Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiología

Sobre financiamiento y otros asuntos

Irene Pérez Schael

A brief history of the Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiología (RSVM): XXX Anniversary (1981-2011)

La Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiología (RSVM) llegó a su XXX aniversario (1981-2011). Su origen se remonta a la impresión de los folletos: Micronotícias (1971) y el Boletín Informativo de la SVM (1975). En 1981 se inicia la publicación del Boletín SVM, considerado como el punto de partida de la actual RSVM. En este trabajo se presenta un análisis de la evolución histórica de la RSVM destacando las etapas clave en su desarrollo, el estado actual y alcances como órgano oficial de la Sociedad Venezolana de Microbiología. Actualmente la RSVM se publica en formatos impreso y electrónico, con visibilidad internacional y libre acceso a través de repositorios internacionales: BIREME, SciELO, LILACS, LIVECS, los sistemas iberoamericanos de referencia:REDALYC, Latindex y SIIC, página web de la SVM y el portal SaberUCV

The Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiología -RSVM- (Venezuelan Journal of Microbiology Society) reached its XXX Anniversary (1981-2011). Its origin goes back to the serials Micronoticias (1971) and the Boletín Informativo de la SVM (1975). In 1981 its becomes Boletín SVM, regarded as the starting point of the current RSVM.This work contains an historical review highlighting the key points in its transformation stages, the currents state and its scope as a printed and electronic journal with international visibility and open access though repositories systems: SciELO Venezuela, LILACS, LIVECS and iberoamerican reference systems: REDALYC, Latindex and the SIIC system, as well as the SVM web page and SaberUCV

Worldwide application of the rotavirus vaccine: impact on mortality and hospitalizations due to diarrhea

En EE.UU., Australia y algunos países latinoamericanos y europeos en donde se ha incorporado la vacuna de rotavirus a los programas nacionales de inmunización, se ha observado una reducción significativa de las tasas de mortalidad y hospitalización por diarrea. Además, pareciera que la vacuna confiere protección a los niños no vacunados, lo que sugiere que sería capaz de inducir un beneficio indirecto a la población (inmunidad de rebaño). En este artículo se hace una revisión de la información publicada, recientemente, con respecto al impacto de la inmunización con rotavirus en la carga de la diarrea en la niñez

In the United States, Australia and some Latin-American and European countries where the rotavirus vaccine has been incorporated into the national immunization programs, a significant reduction of mortality and hospitalization rates due to diarrhea have been seen. It would also seem that the vaccine confers protection to non vaccinated children, which suggests that it might be able to induce an indirect benefit to the population (herd immunity). This paper presents a review of the recently published information regarding the impact of rotavirus immunization on the childhood diarrhea load

The biological impact of bacterial autoinducers

Las bacterias, a pesar de ser organismos unicelulares, presentan una gran complejidad. Durante mucho tiempo fueron consideradas como organismos asociales cuyas funciones principales eran el nutrirse y el reproducirse. Sin embargo, se ha observado que las bacterias son los microorganismos con la mayor capacidad de adaptación a ambientes diversos, además responden a múltiples estímulos, tanto nutricionales como ambientales (pH, disponibilidad de oxígeno, osmolaridad, etc.). En las últimas décadas se ha reportado que tanto las bacterias grampositivas como las gramnegativas son capaces de comunicarse entre si mediante sistemas especializados de comunicación celular. A tales sistemas se les ha denominado sistemas de señalización y autoinductores a las moléculas señal que desencadenan diferentes respuestas celulares, como la formación de biopelículas, la transformación bacteriana, la producción de bioluminiscencia, la producción de antibióticos o de factores de virulencia, entre otras. En este trabajo se presentan los aspectos más relevantes relacionados a los autoinductores de bacterias grampositivas y gramnegativas, así como su participación en diferentes procesos biológicos

