Investigación Clínica

Diagnóstico microscópico de amibiasis: Método obsoleto pero necesario en el mundo en desarrollo

Pesticide residues in drinking water of an agricultural community in the state of Mérida, Venezuela

El objetivo del presente trabajo fue determinar la presencia de plaguicidas en agua potable, provenientes de seis acueductos en una región de intensa actividad agrícola del Estado Mérida, Venezuela. El estudio fue realizado durante cuatro semanas continuas, entre mayo y junio de 2008. Los residuos de plaguicidas fueron analizados mediante extracción en fase sólida y HPLC con detector de arreglo de diodos. El método SPE-HPLC-DAD cumplió con los criterios de validación analítica: linealidad (R²: 0,9840-0,9999), precisión (coeficiente de variabilidad inter-día 1,47-6,25%), exactitud (desviación estándar relativa 0,9-9,20%) y sensibilidad (límite de detección ≤ 0,012 µg/L; límite de cuantificación ≤ 0,030 µg/L, excepto mancozeb con 0,400 µg/L). Siete de los trece plaguicidas seleccionados tienen un porcentaje de recuperación entre 100% y 70%, el resto, entre 61% y 37%. En 72 muestras analizadas, se detectaron diez plaguicidas de los grupos químicos: organofosforados, carbamatos, triazinas y derivados de urea. Los plaguicidas con mayor frecuencia de detección fueron: carbofuran y atrazina (39%), malation (25%), dimetoato y metribuzin (19%). Los plaguicidas que se encontraron en niveles más altos fueron: diazinon (26,31 µg/L), metamidofos (10,99 µg/L), malation (2,03 µg/L) y mancozeb (1,27 µg/L). Los niveles de plaguicidas no superaron los valores máximos permitidos por la Legislación Venezolana, sin embargo, fueron superiores al nivel máximo permitido por la Unión Europea y EPA-USA. Este estudio demuestra la urgente necesidad de hacer un monitoreo sistemático de la calidad del agua para consumo humano en las regiones de alta productividad agrícola.

The aim of this study was to determine the presence of pesticides in drinking water from six aqueducts in a region of intense agricultural activity in the state of Merida, Venezuela. The study was conducted for four continuous weeks, between May and June 2008. Pesticide residues were analyzed by solid phase extraction (SPE) and liquid chromatography (HPLC) with diode array detector (DAD). The method SPE-HPLC-DAD met the criteria of analytical validation, with good linearity (R²: 0.9840 to 0.9999), precision (coefficient of inter-day variability from 1.47 to 6.25%), accuracy (relative standard deviation 0.9 to 9.20%) and sensitivity (LOD ≤ 0.012 µg/L; LOQ ≤ 0.030 µg/L, except mancozeb with 0.400 µg/L). Seven of the thirteen selected pesticides have a recovery rate between 100% and 70%, the rest between 61% and 37%. Ten pesticides of the following chemical groups, were detected in 72 samples analyzed: organophosphates, carbamates, triazines and urea derivatives. The pesticides with the highest frequency of detection were: carbofuran and atrazine (39%), malathion (25%), dimethoate and metribuzin (19%). The pesticides found at high levels were diazinon (26.31 µg/L), methamidophos (10.99 µg/L), malathion (2.03 µg/L) and mancozeb (1.27 µg/L). Pesticide levels did not exceed the maximum allowed by Venezuelan law, however, according to international standards (EU and EPA-USA) values were above the maximum permissible levels. This study demonstrates the urgent need for systematic monitoring of the quality of water for human consumption in regions of high agricultural productivity.

