Investigación Clínica

**La neuromatrix y su importancia en la neurobiología del dolor**

**Serological diagnosis of sporotrichosis using an antigen of Sporothrix schenckii sensu stricto mycelium**

En este estudio se desarrolló y se evaluó el ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA), para la detección de anticuerpos en sueros de pacientes con esporotricosis, para lo cual se empleó un antígeno crudo de Sporothrix schenckii sensu stricto obtenido a partir de la forma micelial. Los sueros positivos para esporotricosis fueron ensayados por otras técnicas serológicas: inmunodifusión doble (IDD) y contrainmunoelectroforesis (CIE). El ensayo fue validado utilizando sueros de otras patologías como histoplasmosis, paracoccidioidomicosis, tuberculosis, leishmaniasis, lupus y sueros de individuos sanos como controles negativos. Se encontró una especificidad de 100 % con las técnicas utilizadas y una sensibilidad del antígeno de S.schenckii sensu stricto, por encima del 98% para IDD, CIE y ELISA. Estos resultados demuestran la alta sensibilidad y especificidad del antígeno de S. schenckii sensu stricto, para el diagnóstico de la esporotricosis, empleando las técnicas de IDD, CIE y ELISA. Los resultados sugieren, que este antígeno podría ser usado en conjunto con otras pruebas convencionales para el diagnóstico diferencial y puede ser útil para monitorizar la evolución de la enfermedad y respuesta al tratamiento.

We developed and analyzed an Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) in order to detect antibodies in sera from sporotrichosis patients. We used a crude antigen of Sporothrix schenckii sensu stricto, obtained from the mycelial phase of the fungi. Positive sera were analyzed by other serological techniques such as double immunodiffusion (IGG) and counterimmunoelectrophoresis (CIE). The assay was validated by using sera from patients with other pathologies such as: histoplasmosis, paracoccidioidomycosis, tuberculosis, leishmaniasis, lupus and healthy individuals as negative controls. For the Sporothrix schenckii sensu stricto antigen, we found a 100% of specificity by every technique and sensitivity higher than 98% with IDD, CIE and ELISA. Our results show a high sensitivity and specificity for the Sporothrix schenckii sensu stricto antigen, so it can be used for IDD, CIE and ELISA. The results suggest that this antigen could be used in conjunction with other conventional tests for differential diagnosis and may be useful for monitoring the disease progression and response to treatment.

Effects of occupational exposure to pesticides on semen quality of workers in an agricultural community of Merida state, Venezuela.

Numerosos estudios informan de los efectos adversos de plaguicidas sobre la salud reproductiva masculina. Los objetivos de este estudio fueron investigar si existe una relación entre exposición ocupacional a plaguicidas y la calidad del semen, y determinar si la exposición crónica a plaguicidas afecta diferencialmente la calidad del semen de trabajadores de diferentes edades. Se realizó un estudio comparativo entre 64 agricultores y 64 hombres control. Los trabajadores agrícolas fueron entrevistados para determinar su historia ocupacional, particularmente las actividades que pueden involucrar exposición a plaguicidas. Se evaluaron los parámetros seminales y se hizo un análisis comparativo entre el grupo expuesto y control, así como entre los grupos de edad 18-29, 30-37 y 38-60 años. Se encontraron alteraciones significativas de algunos parámetros del semen en el grupo expuesto, tales como: disminuciones en la concentración, motilidad lenta progresiva e integridad de membrana espermática; a su vez, incrementos en eosina Y positiva e índice de fragmentación del DNA espermático. Los resultados obtenidos por grupo de edad mostraron diferencias significativas entre los grupos expuesto y control, para los parámetros de integridad de membrana, eosina Y positiva e índice de fragmentación del DNA espermático, siendo el grupo expuesto entre 18-29 años el que mostró mayores casos alterados de estos parámetros. Los resultados de este estudio comprueban que la exposición ocupacional a plaguicidas está asociada con alteraciones en la calidad espermática, creando riesgo para la capacidad reproductiva de los trabajadores del campo.

