was used to determine the effectiveness of MEL (20mg/day) during 12 weeks in 7 patients with TD. Six patients with TD were treated with placebo. The Abnormal Involuntary Movement Scale (AIMS) was chosen to assess the severity of TD initially and after 4, 8 and 12 weeks. The psychiatric evaluation was done following the Brief Psychiatric Rating Scale. In two patients treated with MEL a significant improvement (more than 60%) of the values of AIMS was detected. In the remainder five, as well as in the patients treated with placebo, no difference was observed during the 12 weeks. When compared the AIMS score in all the MEL-treated patients with the values in the placebo-treated patients, no significant differences were detected during the 12 weeks of the study. However, the significant clinical improvement observed in two patients must be considered before reaching a final conclusion on the usefulness of MEL in TD.

La Discinesia Tardía (DT) es un trastorno de los movimientos asociado al uso crónico de antipsicóticos que parece producirse, entre otros factores, por un incremento en los procesos oxidativos. La vitamina E se ha utilizado en su tratamiento, pero no hay evidencia de su efectividad. Como la melatonina (MEL) es 6 a 10 veces más efectiva como antioxidante que la vitamina E, se ha utilizado con una aparente mayor efectividad, aunque los resultados no han sido concluyentes. Se realizó un estudio doble ciego, al azar y controlado con placebo, para determinar la efectividad de la administración de la MEL durante 12 semanas en 7 pacientes con DT. Seis pacientes con DT fueron tratados con placebo. La Escala de Movimientos Involuntarios Anormales (AIMS) se usó para evaluar la evolución de los movimientos al inicio y a las 4, 8 y 12 semanas de tratamiento. La evaluación clínica psiquiátrica se hizo con la Escala Breve de Evaluación Psiquiátrica. En dos pacientes tratados con MEL se observó una mejoría clínica superior al 60% pero en los restantes, así como en los tratados con placebo los valores de la AIMS no variaron significativamente en el transcurso de las 12 semanas. Cuando se compararon los valores de la AIMS de la totalidad de los pacientes tratados con MEL, con los del grupo placebo, no se detectó ninguna diferencia significativa. Sin embargo, la mejoría clínica significativa de dos de los pacientes estudiados debe considerarse para llegar a una conclusión sobre la utilidad de la MEL en la DT.

Pearson syndrome: Case report

Entre las etiologías de anemias en la infancia, las citopatías mitocondriales son poco frecuentes. El síndrome de Pearson se diagnostica principalmente durante etapas iniciales de la vida y es caracterizado por anemia sideroblástica refractaria con vacuolización de células progenitoras en la médula ósea, disfunción del páncreas exocrino y variables alteraciones neurológicas, hepáticas, renales y endocrinas. En el siguiente informe reportamos un nuevo caso de lactante mayor femenino de 14 meses de edad, evaluada de forma multicéntrica con diagnostico clínico y molecular de síndrome de Pearson, con la deleción común de 4.977 pares de bases del ADN mitocondrial. Esta entidad ha sido asociada a diversos fenotipos dentro del amplio espectro clínico de las enfermedades mitocondriales.

Among the etiologies of anemia in the infancy, the mitochondrial cytopathies are infrequent. Pearson syndrome is diagnosed principally during the initial stages of life and it is characterized by refractory sideroblastic anemia with vacuolization of marrow progenitor cells, exocrine pancreatic dysfunction and variable neurologic, hepatic, renal and endocrine failures. We report the case of a 14 month-old girl evaluated by a multicentric study, with clinic and molecular diagnosis of Pearson syndrome, with the 4,977-base pair common deletion of mitochondrial DNA. This entity has been associated to diverse phenotypes within the broad clinical spectrum of mitochondrial disease.

Melanosis of the vagina and human papillomavirus infection, an uncommon pathology: Case Report

Benign melanotic lesions of the vagina are uncommon and only a few cases have been reported in the literature. A 34-year-old woman was referred because of a Vaginal Intraepithelial Neoplasia 1 biopsy result. On the gynecological examination, two different hyperpigmented areas were noted in the vagina. The colposcopic visualization of the cervix and vagina found an aceto-white lesion at the right lateral wall of the upper third of the vagina. Biopsies from three areas were taken. Histological study reported a melanosis of the vagina and HPV infection. An immunohistochemical panel of epithelial markers was performed in vaginal samples, such as Cytokeratin AE1/AE3 and epithelial membrane antigen, mesenchymal marker: vimentin; melanocytic makers: protein S-100 and HMB45 (Human Melanoma Black); proliferating cell marker: proliferating cell nuclear antigen (PCNA), and P-53 oncoprotein. High Risk (16, 18, 31, 45) and Low Risk (6, 11) HPV types were studied by In Situ Hybridization using the same vaginal samples. CK, EMA and Vimentin were 2+. Melanocytic markers, HMB45 and S100, and PCNA were 1+ in basal cell layer. P-53 was negative. The melanotic tissue and acetowhite lesion were positives to HPV Types 6,11. In conclusion, melanosis of the vagina is a uncommon benign pathology. Usually, melanosis is present in women over 40 years old. We present a case of melanosis of the vagina in a young woman infected with low-risk HPV types and review the literature.