Bacteria, in spite of being unicellular organisms, present great complexity. During a long time they were considered as asocial organisms whose main functions were feeding and reproducing. Nevertheless, it has been observed that bacteria are the microorganisms with the greatest capacity for adapting to diverse environments, also responding to multiple stimuli, both nutritional and environmental (pH, oxygen availability, osmolarity, etc.). During the last decades it has been reported that bacteria, both gram negative and gram positive, are capable of communicating among them through specialized cell-communication systems. These systems have been called signaling systems and the signaling molecules which unchain the various cell responses such as biofilm formation, bacterial transformation, luminescence production, antibiotic production, or virulence factor production, among others, have been called autoinducers. This paper presents the most relevant aspects related with gram positive and gram negative bacteria autoinducers, as well as their participation in different biological processes

Pathogenic bacteria isolated from the nasopharynx of indigenous Warao children: Sucre state, Venezuela

Para determinar la frecuencia de bacterias patógenas y su susceptibilidad antimicrobiana en muestras nasofaringeas de niños indígenas waraos de la comunidad María López, municipio Benítez del estado Sucre, con edades comprendidas entre 0 y 10 años, se procesaron 49 muestras recolectadas durante el período enero-marzo de 2008. La identificación bacteriana se realizó aplicando estudios bacteriológicos convencionales y la susceptibilidad antimicrobiana mediante el método de difusión en disco, siguiendo lineamientos del Instituto de Estándares de Laboratorios Clínicos (CLSI). Los resultados indicaron la presencia de Moraxella catarrhalis (28,6%), Streptococcus pneumoniae (26,5%), Staphylococcus aureus (14,3%) y Haemophilus influenzae (6,1%) en niños con y sin sintomatología. Las bacterias patógenas aisladas del tracto respiratorio superior fueron más frecuentes en el grupo de 0 a 5 años de edad, identificándose, principalmente, S. pneumoniae. Con respecto a la susceptibilidad antimicrobiana, S. pneumoniae mostró resistencia a tetraciclina (46,2%), trimetoprim-sulfametoxazol (38,5%), clindamicina (33,3%) y penicilina (23,1%). Los aislados de S. aureus expresaron sensibilidad a todos los antimicrobianos ensayados. El total de aislados de M. catarrhalis mostró resistencia a ampicilina y penicilina, además, resultaron productores de β-lactamasas. La presencia de bacterias patógenas a nivel nasofaríngeo en la población infantil, representa un riesgo para el desarrollo de infecciones severas del tracto respiratorio

We collected and `processed 49 nasopharynx samples taken from indigenous Warao children 0-10 years old who lived at the María Lopez community of the Benitez Municipalit at Sucre State, with the purpose of determining the frequency of pathogenic bacteria and their antimicrobial sensitivity in samples collected from these children during the January-March 2008 period. The bacterial identification was obtained by applying conventional bacteriological methods and the antimicrobial sensitivity was determined by the disc diffusion method, following the guidelines of the Clinical Laboratory Standards Institute. The results showed presence of Moraxella catarrhalis (28.6%), Streptococcus pneumoniae (26.5%), Staphylococcus aureus (14.3%) and Haemophilus influenza (6.1%) in children with and without symptoms. The pathogenic bacteria isolated from the upper respiratory tract were more frequent in the 0-5 year old group and the most frequent identification was S. pneumoniae. Regarding antimicrobial sensitivity, S. pneumoniae was resistant to tetracycline (46.2%), trimetoprim-sulphametoxazol (38.5%), clindamicyn (33.3%) and penicillin (23.1%). The S. aureus isolates were sensitive to all the antimicrobials studied. All the M. catarrhalis isolates were resistant to ampicillin and penicillin and were also β-lactamase producers. The presence of pathogenic bacteria at the nasopharynx level in child populations signifies a risk for the development of severe respiratory tract infections

