Investigación Clínica

Red de Virología de Venezuela

Expresión de Interferón Gamma (IFN-g), fFactor de Necrosis Tumoral alfa (TNF-a) e Interleucinas 2, 4 y 6 ( IL-2, IL-4, IL-6) en Células de Neoplasias Intraepiteliales de Cuello Uterino: Reporte Preliminar

El presente estudio fue realizado para determinar la expresión de citocinas tipo Th1: IL-2 y IFN-gamma, y Th2: IL-4 e IL-6, así como del TNF-alfa en pacientes con lesiones premalignas del cuello uterino (CU) y su relación con la infección por el Virus del Papiloma Humano (VPH). Se estudiaron 30 pacientes con lesiones pre-malignas del CU; NIC 1: 70%, NCI 2: 16,7% y NIC 3: 13,3%) y 9 controles con CU sanos. A cada paciente se le realizó una historia clínica, evaluación ginecológica que incluyó la toma de la citología cervico-vaginal (CCV) y biopsia de CU para estudio histológico e inmunológico. Se empleó la reacción en cadena de polimerasa (PCR) para el estudio del VPH. La expresión del IFN-gamma se encontró aumentada en pacientes con respecto al grupo control (5,06 ± 4,7 vs 0 media ± DS; p < 0,05). El TNF-alfase expresó discretamente elevado en los diferentes tipos de lesiones con respecto al grupo control (5,23 ± 3,63 vs 1,55 ± 2,65; p < 0,05). La IL-2 se encontró más elevada en los casos patológicos que en los controles (8,73 ± 5,23 vs 0,33 ± 1, p < 0,05). La IL-4 se expresó de manera no significativa en tejidos patológicos al compararlo con los controles (6,53 ± 5,23 vs 5,77 ± 7,32). La expresión de la IL-6 fue más elevada en las pacientes que en los controles (4,63 ± 3,34 vs 0,77 ± 2,33; p < 0,05). Al comparar pacientes VPH positivos con los controles, solo el IFN-gamma(p < 0,05) y la IL-2 (p < 0,05) fueron significantes. Sólo el IFN-gammafue significativo al comparar pacientes con o sin VPH (11,5 ± 5 vs 4,07 ± 3,8 p < 0,007). La respuesta inmunitaria tipo Th1 predomina en las lesiones premalignas, esté presente o no el VPH.

The purpose of this work was to determine the expression of type Th1 cytokines: IL-2 and IFNgamma, and Th2: IL-4 and IL-6, as well as TNF-alpha in patients with precancerous lesions of the uterine cervix and their relationship with the human papiloma virus (HPV). 30 patients with precancerous lesions (NIC 1: 70%, NIC 2: 16,7% and NIC 3: 1.3%) and 9 normal controls were studied. A clinical history, gynecological evaluation, cytology and an uterine biopsy were carried out in each patient and control. PCR was used for the diagnosis of HPV. IFN-gamma expression (positive cells/field) was increased in patients with NIC (5.06 ± 4.7 vs 0 in the control group; p < 0.05). TNFalpha was a little higher in pathologycal tissues than in the controls (5.23 ± 3.63 vs 1.55 ± 2.65; p < 0.05). IL-2 was higher in pathologycal cases than in the controls (8.73 ± 5.23 vs 0.33 ± 1, p < 0.05). IL-4 were expressed in both, patients and controls (6.53 ± 5.23 vs 5.77 ± 7.32). IL-6 was also higher in patients (4.63 ± 3.34 vs 0.77 ± 2.33; p < 0.05). When the HPV status was considered, only IFN-gamma (p < 0.05) and IL-2 (p < 0.05) were significantly higher in HPV positive patients (n=4) compared to controls. When HPV+ patients were compared with HPV- patients, only IFNgamma was significant (11.5 ± 5 vs 4.07 ± 3.8; p < 0.05). In conclusion, Type Th1 immune response prevails in patients with precancerous lesions, whether they are HPV positive or not.