Las lesiones melanóticas de la vagina son infrecuentes. y Solo pocos casos han sido reportados. Se presenta el caso de una mujer de 34 años quien es referida con diagnóstico de una Neoplasia Intraepitelial Vaginal 1. Al examen ginecológico, se encontraron dos áreas hiperpigmentadas en la vagina. La exploración colposcópica del cuello uterino y vagina reveló la presencia de una lesión aceto-blanca en la pared lateral derecha del tercio superior de la vagina. Muestras de biopsias fueron tomadas en dichas áreas. El estudio histológico reportó una melanosis de la vagina y una infección por el virus del Papiloma Humano (VPH). Se realizó un panel de estudio inmunohistoquímico de marcadores epiteliales en las muestras vaginales: tales como citoqueratina AE1/AE3 y antígeno epitelial de membrana; marcador mesenquimal: vimentin; marcadores melanóticos: proteina S-100 y HMB45 (Human Melanoma Black); marcadores de proliferación celular: antígeno de proliferación nuclear (PCNA), y la oncoproteína P-53. Se realizó Hibridización In Situ para establecer los tipos de alto (16, 18, 31, 45) y bajo (6, 11) riesgo de VPH en las muestras vaginales. Los marcadores CK, EMA y Vimentin fueron 2+. Los marcadores melanótico, el HMB45 y el S100, y el PCNA fueron 1+ en la capa basal. P-53 fue negativo. El tejido melanótico y la lesión acetoblanca fueron positivos al VPH 6,11. En conclusión, la melanosis vaginal es una patología poco frecuente. Usualmente, se ha reportado en mujeres mayores de 40 años. Presentamos un caso de una melanosis de la vagina infectada con un tipo de VPH de bajo riesgo en una mujer joven y una revisión de la literatura.

Relevance of apoptosis in the female reproductive system

La apoptosis es un proceso genéticamente controlado mediante el cual las células inducen su propia muerte. Mensualmente y en forma cíclica, el ovario, el endometrio y la glándula mamaria atraviesan por ciclos de proliferación celular y apoptosis respondiendo a los cambios en la secreción hormonal. Durante el desarrollo embrionario, la apoptosis está implicada en procesos relacionados con la escultura de los diferentes órganos, a través de la eliminación de estructuras innecesarias y con el control de las células defectuosas. Asimismo, la apoptosis juega un papel fundamental en la función ovárica. La reserva folicular se establece durante la vida fetal y luego se va eliminando gradualmente. La apoptosis está involucrada tanto en la muerte celular durante el proceso de reclutamiento del folículo dominante, como en la luteólisis. Durante la pubertad la apoptosis contribuye a la formación del espacio luminal de los ductos terminales de la mama. A su vez, el proceso de involución mamaria luego de la lactancia se caracteriza por una apoptosis masiva de las células epiteliales secretoras. Así como la apoptosis está involucrada en los cambios fisiológicos que ocurren a nivel endometrial, también se ha asociado a la muerte celular programada con procesos patológicos, especialmente en aquellos caracterizados por el incremento en el crecimiento celular como es el caso de la endometriosis. El delicado balance entre la apoptosis y la proliferación celular es fundamental ya que permite que los tejidos puedan responder en forma cíclica a los cambios hormonales fisiológicos y prevenir procesos de transformación neoplásica.

Apoptosis is a genetically controlled form of cell suicide. Due to the cyclic nature of the female reproductive system, the ovary, the endometrium and the mammary gland sustain continuous cycles of cell growth and apoptosis in response to hormonal changes. Apoptotic cell death plays multiple roles during embryonic and organ development. It is involved in sculpturing tissues and serves to delete structures that are no longer required. It is clear that apoptosis plays an active and important role in ovarian physiological functions. Apoptosis plays a major role during folliculogenesis and dominant follicle selection and also plays part in corpus luteum regression. In addition, it has been shown that programmed cell death plays important roles in the mammary gland development and ductal morphogenesis. During puberty, lumen formation is associated with the selective apoptosis of centrally located cells. In turn, postlactational involution of the mammary gland is characterized by the secretory epithelial cells undergoing programmed cell death. Apoptosis has also been associated with physiological, as well as pathological, endometrial processes such as cancer and endometriosis. The delicate balance between apoptosis and cell proliferation is essential in controlling the cyclical growth of the reproductive tissues and plays an important role in the prevention of neoplastic transformation.