Numerous studies report adverse effects of pesticides on male reproductive health. The objectives of this study were to investigate whether there is a relationship between occupational exposure to pesticides and semen quality, and to determine whether chronic exposure to pesticides differentially affects semen quality in men of different ages. A comparative study of 64 farmers and 64 control men was performed. The farmers were interviewed to determine their occupational history and particularly, activities that may involve exposure to pesticides. Semen parameters were evaluated and a comparative analysis of semen variables between exposed and control groups, as well as between age groups: 18-29, 30-37 and 38-60 years was done. Significant alterations of some semen parameters in the exposed group were found, such as: decreases in sperm concentration, slow progressive motility and sperm membrane integrity; at the same time, increases in eosin Y positive and sperm DNA fragmentation index. The results obtained by age groups showed significant differences between exposed and control groups for the parameters of membrane integrity, eosin Y positive and sperm DNA fragmentation index, being the exposed group between 18-29 years that showed the highest altered cases of these parameters. Our results prove that occupational pesticide exposure is associated with alterations in sperm quality, creating a risk to farm workers in their reproductive capacity.

Novel central dopaminergic agents derived from atypical di-substituted 2-aminoindane-4, 7. Synthesis and central pharmacological profile

En las últimas décadas son muchos los compuestos con actividad dopaminérgica central que se han diseñado, sintetizado y evaluado farmacológicamente. A pesar de ello, no se ha logrado obtener un fármaco capaz de mejorar o curar las patologías que involucran la regulación dopaminérgica en el sistema nervioso central tales como la Enfermedad de Parkinson y la esquizofrenia, entre otras. Tomando en consideración el término de “farmacóforo atípico” y a partir del compuesto 5, se incorporó el fragmento aralquil y se sintetizaron los compuestos 10, 11, 13a-h y 14a-h. Tanto los compuestos 10 y 13a-h bajo su forma metoxilada como los compuestos 11 y 14a-h bajo su forma fenólica, fueron evaluados farmacológicamente para determinar su actividad agonística y antagonística sobre el sistema dopaminérgico central. Para ello se determinó el efecto de la inyección intracerebroventricular de dichos compuestos sobre el balance hidromineral y la conducta estereotipada en ratas. Los resultados de la evaluación farmacológica preliminar muestran una acción central a través de mecanismos dopaminérgicos, siendo que los compuestos 10, 11, 13d-h y 14a mostraron respuestas como agonistas, mientras que los compuestos 14b-h, tuvieron respuestas como antagonistas.

In recent decades, many compounds with central dopaminergic activity have been designed, synthesized and evaluated pharmacologically. However, it has not been possible to obtain a drug able to improve or cure diseases involving dopaminergic regulation in the central nervous system, such as Parkinson’s disease and schizophrenia, among others. Taking into consideration the term “atypical pharmacophore” and from the compound 5, the aralkyl fragment was incorporated, and the compounds 10, 11, 13a-h and 14a-h were synthesized. Both the compounds 10 and 13a-h under its methoxylated form and the compounds 11 and 14a-h under the phenolic form, were evaluated to determine their pharmacologically agonistic and antagonistic effects on central dopaminergic activity. For this, the effect of intracerebroventricular injection of said compounds on the hydromineral balance and stereotyped behavior in rats, was determined. The results of the preliminary pharmacological evaluation show a centrally acting action through dopamine mechanisms, in which the compounds 10, 11, 13d-h and 14a showed responses as agonists, whereas compounds 14b-h, had responses as antagonists.

Cadherins E and P expression in the molecular types of breast cancer.