Portadores Orofaríngeos de Haemophilus Influenzae en Niños Venezolanos Cuidados en Guardería o en el Hogar Vacunados o no con Vacuna Poliribofosfato Capsular de Hib Conjugada alToxoide Tetánico (PRP-T)

El objetivo del estudio fue determinar el porcentaje de colonización orofaríngea de Haemophilus influenzae tipo b (Hib) y no tipificable (HiNT) en niños, cuidados en guardería y en hogar vacunados o no con PRP/T. Se incluyeron niños sanos, menores de 7 años, excluyendo aquellos con antibióticoterapia el mes previo a la inclusión, divididos en: Grupo I vacunados y Grupo II no vacunados, subdivididos según cuidados en hogar o guardería. Se obtuvieron hisopados orofaríngeos para cultivo, identificación y serotipificación de Hi (Phadebact Test); como medidas estadísticas se utilizaron Chi cuadrado, test de Fishers y Z y el "odds ratio". Se incluyeron 320 niños, 99 del Grupo I (49 en hogar y 50 en guarderías) y 221 en Grupo II (94 y 127, respectivamente). El porcentaje de portadores fue 22,8 (17,8% HiNT y 5% Hib). En el grupo I sólo se identificó HiNT y en el grupo II, de 56 cepas, 16 fueron Hib (p = 0,016). Predominó el Hib en guarderias (odds ratio = 13,5). La colonización por HiNT fue similar en ambos grupos, cuidados en el hogar (18 vs 19%) y en guarderías (16 vs 17%). En el grupo II la colonización por Hib fue mayor en guarderías (12%) que en el hogar (1%) (p = 0,002). En conclusión, el porcentaje de colonización por Hib en la muestra total y en no vacunados del hogar fue semejante a países desarrollados en la era prevacuna. La ausencia de la vacuna PRP-T y la asistencia a guarderías son factores de riesgo para colonización por Hib.

The objective was to estimate the oropharyngeal carrier rate of Haemophilus influenzae type b (Hib) and non typeable (NTHi) in unvaccinated and vaccinated children, with PRP/T vaccine, both cared at home and attending day care centers. Healthy children of either sex, younger of 7 years, excluding those that received antibiotics one month prior to the inclusion, were recruited from control clinics for healthy babies, and assigned to Group I fully immunized and Group II unimmunized. Both, children cared at home and attending day care centers were included. Parents provided an informed consent. Specimens were obtained from the oropharynx for culture, identification and serotyped by slide agglutination (Phadebact Haemophilus test). P values were obtained with Chi-square, Fishers and Z test. Odds ratio was obtained when appropriated. Results were as following: a total of 320 children were enrolled, 99 in group I (49 cared at home, 50 attending day care) and 221 in group II (94 cared at home, 127 attending day care) the percentage of carriers was 22.8% (17.8% NTHi and 5% Hib). The carriage rate of NTHi was similar in groups I and II cared at home (18%vs 19%), and for those attending day care were 16% vs 17%. Carriage rate of Hib in children attending day care of group II was 12% vs 1% of those cared at home (p=0.002). None of the children in group I was colonized by Hib. The Hib carrier rate was more similar to that of industrialized countries in the pre vaccine era in children cared at home, however, attendance to a day care center significantly increases its risk. The PRP/T vaccine appears to prevent the carrier state in both care settings.

Expresión de Receptores de Quimiocinas (CXCR-4 y CCR-5) en Placenta Humana Normal a Término