In vitro **production and evaluation of anti-Streptococcus mutans IgY**

La caries dental es una enfermedad infecciosa de alcance mundial, producida por Streptococcus mutans. Una estrategia para combatir la bacteria es previniendo su adherencia al esmalte dental mediante el uso de inmunoglobulinas de yema de huevo (IgY). En este trabajo se desarrollaron IgY contra S. mutans y se determinó su reactividad a fin de evaluar su potencial para prevenir la caries dental. Los anticuerpos fueron producidos inmunizando gallinas con un liófilo de la bacteria. Se recolectaron los huevos pre y post inmunes y se purificaron las IgY por precipitación con PEG 6000-cloroformo. El mayor nivel de IgY se obtuvo en el día 42 postinmunización, medido por un ensayo ELISA y la reactividad se evaluó por Western Blot, observándose el reconocimiento de bandas específicas entre 41 y 150 kDa que corresponden a proteínas implicadas en la adherencia a la superficie dental. Por la prueba MABA, se observó reactividad cruzada con S. salivarius. Observamos la aglutinación e inhibición del crecimiento (MIC) de S. mutans in vitro por acción de las IgY. Los resultados demuestran el potencial de estos anticuerpos para ser aplicados en ensayos de inmunización pasiva en nuestro país como una alternativa para prevenir la caries dental

Dental caries is a worldwide infectious disease produce by Streptococcus mutants. A strategy to combat this bacterium consists in preventing its adherence to tooth enamel through the use egg yolk immunoglobulin (IgY). In this study we developed anti-S.mutans IgY and determined its reactivity to evaluate its potential for preventing dental caries. The antibodies were produced by immunizing hens with lyophilized bacteria. Pre and post immunization eggs were collected and their IgY was purified by precipitation with PEG 6000-chloroform. The highest IgY level was obtained on the 42nd day post-immunization, as measured by an ELISA test. Reactivity was determined by Western Blot, showing the recognition of specific bands between 41 and 150 kDa, which correspond to proteins involved in the adherence to dental surfaces. A MABA test showed cross-reactivity with S. salivarum. IgY activity was shown by in vitro agglutination and growth inhibition (MIC) of S. mutans. These results show the potential of these antibodies for application in passive immunization trials as an alternative to prevent dental caries

Evaluation of life-span of potentially pathogenic bacteria in marine sediments

El presente trabajo tuvo por objeto determinar el período de supervivencia en sedimentos marinos de bacterias con riesgo biológico o indicadoras. Se tomaron muestras de sedimento marino intermareal en dos playas de la ciudad de Comodoro Rivadavia, Argentina; una sometida a contaminación por efluentes domiciliarios, y otra sin pruebas de contaminación evidente. Sobre éstos se realizó una caracterización inicial por recuento de bacterias en diferentes medios de cultivo (TSA, VRB, VRBG, TCBS, agar bilis esculina y agar cetrimide) y por su identificación. También se realizó un estudio de supervivencia de los microorganismos de interés en microcosmos. Estos fueron monitoreados por conteo de bacterias y por identificación de los integrantes de interés. Los principales resultados indicaron que existe una marcada diferencia en la composición de la comunidad bacteriana entre ambas muestras. Los géneros bacterianos en la muestra contaminada fueron Aeromonas, Salmonella, Pseudomonas, Escherichia, Ochrobactum y Klebsiella, y en la playa no contaminada Bacillus, Paenibacillus, Micrococcus, Photobacterium y Vibrio. El ensayo en microcosmos demostró que, luego de 65 días, la comunidad bacteriana de la playa contaminada fue similar a la del sedimento sin contaminación, indicando que al retirar la fuente de contaminación, es probable la recuperación de la zona afectada

The present study had the purpose of determining the survival period of bacteria which represent a biological risk and are indicators of contamination. Inter-tide marine sediment samples were taken at two beaches of the Comodoro Rivadavia city in Argentine; one the beaches was submitted to contamination due to household effluents, and the other without proof of evident contamination. These samples were initially characterized by bacterial counts in different culture media (TSA, VRB, TCBS, bile esculin agar and cetrimide agar) and by their identification. A study of the survival of the target bacteria in microcosm was also done, monitored by bacterial counts and identification of these bacteria. The main results indicated that there was a marked difference in the composition of the bacterial community between the two samples. In the contaminated sample the bacterial genus were Aeromonas, Salmonella, Pseudomonas, Escherichia, Ochrobactum and Klebsiella, and in the non-contaminated beach Bacillus, Paenibacillus, Micrococcus, Photobacterium and Vibrio. The microcosm assay showed that after 65 days the bacterial community of the contaminated beach was similar to that of the non-contaminated beach sediment, indicating that by withdrawing the contamination source, the affected zone can probably be recovered

