Investigación Clínica

Consideraciones sobre el Manifiesto para una Ciencia Post-Materialista

Significant associations between C-reactive protein levels, body adiposity distribution and peripheral blood cells in school-age children

Obesity is associated with a state of chronic low-grade inflammation. Generally, there are significant correlations between body mass index and increased C-reactive protein levels. We investigated the relationship of high sensitivity C-reactive protein (hsCRP) levels with body adiposity distribution and blood cell count in obese children. A cross-sectional study was performed in 225 Mexican children. In the study were included 106 obese and 119 normal-weight children, aged 6-13 years old. The body composition was evaluated by BMI, body circumferences and skinfold thickness. hsCRP levels and hematological parameters were analyzed in all children. The hsCRP levels were higher in obese children than in the control group (1.5 and 0.41 mg/L respectively, P<0.001). Interestingly, hsCRP levels >3 mg/L were associated with the increase of circumferences of the waist, hip and arms (ORs= 9.08, 6.78 and 8.73, respectively, P<0.001), and a higher thickness of triceps, subscapular and suprailiac skinfolds (ORs= 4.73, 6.39 and 5.26, respectively, P=0.001), as well as a higher leukocyte and platelet counts. The data suggest that hsCRP levels are associated with skinfold thickness and body circumferences, and a moderate relationship was found with leukocyte and platelet counts in the studied children.

La obesidad se asocia con un estado de inflamación crónica de bajo grado. Generalmente, hay correlaciones significativas entre el índice de masa corporal y el incremento en los niveles de la proteína C reactiva (CRP). Se investigó la relación de los niveles de CRP de alta sensibilidad (hsCRP) con la distribución de la adiposidad corporal y la cuenta de las células sanguíneas en niños obesos. Se realizó un estudio transversal en 225 niños mexicanos. En el estudio se incluyeron 106 niños obesos y 119 con peso normal, edad de 6-13 años. La composición corporal fue evaluada por IMC, circunferencias corporales y grosor de pliegues cutáneos. Los niveles de la hsCRP de alta sensibilidad y los parámetros hematológicos fueron analizados en todos los niños. Los niveles de la hsCRP presentaron un incremento en los niños obesos con respecto al grupo control (1,5 y 0,41 mg/L respectivamente, P<0,001). Es interesante que los niveles de hsCRP>3 mg/L se asociaron con mayor circunferencia de cintura, cadera y brazo (ORs= 9,08, 6,78 y 8,73, respectivamente, P<0,001) y mayor grosor de los pliegues como tríceps, subescapular y suprailiaco (ORs= 4,73, 6,39 y 5,26, respectivamente, P=0,001), así como con el aumento en la cuenta de leucocitos y plaquetas. Los datos sugieren que los niveles de la hsCRP se asocian con el grosor de los pliegues cutáneos y las circunferencias corporales y fue encontrada una relación moderada con las cuentas de leucocitos y plaquetas en los niños estudiados.

Cytokine and metalloproteinases in gingival fluid from patients with chronic periodontitis

The purpose of the present research was to determine the levels of IL-1α, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-6sR, IL-8, IL-10, MMP-3 and MMP-8 in gingival crevicular fluid (GCF) of subjects with chronic periodontitis. Clinical measurements were carried out in 20 patients with chronic periodontitis and 11 periodontally healthy controls. The clinical indexes evaluated were: gingival index (GI), plaque index (PI), bleeding on probing (BOP), probing depth (PD) and clinical attachment loss (CAL); the measurements were taken at six sites per tooth in all teeth in each subject. GCF samples were taken from one tooth per quadrant, and the levels of mediators were measured using an ELISA test. Statistically significant differences were observed between patients and control group in relation to all clinical parameters evaluated (p<0.05). The gingival concentrations, in pg/mL, of IL-1α (patients: 239.06 ± 65.5 vs control: 97.79 ± 15.81), IL-1β (patients: 157.19 ± 36.4 vs control: 63.44 ± 19.04), TNF-α (patients: 10.87 ± 1.7 vs control: 1.15 ± 0.84), IL-6 (patients: 3.77 ±1.7 vs control: 0.43 ± 0.22), IL-6Sr (patients: 655.59 ± 185.8 vs control: 73.59 ± 23.18), IL-8 (patients: 496.3 ± 155.3 vs control: 206.13 ± 46.63), IL-10 (patients: 10.75 ± 3.6 vs control: 2.41 ± 0.57), MMP-3 (patients: 3531 ± 1558.2 vs control: 724.84 ± 289.51) and MMP-8 (patients: 8231.70± 1279.2 vs control: 1534.67± 814.90) were significantly greater in patients with periodontal disease than in the control group (p<0.001). The higher levels of the cytokines and metalloproteinases obtained in this study were significantly associated with the severity of the periodontal disease.