La interfase materno-fetal posee un Sistema Inmunitario (SI) activo cuyos mediadores -células, citocinas y quimiocinas-, intervienen coordinadamente para favorecer el desarrollo normal del embarazo. No se conoce con exactitud cuales de esos mediadores están presentes en cada estrato celular de la placenta y cuales pueden ser las consecuencias fisiológicas o potencialmente patológicas derivadas de su presencia. Se sabe que las quimiocinas reclutan hacia la decidua células con actividad reguladora y algunos de sus receptores son correceptores para agentes infecciosos como el VIH, por lo que en los últimos años ha cobrado gran interés investigar la expresión de quimiocinas y sus receptores en la interfase materno-fetal. En el presente trabajo se investigó la expresión de los receptores de quimiocinas (CXCR-4 y CCR-5) en 8 muestras de placenta humana normal obtenidas de embarazos a término, de bajo riesgo obstétrico, utilizando técnicas de Inmunocitoquímica (Biotina-Avidina-Peroxidasa). El hallazgo más relevante de este estudio es la demostración de la expresión diferencial de CXCR-4 y de CCR-5 en trofoblasto, estroma y endotelio, y representa, hasta donde conocemos, el primer reporte de la presencia de estos receptores en todas las capas del tejido placentario. Estos resultados contribuyen a ampliar el conocimiento sobre la expresión de receptores de quimiocinas -que actúan como correceptores fundamentales en la infección por VIH-, en la interfase materno-fetal, y puede ser un aporte a ser tomado en cuenta en el estudio de la transmisión vertical de ese agente infeccioso.

The maternal-fetal interphase has an active Immunitary System (IS) whose mediators -cells, cytokines and chemokines- coordinately act to favour pregnancy normal development. It is not known exactly which of those mediators are present in each placental cellular stratus and what the physiological or potentially pathologic consequences derived from their presence can be. It is known that chemokines recruit cells with regulatory activity towards the deciduous and some of their receptors are coreceptors to infectious agents like HIV, making research of chemokines expression and their receptors in the maternal-fetal interphase of great interest in recent years. In the present study, the CXCR-4 and CCR-5 expression was investigated in 8 samples of normal human placenta obtained from term pregnancies, with low obstetric risk, by using Immunocitochemical techniques (Biotin-Avidin-Peroxidase). The most relevant finding in this study was the demonstration that CXCR-4 and CCR-5 differential expression in trophoblast, stroma and endothelium represents, as far as we know, the first report of the presence of these receptors in all layers of placental tissue. These results help to broaden the knowledge about the expression of chemokines receptors -that act as main coreceptors in the HIV infection- in the maternal-fetal interphase, and this can be a contribution to be taken into account in the vertical transmission study of this infectious agent.

Casuística de las Micosis en el Hospital Universitario "Ruiz y Páez". Ciudad Bolívar, Venezuela, 2002

Con el objetivo de determinar la prevalencia de las micosis en el Hospital Universitario "Ruiz y Páez" (Ciudad Bolívar, Venezuela) durante el año 2002, se realizó un estudio retrospectivo de los casos con diagnóstico de micosis. Hubo 456 casos de micosis de un total de 250.956 pacientes atendidos en el período 2002 (0,2%). El 94,5% eran micosis cutáneas. Estas infecciones fueron debidas a dermatofitos, Malassezia furfur y Candida spp. en el 90,0% de las veces. Las micosis profundas ocurrieron en un 4,7%, consistentes en histoplasmosis (2,6%), paracoccidioidomicosis (1,7%) y criptococosis (0,4%). Varios de los pacientes afectos de micosis sistémicas presentaban otras patologías concomitantes, como infección por el Virus de la Inmunodeficiencia Humana, tuberculosis, neoplasias y trastornos hematológicos. La frecuencia de micosis en la población general atendida en el Hospital Universitario "Ruiz y Páez" es baja, predomina la afectación superficial, y la profunda suele evidenciarse en pacientes con factores predisponentes.

To estimate the prevalence of mycoses in the Universitary Hospital "Ruiz y Páez" (Bolivar State, Venezuela) during 2002, a retrospective study was carried out. Four hundred and fifty six mycoses were diagnosed in 250,956 patients. The most frequent mycoses, the cutaneous form (94.5%), were produced by dermatophytes, Malassezia furfur and Candida spp. in 90%. Deep mycoses were detected in 4.7% and consisted of histoplasmosis (2.6%), paracoccidioidomycosis (1.7%) and cryptococcosis (0.4%). Several patients with deep mycoses presented HIV infection, tuberculosis and hematological disorders (neoplasias among them). The frequency of mycoses in the general population that attend the Hospital Universitario "Ruiz y Páez" is low, superficial mycoses are predominant, and some conditions seem to predispose to deep mycoses.

