Investigación Clínica

Instituto de Investigaciones Clínicas “Dr. Américo Negrette”: 55 años de Investigación de excelencia versus recesión económica global

Estudio comparativo entre los sistemas automatizados Vitek YBC® y Microscan Walk Away RYID® con los métodos fenotípicos convencionales para la identificación de levaduras de interés clínico

El objetivo de este trabajo fue comparar la identificación de levaduras de interés clínico por los métodos automatizados Vitek YBC® y Microscan Walk Away RYID® con los métodos fenotípicos convencionales. Se utilizaron 193 aislamientos de levaduras provenientes de muestras clínicas y cinco cepas controles. Todas las levaduras fueron identificadas por los métodos automatizados antes nombrados y los métodos fenotípicos convencionales de asimilación de carbohidratos, visualización de la morfología microscópica con agar harina de maíz y el uso de agar cromogénico. Para evaluar las variables se utilizaron tablas de contingencia de 2×2, Chi cuadrado de Mc Nemar, el índice Kappa, y se calcularon los valores de concordancia, así como los errores mayores y menores de los métodos automatizados. Las levaduras se dividieron en dos grupos: 1) de aislamiento frecuente y 2) de aislamiento poco frecuente. Los sistemas Vitek YBC® y Microscan Walk Away RYID® fueron concordantes en un 88,4 y 85,9% respectivamente, cuando se compararon con los métodos fenotípicos convencionales. Aunque ambos sistemas automatizados se pueden utilizar para la identificación de levaduras, la presencia de errores mayores y menores indica la posibilidad de identificaciones incorrectas, por lo tanto, el operador de estos equipos debe utilizar paralelamente pruebas fenotípicas como la visualización de la morfología microscópica en agar harina de maíz y el agar cromogénico, sobre todo frente a levaduras de aislamiento poco frecuente. Los sistemas automatizados son una herramienta valiosa, sin embargo, la experiencia y el criterio del microbiólogo son una fortaleza importante para asegurar la calidad de los resultados.

The aim of this study was to compare the identification of clinically relevant yeasts by the Vitek YBC® and Microscan Walk Away RYID® automated methods with conventional phenotypic methods. One hundred and ninety three yeast strains isolated from clinical samples and five controls strains were used. All the yeasts were identified by the automated methods previously mentioned and conventional phenotypic methods such as carbohydrate assimilation, visualization of microscopic morphology on corn meal agar and the use of chromogenic agar. Variables were assessed by 2×2 contingency tables, McNemars Chi square, the Kappa index, and concordance values were calculated, as well as major and minor errors for the automated methods. Yeasts were divided into two groups: 1) frequent isolation and 2) rare isolation. The Vitek YBC® and Microscan Walk Away RYID® systems were concordant in 88.4 and 85.9% respectively, when compared to conventional phenotypic methods. Although both automated systems can be used for yeasts identification, the presence of major and minor errors indicates the possibility of misidentifications; therefore, the operator of this equipment must use in parallel, phenotypic tests such as visualization of microscopic morphology on corn meal agar and chromogenic agar, especially against infrequently isolated yeasts. Automated systems are a valuable tool; however, the expertise and judgment of the microbiologist are an important strength to ensure the quality of the results.

Micosis superficiales en pacientes del estado Anzoátegui, Venezuela, periodo 2002-2012

Las enfermedades fúngicas superficiales que afectan la piel y sus faneras son motivo de consultas en los servicios básicos de triaje y en dermatología. Se encuentran distribuidas en Venezuela con una incidencia de 92,9%. El objetivo del presente estudio fue conocer los géneros y especies que causan dermatomicosis en pacientes residentes del estado Anzoátegui, Venezuela, en el período 2002-2012. Se estudiaron 4257 pacientes con edades entre 7 meses y 79 años. La prevalencia general fue de 30,9%. Las más frecuentes fueron las dermatofitosis (44,7%). M. canis produjo 148 casos de tiña de la cabeza. Tres agentes dermatofiticos representaron el 95% de todos los casos, con predominio significativo de T. mentagrophytes representado por un 50%. La candidosis se presentó en 28,4%. C. albicans, y el complejo C. parapsilosis, fueron responsables del 80% de los casos. Otras especies identificadas fueron C. tropicalis (n = 41; 11,0%), C. glabrata (n = 10; 2,7%), C. guilliermondii (n = 6; 1,6%), C. krusei (n = 4; 1,1%). Pitiriasis versicolor se presentó en (22,4%), y en menor frecuencia la onicomicosis por mohos no dermatofitos, dominando Fusarium oxysporum (n = 34; 65,4%), Aspergillus terreus (n = 16; 30,8%) y Scytalidium dimidiatum (2; 3,8%). Raros casos de onicomicosis por Trichosporon (0,5%) y un caso de tinea negra. Estos resultados revelan una alta frecuencia de las micosis superficiales con predominio de las dermatofitosis indicando la existencia de un problema de salud pública.