**In vitro synergisms among hydrazones, ajoeno and posaconazole against Cryptococcus spp**

El objetivo de este trabajo fue estudiar la susceptibilidad in vitro de aislados de Cryptocococus spp con una nueva clase de antifúngicos, hidrazonas esteroidales y comparar su actividad antifúngica en combinación con ajoeno y posaconazol contra aislados de Cryptococcus spp. Se utilizaron tres aislados del género Cryptococcus 42794, 4050 y 44192 y se evaluaron su sensibilidad y efectos sinérgicos con las hidrazonas esteroidales, ajoeno y posaconazol, según el documento M27-A2 del CLSI. Se incluyeron las cepas Candida albicans (ATCC 90028) y Candida parapsilosis (ATCC 22019) como controles. Se observó con las hidrazonas (H1, H2, H3, H4) un efecto plateau a partir de 10 µM (CMI). Sin embargo, con la H4 se obtuvo bajo porcentaje de inhibición del crecimiento. Con el ajoeno, se obtuvieron valores de CMI de 25 y 50 µM. El posaconazol mostró altos valores de inhibición y un valor de CMI de 6 µM para 42794 y 44192 y un CMI de 20 µM para el aislado 4050. Se obtuvieron efectos sinérgicos al combinar posaconazol con ajoeno, ajoeno con hidrazona 3 y posaconazol con hidrazona 3. Los valores de concentración inhibitoria fraccional fueron de 0,24; 0,16 y 0,09 respectivamente, indicando un marcado efecto sinérgico. Se obtuvieron efectos sinérgicos importantes entre el posaconazol con ajoeno, ajoeno con hidrazona 3 y posaconazol con hidrazona 3, lo cual sería muy útil para futuros estudios clínicos.

The aim of this study was to assess the in vitro susceptibility to novel antifungal compounds, the steroidal hydrazones, and to compare their antifungal activity and synergistic effects with other compounds, such as ajoeno and posaconazole on Cryptocococus spp isolates. Three Cryptococcus strains were used for this study (42794, 4050 and 44192) and their antifungal sensitivity and synergistic effects with ajoeno and posaconazole were evaluated according to the CLSI protocol number M27-A2. Candida albicans (ATCC 90028) and Candida parapsilosis (ATCC 22019) were used as controls. A plateau effect with hydrazones (H1, H2, H3, H4) was observed after 10 µM (CMI). However, with H4 only a mild inhibition on the growth was obtained. Combining hydrazone and ajoeno, CMI values between 25 and 50 µM were obtained. The highest inhibitions values were obtained with posaconazole and a CMI value of 6 µM for the strains 42794 and 44192, and a CMI value of 20 µM for the strain 4050. Synergy was observed combining posaconazole with ajoeno, ajoeno with hydrazone 3 and posaconazole with hydrazone 3. Fractional inhibitory concentrations were 0.24, 0.16 and 0.09 respectively, which might indicate a synergistic effect. Important synergistic effects were obtained with posaconazole and ajoeno, ajoeno and hydrazone 3 and posaconazole with hydrazone 3, which would be very useful for clinical trials in the future.

Cardiovascular risk: initial estimation in the study cohort CDC of the Canary Islands in Venezuela

En Venezuela como en Canarias (España), la enfermedad cardiovascular es causa importante de morbilidad y de mortalidad. Para estimar el riesgo cardiovascular en adultos de origen canario residentes en Venezuela, reclutamos la cohorte CDC de Canarias en Venezuela entre Junio 2.008 y Agosto 2.009. En 452 individuos (54,9% mujeres), entre 18 y 93 años se realizó una encuesta de datos y se midió su talla, peso, presión arterial, circunferencias de abdomen y cadera; previo ayuno de 12 horas, se determinó glucemia y perfil lipídico. 40,5% de los sujetos era mayor de 65 años mientras el grupo joven (18-30 años) era el 8%. En los varones la edad fue 57,69±18,17 años y el índice de masa corporal 29,39±5,71 Kg/m²; en las mujeres 56,50±16,91 años y 28,20±5,57 Kg/m², respectivamente. La prevalencia de síndrome metabólico fue de 49,1%, la suma de sobrepeso y obesidad 75,2%, obesidad abdominal 85,4%, diabetes 17,4%, glucemia alterada en ayunas (GAA) 12,2%, presión arterial elevada 52,9%, HDL-colesterol bajo 53,8% y trigliceridemia elevada 31%. Un tercio de los participantes sin diabetes ni GAA, mostró un índice triglicéridos/HDL-colesterol alto, lo que indica insulino-resistencia. Se concluye que la comunidad de canarios residentes en Venezuela presenta alta prevalencia de factores de riesgo cardiovascular (malnutrición por exceso, obesidad abdominal, dislipemia y diabetes). Respecto a la actual población de Canarias presentan menor frecuencia de GAA y mayor de HDL Colesterol bajo. Respecto a Venezuela presentan menor frecuencia de GAA, de HDL colesterol bajo y de trigliceridemia elevada que los descritos en el estado Zulia.