Evaluación de la Infección por Helicobacter Pylori en Pacientes VIH Positivos Mediante Ensayos Inmunoenzimáticos y Amplificación Específica de ADN

El objetivo del presente trabajo fue valorar la eficacia de la detección de anticuerpos específicos anti Helicobacter pylori (H. pylori) vs técnicas de amplificación de ADN (PCR) como métodos diagnósticos de infección por H. pylori en pacientes VIH positivos. Se estudiaron 22 pacientes con infección por VIH, de 26 a 35 años, 17 masculinos, 55% con síntomas gastrointestinales, controlados en la Unidad de Inmunología de la CHET. Criterios de inclusión: mayores de 18 años, diagnóstico confirmado de infección por VIH (ELISA y WB), fenotipo celular, buenas condiciones generales. Se exigió consentimiento informado por escrito. Criterios de exclusión: diagnóstico previo de infección por H. pylori o tratamiento con antibióticos en los tres meses previos a su inclusión. La cuantificación de IgG anti H. pylori se realizó por métodos inmunoenzimáticos (ELISA). La muestra de mucosa gástrica se obtuvo por endoscopìa digestiva superior. La amplificación del ADN del H. pylori por PCR (Ensayo comercial Wizard SV Genomik y PCR Ready-Promega). En el procesamiento estadístico se utilizó como prueba de significación estadística el test exacto de Fisher, con un nivel de significación del 5% (0,05). En 15 pacientes del grupo total se confirmó la presencia de anticuerpos anti H. pylori, sin asociación estadística con la presencia o no de sintomatología digestiva, ni con el número de linfocitos CD4 + en sangre periférica.También 15 pacientes fueron PCR positivos para el ADN del H. pylori, de los cuales, el 73,3% presentaron niveles de CD4+ por encima de 200 células. No se encontró asociación estadística entre la positividad de este método y los niveles de linfocitos CD4+. En 12 de los 15 pacientes con resultados positivos por PCR, se evidenciaron anticuerpos anti H. pylori, y entre los 7 pacientes con serología negativa para H. pylori, la PCR fue positiva en tres de ellos. En conclusión, la serología es un método diagnóstico eficaz de infección por H. pylori en pacientes VIH+, pero su negatividad no descarta la presencia de infección por este bacilo.

The objective of this work was to assess the effectiveness of detection of specific antibodies anti-Helicobacter pylori (H. pylori) by ELISA and amplification of specific DNA by polimerase chain reaction (PCR) as diagnostic methods of infection of H. pylori in HIV positive patients. Twenty two patients with HIV infection were studied, with ages between 26 to 35 years, 17 masculine, 55% with gastrointestinal symptoms, controlled in the Unit of Immunology, CHET. Inclusion approaches: older than 18 years, with confirmed diagnosis of HIV infection (ELISA and WB), lymphocyte subpopulation and good general conditions. Consent in writing was obtained. Exclusion approaches: previous diagnosis of H. pylori infection or treatment with antibiotics in the three previous months to their inclusion. The quantification of IgG anti H. pylori was carried out by Enzyme Immunoassay methods (ELISA). Biopsy of gastric mucosa was obtained by superior endoscopic study. The amplification of DNA for H. pylori was performed by PCR (Wizard SV Genomik and PCR Ready-Promega). In the statistical analysis was used the test of Fisher, with a level of significance of 5% (0.05). In 15 patients of the total group, antibodies anti H. pylori were confirmed, without statistical association with the presence or not of digestives symptoms, neither with the number of lymphocytes CD4 + in peripheral blood. Also 15 patients were positives by PCR for H. pylori DNA, 73.3% of them presented levels of CD4+ above 200 cells. There was not statistical association between the positivity of this method and levels of lymphocytes CD4+. In 12 of the 15 patients with positive results by PCR, antibodies anti H. pylori were evidenced, and among the 7 patients with negative serology to H.pylori, PCR was positive in three of them. In conclusion, serology is an effective method for the diagnose of H. pylori infection in VIH+ patients, but its negativity doesnt discard the infection for this bacillus.