Superficial fungal diseases that affect the skin and its appendages are frequently seen in basic triage and in dermatology services. These diseases are distributed in Venezuela with an incidence of 92.9%. The aim of this study was to determine the genera and species that cause dermatomycoses in residents of Anzoátegui state, Venezuela, during the period 2002-2012. A total of 4257 patients with a presumptive diagnosis of superficial mycoses were studied, with ages from 7 months to 79 years. The overall prevalence was 30.9%. The most frequent were dermatophytosis (44.7%). M. canis produced 148 cases of tinea capitis. Three dermatophytic agents represented 95% of all cases, with a significant predominance of T. mentagrophytes with 50%. Candidosis occurred in 28.4%. C. albicans, and the C. parapsilosis complex, were responsible for 80% of the cases. The other species identified were C. tropicalis (n = 41, 11.0%), C. glabrata (n = 10, 2.7%), C. guilliermondii (n = 6, 1.6%), C. krusei (n = 4, 1.1%). Pityriasis versicolor occurred in 22.4% of the cases studied, and less frequently were present onychomycosis produced by a non dermatophytic mold: Fusarium oxysporum (n = 34, 65.4%), Aspergillus terreus (n=16, 30.8%) and Scytalidium dimidiatum (n=2; 3.8%). Rare cases of Trichosporon onychomycosis (0.5%) and one case of black tinea were also found. Health education in the population is recommended to promote measures to prevent transmission of these fungi and prevent the spread of this silent public health problem.

Péptido natriurético tipo B en pacientes con enfermedad de Chagas: utilidad diagnóstica en la insuficiencia cardíaca

La determinación de los niveles sanguíneos del péptido natriurético tipo B (BNP) ha demostrado ser de utilidad como marcadora de diagnóstico y pronóstico en la insuficiencia cardíaca congestiva. El objetivo del estudio fue cuantificar el BNP para conocer su asociación con el grado de disfunción sistólica en la enfermedad de Chagas. Se evaluaron 64 pacientes de la consulta de Chagas en la Unidad Cardiopulmonar del Hospital Universitario Dr. Luis Razetti, Barcelona, estado Anzoátegui, Venezuela, durante el periodo 2010-2011. Luego de la confirmación de la seropositividad a anticuerpos anti T. cruzi mediante tres pruebas inmunoserológicas (ELISA, inmunofluorescencia indirecta y hemaglutinación indirecta), los pacientes fueron clasificados en los Grupos I, II y III de la enfermedad cardíaca mediante la valoración del electrocardiograma, ecocardiograma y radiografía de tórax. En el estudio se incluyeron como controles a 33 pacientes cardiópatas seronegativos y a ocho voluntarios sanos. Los valores de BNP en los grupos fueron: Chagas I=18,87±18,00 pg/mL (n=20), Chagas II=99,88±171,52 pg/mL (n=24) y Chagas III=365,80±280,54 pg/mL (n=20). Se empleó como parámetro de referencia a la fracción de eyección del ventrículo izquierdo (FEVI <40%), los valores de sensibilidad y especificidad del BNP fueron 85,0% y 93,2% respectivamente (p< 0,0001; IC 95%), con un valor pronóstico del 89,0% (p=0,006). Estos resultados colocan al BNP en una posición equivalente a la del ecocardiograma para la evaluación de los pacientes cardiópatas, con las ventajas de simplicidad y rapidez de esta prueba bioquímica que la hace aplicable a estudios de campo en zonas endémicas de acceso limitado a los estudios ecocardiográficos.