Evaluation of resistance to disinfectant agents of bacteria isolated from natural environments

Los antisépticos y desinfectantes son utilizados extensivamente para la prevención, vigilancia y control de las infecciones. Entre los más utilizados se encuentran los compuestos catiónicos de amonio cuaternario (QACs). El uso y abuso cotidiano de estos compuestos ha conllevado a la selección de cepas bacterianas resistentes. En este estudio, nos propusimos evaluar la resistencia a agentes desinfectantes en cepas bacterianas, multiresistentes a los antibióticos de uso frecuente, aisladas de ambientes naturales, y bacterias aisladas de pacientes hospitalizados. Se utilizó la prueba de suspensión cuantitativa para evaluar los niveles de resistencia, y ensayos de conjugación bacteriana para examinar la posible asociación de los determinantes de resistencia a moléculas plasmídicas transferibles. Los microorganismos gramnegativos, como Pseudomonas aeruginosa, resultaron ser los más resistentes. Las cepas ambientales presentaron niveles mayores de resistencia en comparación con las hospitalarias. Se obtuvieron transconjugantes con niveles de resistencia semejantes a las respectivas cepas donantes, indicando que estos determinantes de resistencia a desinfectantes están codificados en plásmidos, y cuyo análisis por patrones de restricción demostró que existen, al menos, dos moléculas plasmídicas diseminadas entre las cepas del mismo hábitat. Nuestros resultados representan un aporte que permitirá implementar medidas más exitosas para evitar la diseminación de estas bacterias resistentes

Antiseptics and disinfectants are widely used for prevention, surveillance and control of infections. Among those most used are quaternary ammonium cationic compounds (QACs). The daily use and abuse of these compounds has resulted in the selection of resistant bacterial strains. In this study we decided to evaluate the resistance to disinfectant agents of bacterial strains multiresistant to frequently used antibiotics, both isolated from natural environments and isolated from hospital patients. The quantitative suspension test was used to evaluate resistance levels, and bacterial conjugation assays to examine the possible association of resistance determinants to transferable plasmid molecules. Gram negative microorganisms such as Pseudomonas aeruginosa appeared to be the most resistant. Environmental strains showed higher resistance levels as compared with hospital strains. We obtained transconjugants with resistance levels similar to those of the respective donor strain, indicating that these determinants of resistance to disinfectants are coded in plasmids; when analyzed by restriction patterns they showed that there were at least two plasmid molecules disseminated among the strains of the same habitat. Our results represent a contribution that will allow to implement more successful measures to avoid the dissemination of these resistant bacteria

**Use of alternative media based on casein hidrolyzates and Aspergillus niger extract and their effect over the genetic expression of an Escherichia coli strain**

La búsqueda de fuentes nutricionales alternativas, para el cultivo masivo de microorganismos, ha sido una práctica común en el área de la microbiología industrial. Sin embargo, no en todos los casos es factible hacer estas sustituciones, ya que la presencia o ausencia de ciertos nutrientes puede condicionar el crecimiento celular, así como la expresión de algunos metabolitos. En la presente investigación se formularon una serie de medios a base de hidrolizado de caseína y extracto del micelio de Aspergillus niger, para sustituir los componentes del medio Luria-Bertani (LB) en el cultivo de una cepa de Escherichia coli mejorada genéticamente. Se evaluó la calidad de los medios siguiendo el crecimiento bacteriano, comparando los parámetros cinéticos y analizando el perfil electroforético de las proteínas y ácidos nucléicos celulares totales, recuperados de los paquetes celulares al final de los cultivos. Se encontró que el medio formulado con 75% de hidrolizado de caseína y 75% de extracto del hongo, favorece el crecimiento celular y la expresión genética de igual manera que el medio LB. El perfil de proteínas celulares varía significativamente si se utiliza una proporción menor, indicando un límite en la reducción de componentes nutritivos del medio alternativo