Vitamina B12, Acido Fólico y Función Mental en Adultos Mayores

Los adultos mayores constituyen un grupo de población vulnerable a cuadros de deficiencias de nutrientes específicos como la vitamina B12 y el ácido fólico, íntimamente ligados al deterioro de las funciones mentales, en especial, del área cognitiva. El objetivo de este estudio fue determinar indicadores del estado de vitamina B12 y ácido fólico y asociarlos a la evaluación de la función mental de 53 adultos mayores de 60 años de edad, residenciados en un hogar geriátrico. Se evaluó consumo dietario por pesada directa individual, niveles de vitamina B12 y folato sérico por radioinmunoanálisis y función mental por la prueba del mini mental de Foltein. Se encontró un consumo promedio adecuado para vitamina B12 y deficiente para ácido fólico, mientras que los niveles séricos estuvieron dentro del rango normal de referencia. El 26,4% de los ancianos estaba en situación de déficit o riesgo de deficiencia de vitamina B12, y el 43,4 de ácido fólico. Cuarenta y nueve por ciento de los adultos mayores presentó una evaluación mental deficiente y los niveles de vitamina B12 fueron más bajos en este grupo con una diferencia estadística significativa. Se observó una asociación significativa entre edad y función mental, siendo menor el riesgo en los adultos menores de 80 años; así como una correlación positiva significativa entre vitamina B12 sérica y función mental. Se concluye que los ancianos estudiados se encontraban en situación de riesgo de deficiencia de estas vitaminas y que hubo asociación con edad y función mental que debe ser explorada con la evaluación simultánea de otros nutrientes intervinientes.

Elderly people is a vulnerable population group to specific nutrient deficiencies as vitamin B12 and folic acid, which are closely related to mental functions deterioration, especially of cognitive functions. This study was aimed to measure B12 vitamin and folic acid indicators and to establish relationships to mental function. 53 elderly, older than 60 years, living in a geriatric home were assessed. The dietary intake was evaluated by the direct weighed method, serum B12 vitamin and folic acid by radioimmunoanalysis and mental function by Foltein´s mini-mental test. Dietary intake for Vit B12 was adequate and deficient for folic acid while serum levels were within normal range. Vitamin B12 levels were at marginal or deficiency values in 26,4% of the elderly and folic acid deficiency was present in 43.4%. 49% of the elderly had mental function alterations and B12 vitamin levels were significantly lower in this group. A positive association between age and mental function (elderly below 80 years had lower risk of mental impairment) and between serum B12 and mental function were found. Elderly were at risk of deficiency for both vitamins and age and mental function were associated to this risk. Further evaluation including other nutrients should be performed

Frecuencia de Micosis Superficiales: Estudio Comparativo en Pacientes Diabéticos tipo 2 y en Individuos no Diabéticos

Se considera que las micosis superficiales son más frecuentes en pacientes diabéticos tipo 2 (DM-2) especialmente la onicomicosis y la Tinea pedis. El objetivo de este estudio fue comparar la frecuencia de dermatofitosis, candidiasis y pitiriasis versicolor entre 40 pacientes DM-2 y 40 personas sanas, de ambos sexos con 40 años de edad o más. Se realizó examen clínico, metabólico, micológico e inmunológico con antígenos de Candida albicans. Treinta diabéticos (75%) y 26 (65%) individuos del grupo control presentaron una alta frecuencia de micosis superficiales (diferencia no significativa p=0,329). No se detectó ningún caso de pitiriasis versicolor en los diabéticos. Estos presentaron con mucho mayor frecuencia Tinea unguium concomitante a Tinea pedis. Trichophyton rubrum fue el dermatofito predominante 18/23 (78%) en diabéticos y 8/16 (50%) en no diabéticos. Se aisló Candida como comensal en mucosa oral: en 23 (58%) diabéticos y en 21/(52%) no diabéticos (el serotipo A fue el más frecuente), y en onicomicosis: 11/40 (28%) diabéticos y 12/40 (30%) no diabéticos. La respuesta inmunitaria fue la misma en ambos grupos: celular 100% y humoral 20%. No se observó correlación estadística entre la frecuencia de las micosis superficiales, los niveles de glucosa en sangre, los valores de hemoglobina glicosilada ni el tiempo de evolución de la diabetes. La alta susceptibilidad a infecciones por dermatofitos y Candida sp. estaría relacionada con la edad y no con la condición de diabético tipo 2 en estos pacientes.