El propósito de la presente investigación fue determinar los niveles de IL-1α, IL-1β, TNF-α, IL-6, IL-6sR, IL-8, IL-10, MMP-3 and MMP-8 en fluido gingival crevicular (FGC) de sujetos con periodontitis crónica. Se evaluaron los parámetros clínicos en 20 pacientes con periodontitis crónica y 11 controles periodontalmente sanos. Los índices clínicos evaluados fueron: indice gingival (IG), indice de placa dental (IP), sangramiento al sondaje (SS), profundidad del saco (PS) y nivel de inserción (NI). Las muestras de FGC fueron tomadas de un diente por cada cuadrante y los niveles de los mediadores fueron medidos utilizando la prueba de ELISA. Se observaron diferencias estadísticamente significativas entre los pacientes y el grupo control en relación a todos los parámetros clínicos evaluados (p<0,05). Las concentraciones en fluido gingival en pg/mL de IL-1α(pacientes: 239,06 ± 65,5 vs control: 97,79 ± 15,81), IL-1β (pacientes: 157,19 ± 36,4 vs control: 63,44 ± 19,04), TNF-α (pacientes: 10,87 ± 1,7 vs control: 1,15 ± 0,84), IL-6 (pacientes: 3,77 ±1,7 vs control: 0,43 ± 0,22), IL-6Sr (pacientes: 655,59 ± 185,8 vs control: 73,59 ± 23,18), IL-8 (pacientes: 496,3 ± 155,3 vs control: 206,13 ± 46,63), IL-10 (pacientes: 10,75 ± 3.6 vs control: 2,41 ± 0,57), MMP-3 (pacientes: 3531 ± 1558,2 vs control: 724,84 ± 289,51) and MMP-8 (pacientes: 8231,70± 1279,2 vs control: 1534,67± 814,90), estuvieron significativamente mayores en pacientes con enfermedad periodontal que en el grupo control. (p<0,001). Los niveles elevados de citocinas y metaloproteinasas obtenidos en este estudio estuvieron significativamente asociados con la severidad de la enfermedad periodontal.

Interleukin-6 and resistin in relation to anthropometric measurements in school children

La prevalencia mundial de obesidad infantil ha aumentado considerablemente en las últimas tres décadas. La creciente incidencia en niños de trastornos como diabetes tipo 2, se cree es consecuencia de esta epidemia. Aunque los mecanismos exactos aún no están claros, la producción o secreción de adipocinas causadas por el exceso de tejido adiposo y su disfunción, pueden contribuir al desarrollo de enfermedades metabólicas relacionadas con la obesidad. El objetivo del estudio fue determinar en escolares las concentraciones séricas de interleucina-6 (IL-6) y resistina, y relacionarlas con las medidas antropométricas. Se estudiaron 103 escolares. La evaluación antropométrica incluyó peso, talla, pliegue tricipital (PTr), circunferencia de cintura (CC), índice cintura-talla (C/T) e índice de masa corporal (IMC). Las concentraciones de IL-6 y resistina fueron determinadas según el método ELISA. Los datos fueron analizados con el programa estadístico SPSS versión 20. Se consideró el 95% de confiabilidad estadística (p<0,05). La prevalencia de sobrepeso fue 15,54% y obesidad 11,65%. Los escolares con CC aumentada, índice C/T (sobrepeso/obeso) e IMC (sobrepeso) mostraron valores significativamente más elevados de IL-6. Solo los escolares con CC aumentada e índice C/T (sobrepeso/obeso) mostraron valores promedio más altos de resistina (p<0,05). La interleucina-6 mostró correlación positiva con CC (r=0,229;p=0,020) e índice cintura-talla (r=0,397;p<0,001); la resistina con el índice cintura-talla (r=0,283;p=0,004). Estos resultados sugieren que la CC y el índice cintura-talla son buenos indicadores antropométricos en escolares, pues su incremento se correlaciona de manera positiva con las citocinas proinflamatorias, vinculadas con el aumento del riesgo cardio-metabólico en la población infantil.