The search for alternative nutritional sources for mass microorganism cultures has been a common practice in the area of industrial microbiology. Nevertheless, it not possible to use these substitutes in all cases since the presence or absence of certain nutrients can condition cellular growth, as well as the expression of certain metabolites. In the present investigation several media were formulated based on casein hidrolyzate and Aspergillus niger mycelium extract to substitute the components of Luria-Bertani (LB) medium, for culturing a genetically improved Escherichia coli strain. The quality of the media was evaluated by following bacterial growth, comparing the kinetic parameters and analyzing the protein electrophoretic profile and total cell nucleic acids recovered from the cell packages of final cultures. It was found that the medium formulated with 75% casein hidrolyzate and 75% fungus extract favors cell growth and genetic expression in a similar fashion to LB medium. The cell protein profile varies significantly if a smaller proportion is used, indicating a limit in the reduction of nutritive components of the alternative medium

**Minimal infective dose of the mycelium phase of Histoplasma capsulatum var. capsulatum in Balb/c mice**

El objetivo fue determinar la dosis mínima infectante (DMI) de Histoplasma capsulatum mediante inoculación de la fase micelial en ratones Balb/c, con el propósito de aportar alternativas útiles para el futuro uso de inóculos fúngicos que faciliten la reproducción de la enfermedad. Se prepararon inóculos de 50, 75 y 94% de transmitancia (T) provenientes de la mezcla de suspensiones estandarizadas de cinco aislamientos del hongo y a cada inóculo se le determinaron las unidades formadoras de colonias/mL (UFC/mL). Se inyectaron, intraperitonealmente, 100 µL de cada inóculo a tres grupos de 10 ratones, identificados como G2, G3 y G4, respectivamente. Se incluyó otro grupo como control sano (G1) y se observaron durante 15 días. La enfermedad se comprobó mediante la observación de los ratones, estudios histopatológicos y micológicos. La DMI fue de 50% T (7,5 x 10(4) UFC/mL), seleccionada en función de la presencia de hepatoesplenomegalia, nódulos en hígado y/o bazo y el porcentaje de recuperación del hongo en los subcultivos. Los resultados demostraron la reproducción de la enfermedad, con ausencia de muertes en el transcurso de 15 días de observación

The objective was to determine the Histoplasma capsulatum minimal infective dose (MID) by the inoculation of the mycelium phase in Balb/c mice, with the purpose of contributing useful alternatives for the future application of fungal inoculums which facilitate the reproduction of the disease. Several inoculums with 50, 75 and 94% transmittance (T) were prepared with a mixture of standardized suspensions from five isolations of the fungus, determining colony forming units/ml (CFU/mL) for each inoculum. Three groups of 10 mice each, identified as G2, G3 and G4, were injected intraperitoneally with 100 µl of each inoculum. Another group (G1) was included as healthy control. All mice were observed during 15 days. The disease was determined by observation of the animals, and by histopathological and mycological examinations. The MID was 50% T (17.5 x 10(4) CFU/mL ) selected on basis of the presence of hepatosplenomegaly, nodules in liver and/or spleen, and the percentage of recovery of fungi from subcultures. The results showed the reproduction of the disease in absence of deaths during the 15-day observation period

**Chromomycosis cases in Bolivar State (1987-2010) and evaluation of the in vitro sensitivity of two Fonseca pedrosoi isolates**

El objetivo de este estudio fue determinar la prevalencia de cromomicosis en un período de 23 años en dos hospitales de referencia del estado Bolívar. Se realizó un estudio retrospectivo, mediante la revisión de historias clínicas de pacientes con diagnóstico de cromomicosis, registrándose catorce casos de la enfermedad. El 78,6% correspondieron al sexo masculino, en su mayoría agricultores provenientes de zonas rurales; el 28,6% presentaron lesiones verrugosas. El tiempo de evolución de las lesiones osciló entre 5 meses y 35 años. Fonsecaea pedrosoi fue el agente etiológico aislado en tres (21,4%) de los cuatro pacientes en que las muestras fueron cultivadas. Sólo a dos aislados conservados de F. pedrosoi se les evaluó la sensibilidad in vitro mediante E-test®, demostrándose resistencia a los antifúngicos sistémicos: anfotericina B, 5-fluorocitosina, ketoconazol, fluconazol e itraconazol. Dos pacientes fueron tratados con itraconazol: uno de ellos mejoró; el otro presentó comorbilidad con micetoma eumicótico y falleció. La prevalencia de cromomicosis durante el período estudiado fue baja (0,6 casos/año), sin embargo esta infección representa un problema de salud en el personal de riesgo, principalmente agricultores y mineros del estado Bolívar, que presentan lesiones verrugosas de evolución crónica