In Venezuela as in the Canary Islands (Spain), cardiovascular disease is a major cause of morbidity and mortality. The purpose of this research is to estimate the cardiovascular risk in the Canary Islands migrants living in Venezuela and participating in the study cohort CDC of the Canary Islands in Venezuela. 452 individuals, aged 18 to 93 years (54.9% women), were enrolled between June 2008 and August 2009. A data survey was performed and their weight, height, abdomen and hip circumferences, and blood pressure were measured. After a 12-hour fasting period, a blood sample was obtained for glucose and lipid profile determinations. 40.5% of the subjects were over 65 years of age and 8% corresponded to the younger group (18-30 years). In men, the average age was 57.69±18.17 years and the body mass index 29.39 ± 5.71 kg/m², whereas women were 56.50±16.91 years and 28.20±5.57 kg/m², respectively. The prevalence of metabolic syndrome was 49.1%, overweight and obesity together 75,2%, abdominal obesity 85.4%, diabetes 17.4%, impaired fasting glucose (IFG) 12.2%, elevated blood pressure 52.9%, low HDL-cholesterol 53,8% and elevated serum triglycerides 31%. Among subjects without diabetes or IFG, a third showed a high triglycerides/HDL-cholesterol ratio, indicating insulin resistance. We conclude that the Canarian-Venezuelan community suffers high prevalence of cardiovascular risk factors (obesity, abdominal obesity, dyslipidemia, diabetes). In relation to the current population of the Canary Islands, they show a lower frequency of IFG and a higher frequency of low HDL-cholesterol. In comparison to the Venezuelan population (Zulia), they showed to have lower prevalence of IFG, low HDL cholesterol and elevated triglycerides.

Analysis of microdeletions in 22q11 in Colombian patients with congenital heart disease

Los defectos cardiacos conforman las malformaciones congénitas más frecuentes, con una incidencia que se ha estimado entre 4 y 12 por 1000 en recién nacidos vivos. Estos tienen una etiología multifactorial en la que convergen la predisposición genética y los factores ambientales. A partir de 1990 se ha relacionado este tipo de patologías con microdelección 22q11. Se determinó la frecuencia de la microdeleción 22q11 en pacientes con cardiopatía congénita no sindrómica. Se analizaron 61 pacientes con cardiopatía congénita, a partir de ADN de sangre periférica y posterior amplificación, mediante PCR multiplex del gen TUPLE1 y del STR D10S2198, visualización electroforesis en geles de agarosa y análisis densitométrico para determinar dosis génica. Se encontraron 3 pacientes con microdeleción 22q11, para una frecuencia de 4,9%. Esta microdeleción se asoció en dos de los casos a Tetralogía de Fallot y en el otro a Defecto Septal Atrial (DSA). En conclusión, la frecuencia de microdeleción 22q11 en la población analizada es de 4,9%. Dentro de los casos de Tetralogía de Fallot, la microdeleción estaba presente en el 7,4% y en los DSA corresponde al 11,1%.

Cardiac defects are the most frequent congenital malformations, with an incidence estimated between 4 and 12 per 1000 newborns. Their etiology is multifactorial and might be attributed to genetic predispositions and environmental factors. Since 1990 these types of pathologies have been associated with 22q11 microdeletion. In this study, the frequency of microdeletion 22q11 was determined in 61 patients with non-syndromic congenital heart disease. DNA was extracted from peripheral blood and TUPLE1 and STR D10S2198 genes were amplified by multiplex PCR and visualized in agarose gels. Gene content was quantified by densitometry. Three patients were found with microdeletion 22q11, representing a 4.9% frequency. This microdeletion was associated with two cases of Tetralogy of Fallot and a third case with atrial septal defect (ASD). In conclusion, the frequency for microdeletion 22q11 in the population analyzed was 4.9%. The cases that presented Teratology of Fallot had a frequency for this microdeletion of 7.4% and for ASD of 11.1%.