The worldwide prevalence of childhood obesity has increased greatly over the past three decades. The increasing occurrence in children of disorders, such as type 2 diabetes, is believed to be a consequence of this obesity epidemic. Although the precise mechanisms are still unclear, dysregulated production or secretion of adipokines caused by excess adipose tissue and adipose tissue dysfunction can contribute to the development of obesity-related metabolic diseases. The objective of the study was to determine the serum levels of interleukin-6 and resistin in relation to anthropometric measurements in school children. One hundred and three school-age children were studied. The anthropometric assessment included weight, height, triceps skinfold (TSF), waist circumference (WC), waist-to-height ratio (WHtR) and Body Mass Index (BMI). Interleukin-6 and resistin levels were measured by ELISA. The data were analyzed using the SPSS version 20 statistical program and 95% CIs (p<0.05) was considered significant. BMI values indicated that 15.54 % of the population was overweight, and 11.65 % was obese. We found that scholars with excess WC, WHtR and BMI (overweight) had higher levels of IL-6 and scholars with excess WC and WHtR had higher levels of resistin (p <0.05). Interleukin-6 showed positive correlation with WC (r=0.229; p = 0.020) and waist-to-height ratio (r=0.397; p<0.001); and resistin with waist-to-height ratio (r=0.283; p= 0.004). These results suggest that WC and waist-to-height ratio are good anthropometric indicators in school children, contributing to early detection and prognosis of metabolic risks in children, due to their positive correlation with pro-inflammatory cytokines (interleukin-6 and resistin).

**Production of a conjugate between the rK346 antigen from Leishmania infantum and the horseradish peroxidase C for the detection of rK346 antibodies**

It was designed and characterized a reporter system to be captured by antibodies bound to ELISA plates. The system was designed with the rK346 from Leishmania infantum, a highly antigenic and specific protein. The rK346 was coupled to the horseradish peroxidase C (HRPc) from Armoracia rusticana using glutaraldehyde or sulfo-SMCC. Glutaraldehyde conjugation was performed in two steps. Separation of conjugates was carried out using a Sepharose S-200 in size exclusion chromatography (SEC); fractions were analyzed via HRPc activity and through ELISA plates sensitized with polyclonal anti-rK346 IgG purified from rabbit serum. A heterogeneous population of conjugates rK346-HRPc was obtained with molecular weights ranging between 109.7 ± 16.5 to 67.6 ± 10.1 kDa; with rK346-HRPc stoichiometries of 1:2; 2:1; 3:1; and 2:2. Conjugation using sulfo-SMCC was carried out first by introducing -SH groups onto the HRPc using the SATA reagent and the antigen was modified with sulfo-SMCC during 45 min. Separation and analysis of conjugates was performed similarly as with glutaraldehyde, resulting in a heterogeneous population of conjugates rK346-HRPc with molecular weights between 150.5 ± 22.6 to 80.0 ± 12.0 kDa; with rK346-HRPC stoichiometries of 2:1; 1:2; 2:2; and 1:3, with an increased conjugation efficiency in comparison with glutaraldehyde. This enables sulfo-SMCC to be used as a potential reagent for coupling the antigen to the HRPc, to design an economic, specific and easy method to apply as a reporter system, available to assess individuals at risk and/or at early and late stages of visceral leishmaniasis.

Se diseñó y caracterizó un sistema reportero para ser capturado por anticuerpos enlazados a placas de ELISA. El sistema fue diseñado con una proteína altamente antigénica y específica, la rK346 de Leishmania infantum. La rK346 fue acoplada a la peroxidasa C de rábano picante (HRPc) de Armoracia rusticana usando glutaraldehido o sulfo-SMCC. La conjugación con glutaraldehido fue realizada en dos pasos. La separación de los conjugados fue llevada a cabo a través de una cromatografía de exclusión molecular sefarosa S-200 (CES), las fracciones fueron analizadas midiendo la actividad HRPc y por placas ELISA sensibilizadas con inmunoglobulina G policlonal anti-rK346, purificada desde suero de conejo. Se obtuvo una población heterogénea de conjugados rK346-HRPc en un rango de pesos moleculares entre 109,7 ± 16,5 a 67,6 ± 10,1 kDa; con estequiometria rK346-HRPc de 1:2; 2:1; 3:1; y 2:2. La conjugación usando sulfo-SMCC se llevó a cabo primero introduciendo grupos -SH en la HRPc usando el reactivo SATA; el antígeno se modificó con sulfo-SMCC. La separación y el análisis de los conjugados se realizaron de forma similar que con el glutaraldehido, resultando en una población heterogénea de conjugados rK346-HRPc con un rango de pesos moleculares entre 150,5 ± 22,6 a 80,0 ± 12,0 kDa; con estequiometria rK346-HRPC de 2:1; 1:2; 2:2 y 1:3, y con una eficiencia de conjugación incrementada en comparación con glutaraldehido. De esta forma, se habilitó al sulfo-SMCC como un reactivo potencial para acoplar antígenos a la HRPc, como método para el diseño de un sistema reportero económico, especifico y fácil de aplicar, útil en la evaluación de individuos en riesgo y/o en estados tempranos o avanzados de leishmaniasis visceral.