La transición epitelial-mesenquimal es un proceso mediante el cual las células tumorales pierden sus marcadores epiteliales y facilita la migración a órganos distantes. En este proceso intervienen diversas proteínas de adhesión celular, tales como la cadherina E y la cadherina P. El presente estudio se realizó en 354 pacientes diagnosticadas de carcinoma ductal infiltrante de mama en seguimiento, en el Instituto de Oncología Dr. Miguel Pérez Carreño de Valencia, Venezuela. Se analizó la expresión de las dos moléculas por matrices de tejidos y se compararon los resultados obtenidos con las clases moleculares definidas por inmunohistoquímica, de acuerdo a la expresión de receptores de estrógeno (RE), receptores de progesterona (RP) y receptor del factor de crecimiento epidérmico humano 2 (HER2) y con la supervivencia global (SG). Con base a los resultados de RE, RP y HER2 se establecieron las clases moleculares, obteniendo los siguientes porcentajes: Luminal A 42,4%, Luminal B 20,3%, HER2 9% y triple negativo (TN) 28,2%. La expresión de cadherina E se observó conservada en la mayoría de los tumores de esta serie, 92,5% de los casos. Los tumores de fenotipo TN presentaron un porcentaje elevado (41,7%) con expresión ausente o reducida. La cadherina P se expresó en el 40,5% de los casos, y aunque expresada en todas las clases, la proporción fue significativamente mayor en los casos TN. No se apreció valor pronóstico significativo al analizar la SG a 5 años de las pacientes con tumores con ausencia o expresión reducida de cadherina E. La expresión de cadherina P presentó relación negativa con la SG.

The epithelial-mesenchymal transition is a process by which tumor cells lose their epithelial markers and migrate to distant organs. This process involves several cell adhesion proteins such as E-cadherin and P-cadherin. The present study was performed in 354 pacients diagnosed with breast infiltrating ductal carcinoma in the Oncology Institute Dr. Miguel Pérez Carreño, Valencia, Venezuela. The expression of 22 molecules was analyzed by tissue micro-arrays and the results were compared with the molecular clases established by immunohistochemistry, according to the expression of estrogen receptor (ER), progesterone (PR) and human epidermal growth factor receptor type 2 (HER2), and with the overall survival (OS). Based on the results of ER, PR and HER2 molecular classes according to the following percentages were established: Luminal A 42.4%, Luminal B 20.3%, 9% HER2 and 28.2% triple negative (TN). E-cadherin expression was observed conserved in most of the tumors of this series, 92.5% of cases. TN phenotype tumors showed a high percentage (41.7%) with absent or reduced expression. The P-cadherin was expressed in 40.5% of cases, although expressed in all classes; the proportion was significantly higher in cases TN. No significant prognostic value was observed when analyzing the overall five-year survival of patients with tumors with absent or reduced expression of E-cadherin. The P-cadherin expression had a negative relationship with the OS.

Prevalence of the metabolic syndrome, insulin resistance index, leptin and thyroid hormone levels in the general population of Mérida (Venezuela)

The metabolic syndrome (MetSyn) is a significant risk factor for cardiovascular events, but scarce information exists about its frequency in Venezuela. In this cross-sectional study, we quantified the prevalence of the MetSyn in a probabilistic, stratified sample of 274 subjects aged ³18 years from the Libertador district in Mérida, Venezuela. Secondary outcomes were the measurement of thyroid hormones (free T4 and TSH), leptin levels, and insulin resistance index (HOMA2-IR). The frequency of MetSyn (percentage ± 95% confidence interval) according to several diagnostic criteria was as follows: National Cholesterol Education Panel (NCEP, original): 27.4% (22.1-32.7); modified NCEP: 31.8% (26.3-37.3); International Diabetes Federation: 40.9% (35.1-46.7); Latin American Diabetes Association: 27% (21.7-32.3), and Venezuelan criteria: 31.8% (26.3-37.3). The MetSyn was more frequent in males than in females with most diagnostic criteria. The estimated prevalence of type 2 diabetes mellitus was 2.9% either according to the patients self reports or to fasting glucose level found to be above 126 mg/dL. Abnormal HOMA2-IR index, free T4 and TSH (above the 95th percentile) were detected in 4.5%, 4.4% and 5.1% of the sample, respectively. Free T4 and TSH levels below the 5th percentile were detected in 4.4% and 4.7% of subjects respectively. These values are presented for comparisons with forthcoming studies in specific clinical populations. While studies are being conducted about the different definitions of the MetSyn in Venezuela, we recommend analyzing and publishing local research data with all the available criteria so as to allow comparisons with the results already reported in the literature.