The purpose of this study was to determine chromomycosis prevalence during a 23-year period at two reference hospitals of Bolivar State. A retrospective study was carried out through the revision of clinical case histories of patients with a chromomycosis diagnosis, registering fourteen cases of this disease. Of these cases, 78.6% corresponded to males, most of them agricultural workers from rural areas; 28.6% presented verrucous lesions. The period of evaluation of the lesions varied between 5 months and 35 years. Fonsecae pedrosoi was the etiologic agent isolated in three (21.4%) of the four patients whose samples were cultured. Sensitivity was evaluated in vitro in only two cases through E-test®, showing resistance to systemic antifungals agents: amphotericine-B, 5-fluorocytosine, ketoconazole, fluconazole and itraconazole. Two patients were treated with itraconazol, one of them improved and the other presented co-morbility with eumycotic mycetoma and died. Chromomycosis prevalence during the period studied was low (0.6 cases/year); nevertheless, this infection constitutes a health problem for risk populations, mainly agricultural and mining workers at Bolivar State who present verrucous lesions with a chronic evolution

Norovirus and rotavirus detection in oysters commercialized in Cumana, Venezuela

Los brotes de gastroenteritis en humanos han sido frecuentemente asociados con el consumo de moluscos bivalvos. En este estudio se analizaron 15 mezclas de muestras de tejido digestivo de ostras (Pinctada imbricata) comercializadas en la avenida Perimetral de Cumaná, estado Sucre, Venezuela, mediante dos métodos de procesamiento y dos métodos de extracción de ácidos nucleicos, con el fin de detectar por Transcripción Reversa de la Reacción en Cadena de la Polimerasa, el ARN de norovirus y rotavirus. Además se utilizaron cinco pares de oligonucleótidos para seleccionar el mejor en la detección de los virus. Norovirus fue detectado en 13 de las 15 mezclas de muestras con la combinación de los métodos de procesamiento A y de extracción de ácidos nucleicos B utilizando el par de oligonucleótidos JV12 y JV13. Esta combinación de métodos resultó ser la más eficaz para la detección de norovirus mediante RT-PCR. No obstante, rotavirus no se detectó en el tejido digestivo de las ostras analizadas con ninguna de las combinaciones de métodos, ni con ninguno de los pares de oligonucleótidos utilizados. La elevada presencia de norovirus en las ostras mostró su potencial de servir como vehículo de infecciones por virus entéricos

Gastroenteritis outbreaks in humans have been often associated with the ingestion of bivalve mollusks. In this study, 15 mixtures of samples of the digestive tissue of oysters (Pinctada imbricate), commercialized at the Avenida Perimetral in Cumana, Sucre State, Venezuela, were analyzed through two processing methods and two nucleic acid extraction methods, with the purpose of detecting norivirus and rotavirus RNA by the Polymerase Chain Reverse Transcription Method. Five pairs of oligonucleotids were also used, to select the best one for virus detection. Norovirus was detected in 13 of the 15 mixtures of samples using a combination of processing method A and nucleic extraction method B, and the JV12 and JV13 oligonucleotid pair. This combination of methods resulted as the most efficient for norovirus detection through PCR-RT. Nevertheless, rotavirus was not detected in the digestive tissue of any of the oysters analyzed with any of the combination of methods, or any of the oligonucleotid pairs used. The high presence of norovirus in the oysters showed their potential for serving as carriers of enteric virus infections