Superficial mycoses are considered to affect more frequently patients with type 2 diabetes mellitus (DM-2), specially onychomycosis and Tinea pedis. The purpose of this study was to compare the dermatophytoses, candidiasis and Pitiriasis versicolor frequency between 40 patients with DM-2 and 40 healthy persons of either sex, 40 years old or more. Clinical, metabolic, mycologic and inmunologic studies against Candida albicans, were carried out. Both diabetics 75% (30/40) and controls 65% (26/40) presented a high frequency of superficial mycoses (no significant difference p=0,329). Pitiriasis versicolor was not detected in diabetic patients. They presented Tinea unguium, concomitant with Tinea pedis, with a higher frequency. The predominant dermatophyte was Trichophyton rubrum 18/23 (78%) in diabetics and 8/16 (50%) in non diabetics. Candida was isolated as commensal from oral mucous: 23/40 (58%) in diabetics and 21/40 (52%) in non diabetics (serotipo A was the more frequent), and from onychomycosis: 11/40 (28%) in diabetics and 12/40 (30%) in non diabetics. The immunological response was the same in both groups: celular 100%, humoral 20%. No statistical correlation among superficial mycoses, blood glucose level, glycosylated hemoglobin values or the time suffering the disease was observed. The high susceptibility to dermatophytes and Candida sp. infection showed to be associated with age and no with the diabetic type 2 condition in those patients.

Síndrome Respiratorio Agudo Severo (SRAS): Lecciones y Retos

Después de varios meses de silencio, ante una nueva incursión del virus causante del Síndrome Respiratorio Agudo Severo (SRAS), investigadores en todo el mundo y especialmente asiáticos se enfrentan a un coronavirus que ha demostrado gran transmisibilidad y morbilidad y que constituye una gran incógnita en cuanto a origen y asociación con otros patógenos que actuando como oportunistas puedan agravar la progresión de la enfermedad. La comparación de la secuencia genómica de distintas cepas ha generado discrepancias en cuanto a si la epidemia de SRAS surgió como un brote único o fue producida por más de un genotipo; sin embargo este hecho es secundario ante la inminente amenaza que fue controlada en agosto de 2003 después de afectar a 8.422 individuos pero ante la cual se debe permanecer alerta, dado que está claro que no se ha marcado el fin del SRAS y que la aparición de un solo caso puede significar el comienzo de una nueva oleada, aunado a la aparición de otras enfermedades como la influenza aviaria. De allí la importancia de conocer las bases epidemiológicas sobre las cuales se ha establecido la morbi-mortalidad de esta afección y asegurar la persistencia de la vigilancia mundial en el futuro, hecho crucial para detectar a tiempo posibles casos y por ende controlar su diseminación.

After four months of silence before a new incursion of severe acute respiratory syndrome virus (SARS), world wide investigators specially from Asia had have to face a coronavirus capable of great spreading and inducing high morbidity. The source and the capacity of this virus to associate with other opportunist microorganisms to induce progression of the disease, remain unclear. The comparison of the genomic sequence of different strains has generated discrepancies as for if the SARS epidemic arose as an unique outbreak or it was produced for more than one genotype. However, this fact is secondary to the imminent threat that was controlled in August of 2003, after affecting 8.422 individuals, but before which we should be remain alert, since it is clear that the end of the SARS is not yet here; and that the appearance of a single case can mean the beginning of a new wave, joining the outbreak of other diseases such as the avian flu. In this regard, it is very important to know the epidemic bases of morbid-mortality of SARS and to keep a world wide surveillance in order to detect possible further cases.