Comparative analysis of three methods for HPV DNA detection in cervical samples

High risk HPV infection is considered to play a central role in cervical carcinogenesis. HPV DNA testing has shown to be a very useful tool for screening and following cervical infections. The aim of this study was to compare three methods for HPV DNA detection, along with cytology and colposcopy analysis. Cervical samples were collected from 100 sexually active women in Mérida, western Venezuela. HPV infection was screened using Hybrid-Capture 2 (HC2), L1-Nested-PCR and E6/E7-PCR assays. 40% of the samples (40/100) were HPV positive by at least one of the DNA detection methods. HC2 detected HPV in 12% specimens. L1- and E6/E7-PCRs showed 50% sensitivity and 77% specificity.The agreement rate between HC2 and both PCR assays was 65%. Kappa value showed moderate concordance between HC2 and both PCR methods (κ=0.55; CI 95%). Also moderate concordance was seen when L1- and E6/E7-PCRs were compared (κ=0.48; CI 95%). There was a significant association between the Schiller test and E6/E7-PCR (p=0.006) for HPV infection. An acceptable agreement between all three assays for HPV detection was observed. Nevertheless, different PCR formats need to be further analyzed in order to make the right choice of method for HPV testing.

La infección con VPH de alto riesgo es el principal factor etiológico asociado al desarrollo de carcinogénesis cervical y las pruebas de detección de ADN-VPH han mostrado ser una herramienta esencial para la pesquisa y seguimiento de estas infecciones. El objetivo del estudio ha sido comparar tres métodos para la detección del ADN viral, en combinación con los análisis colposcópico y citológico. Se obtuvieron muestras cervicales de 100 mujeres sexualmente activas, en Mérida, Venezuela. La detección de infecciones por VPH se realizó por Captura Híbrida 2 (CH2) y los ensayos de PCR L1-Nested-PCR y E6/E7-PCR. 40% de las muestras (40/100) fueron positivas para VPH por al menos uno de los métodos aplicados. 12% de las muestras analizadas fueron positivas para VPH por CH2. Las dos PCR utilizadas mostraron un 50% de sensibilidad y 77% de especificidad. La coincidencia observada entre CH2 y las dos PCR fue del 65%. La determinación del valor Kappa mostró una concordancia moderada entre CH2 y ambos métodos de PCR (κ=0,55; CI 95%). También existió concordancia moderada al comparar las PCR de las regiones L1 y E6/E7 de VPH (κ=0,48; CI 95%). Hubo una asociación significativa entre el resultado del test de Schiller y la PCR E6/E7 (p=0,006) para la infección por VPH. Se determinó una concordancia aceptable entre los tres métodos aplicados para la detección de VPH; sin embargo, las PCR deben ser analizadas en trabajos futuros con el fin de establecer las pruebas más adecuadas para la detección viral.

Pulmonary actinomycosis: Fine needle aspiration diagnostic

Se presentan 4 casos de actinomicosis pulmonar en pacientes mayores de 40 años, 2 de ellos con enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC), que mostraron un aumento de la tos productiva, episodios de disnea, hemoptisis y fiebre de larga evolución. En las radiografías de tórax de rutina se observaban imágenes segmentarias de consolidación aérea, sugestivas de cuadros neumónicos no resueltos o neoplasia. La tomografía axial computarizada (TAC) mostró hallazgos similares a los anteriores. Los cultivos de esputo y las pruebas de Mantoux fueron repetidamente negativos. Debido a la mala evolución de los pacientes y a los hallazgos radiológicos, se practicó una punción-aspiración con aguja fina (PAAF) para descartar neoplasia. En la citología se observaron conglomerados tridimensionales, de bordes filamentosos y aspecto algodonoso compatibles con Actinomyces. El tratamiento antibiótico produjo la mejoría del cuadro clínico y el seguimiento demostró la desaparición de las opacidades radiológicas. Actualmente, la actinomicosis pulmonar es infrecuente y la sintomatología inespecífica, por lo que puede confundirse con procesos neoplásicos. Por tanto, en pacientes con factores de riesgo, síntomas de neumonía subaguda e imágenes radiológicas de consolidación del parénquima es aconsejable considerar la posibilidad de actinomicosis pulmonar. Es una enfermedad tratable y su correcto diagnóstico mediante la PAAF evita al paciente pruebas diagnósticas más agresivas, retrasos en el diagnóstico y le permite una cura completa con tratamiento antibiótico.