El síndrome metabólico (SM) es un factor de riesgo significativo en la ocurrencia de eventos cardiovasculares. Sin embargo, existe poca información sobre su frecuencia en Venezuela. En la presente investigación transversal, cuantificamos la prevalencia del SM es una muestra probabilística de 274 sujetos con edad mayor o igual a 18 años provenientes del municipio Libertador de la cuidad de Mérida, Venezuela. Como resultados secundarios, se cuantificaron los niveles de leptina, hormonas tiroideas (T4 libre y TSH), y el índice de resistencia a la insulina (HOMA2-RI). La frecuencia de SM (porcentaje ± intervalo de confianza del 95%) de acuerdo a varios criterios diagnósticos fue la siguiente: Panel para el Colesterol (original): 27,4% (22,1-32,7); Panel para el Colesterol (modificado): 31,8% (26,3-37,3); Federación Internacional de Diabetes: 40,9% (35,1-46,7); Asociación Latino-Americana de Diabetes: 27% (21,7- 32,3) y criterios Venezolanos: 31,8% (26,3-37,3). Al utilizar la mayoría de los criterios, el SM fue más frecuente en hombres que en mujeres. La prevalencia estimada de diabetes mellitus tipo 2 fue 2,9% tanto mediante el auto-reporte como mediante la detección de glicemia en ayunas > 126 mg/dL. Se detectaron niveles anormales (por encima del percentil 95) del índice HOMA2-IR, T4 libre y TSH en el 4,5%, 4,4% y 5,1% de la muestra respectivamente. Niveles de T4 y TSH por debajo del percentil 5 se detectaron en el 4,4% y 4,7% de sujetos respectivamente. Los valores del HOMA2-RI y hormonas tiroideas también se presentan con el fin de permitir comparaciones con futuros estudios en poblaciones clínicas específicas. Mientras se realizan estudios adicionales en Venezuela sobre las diversas definiciones del SM, recomendamos analizar y publicar los resultados científicos locales con todos los criterios disponibles con el fin de permitir la comparación con los estudios que ya están disponibles.

Enterobacter cloacae productor de KPC y VIM en un Hospital del Noreste de Venezuela

An 83-year-old male patient is admitted to the central hospital in Cumaná, Venezuela with severe urinary infection, history of hospitalizations and prolonged antimicrobial treatments. A strain of Enterobacter cloacae was isolated showing resistance to multiple types of antibiotics (only sensitive to gentamicin), with phenotype of serine- and metallo-carbapenemases. Both, blaVIM-2 and blaKPC genes were detected in the isolate. This is the first report of an Enterobacteriaceae species producing both KPC carbapenemase and VIM metallo carbapenemase in Venezuela. This finding has a great clinical and epidemiological impact in the region, because of the feasibility of transferring these genes, through mobile elements to other strains of Enterobacter and to other infection-causing species of bacteria.

En un paciente masculino de 83 años, que ingresó al Hospital de Cumaná, Venezuela, con diagnóstico de infección urinaria severa, antecedentes de hospitalización y diferentes tratamientos antimicrobianos durante largos periodos de tiempo, se aisló una cepa de Enterobacter cloacae, la cual evidenció resistencia a múltiples tipos de antibióticos (solo sensible a gentamicina) y con fenotipo de carbapenemasas de tipo serina y metalobetalactamasa. Los genes blaVIM-2 y blaKPC fueron detectados en esta cepa. Este representa el primer reporte de una especie de Enterobacteriaceae productora simultánea de carbapenemasa KPC y metalobetalactamasa VIM en Venezuela. Esto tiene un gran impacto clínico y epidemiológico en la región por la posibilidad de transferencia de estos genes a otras cepas de Enterobacter u otras especies bacterianas causantes de infecciones, por medio de elementos móviles.

Neuroprotective mechanisms of cannabinoids in brain ischemia and neurodegenerative disorders