Single nucleotide polymorphisms V4 and T1 of the ADAM33 gene in Venezuelan patients with asthma or chronic obstructive pulmonary disease

ADAM33 es una metaloproteinasa de la matriz extracelular involucrada en la remodelación tisular y, por ello, en el asma y la enfermedad pulmonar obstructiva crónica (EPOC). Se han reportado varios polimorfismos del gen de ADAM33 asociados a la actividad enzimática. Los polimorfismos más estudiados son el V4, citosina por una guanina en la región 3 UTR, y el T1, adenina por una guanina en el exón 19 del gen. El objetivo del presente trabajo fue determinar la posible asociación de los polimorfismos de nucleótido simple de ADAM33, V4 y T1, con la presencia de asma o EPOC en pacientes venezolanos. Los polimorfismos V4 y T1 fueron analizados en 303 individuos (103 asmáticos, 100 EPOC, y 100 controles) mediante PCR-RFLP (reacción en cadena de la polimerasa y análisis de polimorfismos por longitud de fragmentos de restricción enzimática). La frecuencia genotípica del polimorfismo V4 fue significativamente mayor (p<0,05) en ambos grupos de pacientes, asmáticos y EPOC, con respecto al control. No se encontraron diferencias significativas (P=0,4) en el polimorfismo T1. Sin embargo, se evidenció una diferencia significativa (p<0,05) cuando los haplotipos y diplotipos de ADAM33 V4/T1 se compararon entre los tres grupos. Se concluye que el polimorfismo ADAM33 V4 está asociado con la presencia de asma o EPOC en pacientes venezolanos.

ADAM33 is a metalloproteinase important in the extracellular matrix for tissue remodeling, and, consequently, in asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD). Several polymorphisms of the ADAM33 gene have been associated with enzyme activity. One of the most studied polymorphisms is V4, cytosine for guanine in the 3UTR region, and T1, adenine for guanine in the exon 19 of the gen. The aim of this study was to ascertain the possible association among single polymorphisms of ADAM33, V4 and T1, in Venezuelan patients with asthma or COPD. The polymorphisms V4 and T1 were analyzed in 303 individuals (103 asthmatic, 100 COPD and 100 controls) by PCR-RFLP (polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphisms). There was a significant difference (P<0.05) in the frequency of ADAM33 V4 polymorphism in both, asthmatic and COPD patients groups, as compared to controls. No significant differences (P=0.4) were found for T1 polymorphism. However, there were significant differences (P<0.05) when haplotypes and diplotypes of ADAM33 V4/T1 were compared in all three groups. It can be concluded that the polymorphism V4 of ADAM33 is associated with asthma or COPD in Venezuelan patients.

Subclassification of the molecular types of breast cancer based on the expression of immunohistochemical markers and evolution