We present four cases of pulmonary actinomycosis in patients over 40 years of age, two of them with chronic obstructive pulmonary disease (COPD), showing an increase in productive cough, episodes of dyspnea, hemoptysis and long-term fever. Routine chest radiographs revealed segmental air-space consolidation, suggestive of unresolved pneumonia or neoplasm. Computed tomography (CT) scan showed similar findings to the ones previously described. Sputum cultures for mycobacteriae and Mantoux tests were constantly negative. Due to the poor clinical and radiodological outcome of the patients, a fine needle aspiration (FNA) was made to rule out a neoplasm. Tridimensional filamentous colonies of Actinomyces were observed in cytology. Antibiotic treatment resulted in an improvement of symptoms. The follow-up showed a decrease of the consolidation areas. Pulmonary actinomycosis is rare nowadays and clinical symptoms are unspecific and can be confused with a neoplasm process. Therefore, in patients with risk factors, symptoms of subacute pneumonia and radiologic findings of consolidation, it is advisable to consider pulmonary actinomycosis as a diagnostic possibility. It is a treatable disease and its correct diagnosis by FNA, avoids performing invasive diagnostic tests, delays in the diagnosis and allows for a complete cure by antibiotic therapy.

Immunological correlates of cure in the first American Cutaneous Leishmaniasis patient treated by immunotherapy in Argentina: A case report.

A patient with localized cutaneous leishmaniasis due to Leishmania (Leishmania) amazonensis infection was treated with an antigen containing heat-killed L. (L.) amazonensis promastigotes plus BCG. Expression of T-cell differentiation, memory and senescence receptors markers were analyzed on T cell subpopulations, in order to establish the correlation between the percentages of expression of these receptors and his clinical status, at different stages of his follow up. The following case reports on the achievement of a successful clinical outcome with complete resolution after receiving immunotherapy. A thorough clinical and immunological follow up supporting the healing process of this patients lesion is presented in detail.

Un paciente con leishmaniasis cutánea localizada producida por Leishmania (Leishmania) amazonensis fue tratado con un antígeno compuesto por promastigotes de L. (L.) amazonensis muertos por calor combinado con BCG. Se analizó la expresión de distintos receptores de diferenciación, de memoria y de senescencia en las subpoblaciones de células T, con el fin de establecer una relación entre los porcentajes de expresión de dichos receptores y la clínica del paciente en diferentes momentos del seguimiento. Se reporta en este caso un resultado exitoso, con resolución completa de la lesión después de recibir la inmunoterapia, y se presenta en detalle un seguimiento clínico e inmunológico completo durante el proceso de curación.

Prostate Cancer and Apoptosis

El cáncer de próstata presenta una progresión andrógeno-dependiente mediada por el receptor de andrógeno (AR), por lo que el bloqueo androgénico es la terapia estándar para su tratamiento en estado avanzado. Sin embargo, a pesar de una sensibilidad inicial, estos cánceres usualmente evolucionan hacia un estado hormono-resistente. Esta resistencia puede ser debida a una amplificación del gen AR, a sus mutaciones y al aumento en la expresión de proteínas co-activadoras. Igualmente, el receptor AR puede permanecer activo, independientemente de la fijación del ligando por fosforilación de factores de crecimiento y de citosinas. Adicionalmente, hay otras posibles vías independientes del receptor AR, como lo ejemplifica la adquisición del fenotipo neuroendocrino. En esta revisión se examinan tanto los mecanismos moleculares involucrados en la progresión del cáncer de próstata así como la forma en que sus células evaden la apoptosis.

Prostate cancer presents an androgen-dependent growth mediated by the androgen receptor (AR). Androgen pathway blockage is the standard therapy for the treatment of prostate cancer at an advanced stage. In spite of an initial sensitivity, prostate cancer usually becomes refractory to hormone treatment. This resistance can be due to the amplification of the AR gene, AR mutations and the increase in co-activator protein expression. Likewise, growth factors and cytokines can induce AR phosphorylation, independently of ligand fixation. Moreover, there are other AR-independent pathways, such as the acquisition of the neuroendocrine phenotype. In this review, we examine the molecular mechanisms that are involved in the progression of prostate cancer, as well as the ways its cells evade apoptosis.