Una de las causas más importantes de morbilidad y mortalidad es la disfunción neurológica; su alta incidencia ha estimulado una intensa búsqueda de mecanismos para proteger al sistema nervioso central de situaciones que producen hipoxia e isquemia. El mayor reto es interrumpir los eventos bioquímicos que involucra y que llevan a la muerte neuronal. Esto puede conseguirse a través de la neuroprotección que tiene por objeto frenar las cascadas inmunológica y metabólica que aparecen después de un daño neurológico agudo. Cuando esto sucede, se producen eventos fisiopatológicos que incluyen la producción de citocinas, el estrés oxidante y la excitotoxicidad. Respecto a todos esos mecanismos, se han reportado efectos protectores de los endocanabinoides, los cuales parecen ser neuroprotectores en modelos animales de isquemia cerebral, excitotoxicidad, trauma cerebral y en enfermedades neurodegenerativas. Algunos análogos de canabinoides se encuentran actualmente en evaluación (fases clínicas I-III) para el tratamiento de enfermedades agudas que involucran a la muerte neuronal (isquemia y trauma cerebrales). El estudio del sistema canabinoide podría generar agentes neuroprotectores efectivos de amplio espectro de acción para el tratamiento de afecciones neurológicas en un futuro cercano.

One of the most important causes of morbidity and mortality is neurologic dysfunction; its high incidence has led to an intense research of the mechanisms that protect the central nervous system from hypoxia and ischemia. The mayor challenge is to block the biochemical events leading to neuronal death. This may be achieved by neuroprotective mechanisms that avoid the metabolic and immunologic cascades that follow a neurological damage. When it occurs, several pathophysiological events develop including cytokine release, oxidative stress and excitotoxicity. Neuroprotective effects of cannabinoids to all those mechanisms have been reported in animal models of brain ischemia, excitotoxicity, brain trauma and neurodegenerative disorders. Some endocannabinoid analogs are being tested in clinical studies (I-III phase) for acute disorders involving neuronal death (brain trauma and ischemia). The study of the cannabinoid system may allow the discovery of effective neuroprotective drugs for the treatment of neurological disorders.

Pathogenic mechanisms of neuronal damage in multiple sclerosis

La esclerosis múltiple (EM) es la principal causa de discapacidad neurológica de origen no traumático en adultos jóvenes. EM es una enfermedad crónica inflamatoria que se caracteriza por daño a las fibras nerviosas y la cubierta de mielina. Esto produce una gran variedad de síntomas una vez que nervios específicos muestran inflamación y pérdida de su función. Estudios epidemiológicos y experimentales han identificado alteraciones genéticas, anormalidades en enzimas antioxidantes y autoinmunidad como algunos de los factores de riesgo para el desarrollo de la enfermedad. Evidencia reciente sugiere que la inflamación y el estrés oxidativo en el sistema nervioso central contribuyen al daño del tejido cerebral. Las células residentes en el sistema nervioso central así como las células inflamatorias invasivas liberan una gran cantidad de especies reactivas de oxígeno y nitrógeno, las cuales causan desmielinización y destrucción de los axones: los hallazgos histopatológicos de la esclerosis múltiple. La interacción entre los procesos inflamatorios y neurodegenerativos producen perturbaciones neurológicas intermitentes seguidas por la acumulación progresiva de la discapacidad. Para tratar de limitar o disminuir la progresión de la enfermedad es necesario reducir la inflamación y el estrés oxidativo como estrategia terapéutica importante. Con la finalidad de mejorar la sobrevivencia y la calidad de vida de los pacientes, se están desarrollando ensayos clínicos con suplementos alimenticios tales como los antioxidantes y los ácidos grasos poliinsaturados omega-3.

Multiple sclerosis is the most common cause of progressive neurological disability in young adults. This disease involves damage to the myelin sheath that normally insulates the electrical activity of nerve fibers. This leads to a wide range of symptoms as specific nerves become injured and lose their function. Epidemiological and experimental studies show that genetic alterations, antioxidant enzyme abnormalities and autoimmunity are risk factors for developing the disease. Recent evidence suggests that inflammation and oxidative stress within the central nervous system are major causes of ongoing tissue damage. Resident central nervous system cells and invading inflammatory cells release several reactive oxygen and nitrogen species which cause the histopathological features of multiple sclerosis: demyelization and axonal damage. The interplay between inflammatory and neurodegenerative processes results in an intermittent neurological disturbance followed by progressive accumulation of disability. Reductions in inflammation and oxidative stress status are important therapeutic strategies to slow or halt the disease processes. Therefore, several drugs are currently in trial in clinical practice to target this mechanism; particularly the use of supplements such as antioxidants and omega-3 polyunsaturated fatty acids, in order to improve the survival and quality of patients’ lives.