Los carcinomas de la mama se han clasificado desde el punto de vista molecular en cuatro grupos mayores (Luminal A, Luminal B, HER2 y triple negativo). Sin embargo, estos grupos no son homogéneos y existe la necesidad de establecer subcategorías que puedan ser identificadas mediante inmunohistoquímica (IHQ), para así predecir mejor su pronóstico y llevar a cabo un tratamiento más efectivo. El presente estudio se realizó en 354 pacientes diagnosticadas de carcinoma ductal infiltrante de mama. Se analizó la expresión de 22 moléculas por matrices de tejidos y se compararon los resultados obtenidos con las clases moleculares definidas por IHQ, de acuerdo a la expresión de receptores de estrógeno (RE), receptores de progesterona (RP) y HER2, y con la supervivencia global. Con la clase molecular Luminal A se pueden establecer varios subgrupos de significado pronóstico: el subgrupo con expresión exclusiva de RE y RP, con Ki-67 ≤14%, con mejor pronóstico, y el subgrupo de Luminal A con Ki-67 >14%, o con expresión de otros marcadores relacionados con el fenotipo basal. El grupo Luminal B puede ser dividido en subtipos de acuerdo a la expresión de Ki-67 (punto de corte en el 25%). En la clase HER2, parece importante el índice de Ki-67 para el pronóstico (punto de corte en 25%). La clase de TN puede ser dividida según el índice de proliferación en dos categorías pronósticas, con un mejor pronóstico para aquellos tumores con un índice de Ki-67 ≤25%.

Breast carcinomas have been classified from the molecular point of view into four major groups (Luminal A, Luminal B, HER2 and triple negative). However, these groups are not homogeneous and there is a need to establish subcategories that can be identified by immunohistochemistry (IHC), to better predict prognosis and carry out treatments that are more effective. This study was conducted in 354 patients diagnosed with invasive ductal breast carcinoma. The expression of 22 molecules was analyzed by tissue matrices and the results obtained were compared with molecular classes defined by IHC, according to the expression of estrogen receptor (ER), progesterone receptor (PR) and HER2, and the overall survival. The Luminal A molecular class can set various prognostic subgroups: the subgroup with exclusive expression of ER and PR, with Ki-67 ≤14%, with a better prognosis, and the subgroup of Luminal A with Ki-67> 14% or other expression related to the basal phenotype markers. Luminal B group can be divided into subtypes according to the expression of Ki-67 (cutoff at 25%). In the HER2 class it seems important the Ki-67 index for forecasting (cutoff at 25%). The TN class can be divided according to the rate of proliferation into two prognostic categories, with a better prognosis for tumors with Ki-67 index ≤25%.

Neurotransmitter systems, neuroanatomical pathology and cell death in schizophrenia: update and perspectives

La esquizofrenia incluye una alteración del juicio de realidad que se caracteriza por la presentación de ideas delirantes que pueden ir acompañadas de alucinaciones de alguna modalidad sensorial. Estos síntomas se presentan en la esquizofrenia, pero también pueden resultar de una amplia variedad de trastornos neurológicos y psiquiátricos. Asimismo, puede ser inducida químicamente. A pesar de que la presentación de psicosis es clínicamente similar, se desconoce si involucra mecanismos neurobiológicos distintos para cada situación. Los pacientes que sufren esquizofrenia no sólo exhiben diversas alteraciones neuroanatómicas sino, además, alteraciones en la neurotransmisión de diferentes sistemas. Actualmente, las teorías más aceptadas proponen una sobreactivación del sistema dopaminérgico y una hipofunción del sistema glutamatérgico. Adicionalmente, otros sistemas involucrados en la fisiopatología de la esquizofrenia son la vía del óxido nítrico, así como los sistemas GABAérgico, glicinérgico y serotonérgico. Más aún, dichos sistemas interactúan entre sí modulando el desarrollo del sistema nervioso y la supervivencia de las células. Las alteraciones descritas en este artículo podrían formar una misma secuencia de eventos. La investigación en este campo habrá de enfocarse en dilucidar esa cadena para acercarse aún más a sus extremos inicial, que le da origen, y final, que tiene implicaciones terapéuticas.

Schizophrenia is a thought disorder characterized by delusional thinking which may be accompanied by hallucinations involving any sensory modality. Schizophrenia may be associated with several neurologic and psychiatric disorders. Also, it may be induced by drugs. In spite of the similarity in psychoses symptomatology, it is unknown if it involves the same underlying neurobiologic mechanisms in those cases. Schizophrenic patients exhibit not only neuroanatomical alterations, but also, distortion of several neurotransmitter systems. Nowadays, the main theories in this regard involve dopaminergic hyperfunction and glutamatergic hypofunction. Additionally, other systems involved in the schizophrenia pathophysiology are the nitric oxide pathway as well as GABAergic, glycinergic and serotonergic systems. Furthermore, those systems interact with each other to modulate nervous system development and cell survival. The alterations described in this paper may be part of a single cascade of events. Research in this field should focus on the elucidation of this chain to find its limits, the initial stage that originates it, and the final stage that has therapeutic implications.