The assessment of the type-B natriuretic peptide (BNP) has shown utility as a diagnostic and prognostic tool of heart failure. The aim of this study was to evaluate the BNP levels and to know its association within the systolic dysfunction level on Chagas disease. During the period 2010-2011, 64 patients were evaluated in the Chagas clinic of the Cardiopulmonary Unit of the University Hospital Dr. Luis Razetti, Barcelona- Anzoátegui state, Venezuela. After confirming the seropositive state to antibodies anti-T. cruzi with three inmunoserological tests (ELISA, indirect inmunofluorescence and indirect hemaglutination), patients were classified into Groups I, II and III of cardiac disease, by the evaluation with electrocardiogram, echocardiogram and thorax radiography. Thirty three seronegative cardiological patients and eight healthy volunteers were included in the study as controls. BNP groups levels were as follow: Chagas I = 18.87±18.00 pg/mL (n=20), Chagas II = 99.88±171.52 pg/mL (n=24) y Chagas III = 365.80±280.54 pg/mL (n=20). The sensitivity and specificity of BNP were 85.0% y 93.2%, respectively, (p< 0.0001; IC 95%), employing as parameter of reference the left ventricle fraction ejection (LVFE <40%), with a prognostic value of 89.0% (p=0.006). These results place the BNP in an equivalent position with the echocardiogram for the evaluation of cardiological patients, with the benefits of rapidity and simplicity, which makes the determination of this biochemical parameter a useful tool to perform field studies in endemic zones with limited access to the echocardiographic test.

Estructura poblacional y análisis epidemiológico molecular de Mycobacterium tuberculosis en el municipio Sucre, estado Miranda, Venezuela

Sucre municipality is a large, densely populated marginal area in the eastern part of Caracas, Venezuela that consistently has more cases of tuberculosis than other municipalities in the country. To identify the neighborhoods in the municipality with the highest prevalence of tuberculosis, and determine whether the Mycobacterium tuberculosis strain distribution in this municipality is different from that previously found in the western part of Caracas and the rest of Venezuela, we collected data on all tuberculosis cases in the municipality diagnosed in 2005-6. We performed two separate molecular epidemiological studies, spoligotyping 44 strains in a first study, and spoligotyping 131 strains, followed by MIRU-VNTR 15 on 21 clustered isolates in the second. With spoligotyping, the most common patterns were Shared International Type SIT17 (21%); SIT42 (15%); SIT93 (11%); SIT20 (7%); SIT53 (6%), a distribution similar to other parts of Venezuela, except that SIT42 and SIT20 were more common. MIRU-VNTR 15 showed that six of seven SIT17 strains examined belonged to a large cluster previously found circulating in Venezuela, but all of the SIT42 strains were related to a cluster centered in the neighborhoods of Unión and Maca, with a MIRU-VNTR pattern not previously seen in Venezuela. It appears that a large percentage of the tuberculosis in the Sucre municipality is caused by the active transmission of two strain families centered within distinct neighborhoods, one reflecting communication with the rest of the country, and the other suggesting the insular, isolated nature of some sectors.

El municipio Sucre es un área densamente poblada del este de Caracas, Venezuela, con más casos de tuberculosis que otros municipios del país. Para establecer las áreas en el municipio Sucre con la mas alta prevalencia de tuberculosis y determinar sí la distribución de cepas de Mycobacterium tuberculosis es diferente de las encontradas previamente en el Oeste de Caracas y el resto de Venezuela, se recolectaron los datos de todos los casos diagnosticados de tuberculosis en el municipio en el 2005-6. Además, se aplicaron dos estudios de epidemiología molecular, el primero con 44 aislados en 2006 y el segundo con 131 aislados del 2006 al 2011, todos caracterizados por spoligotyping. Fue aplicada la técnica MIRU VNTR15 sobre 21 aislados agrupados. Con spoligotyping, los patrones encontrados fueron SIT17 (21%); SIT42 (15%); SIT93 (11%); SIT20 (7%); SIT53 (6%), presentando una distribución similar en otras partes de Venezuela, con la diferencia de que el SIT42 y el SIT20 fueron comunes en el municipio. MIRU VNTR15 mostró que seis de las siete cepas SIT17 pertenecían a un gran grupo encontrado previamente en Venezuela, mientras las cepas SIT42, estaban relacionados a un grupo concentrado en los Barrios Unión y Maca, con un patrón MIRU VNTR no visto previamente en Venezuela. Los resultados indicarían que un gran porcentaje de tuberculosis en el municipio Sucre es causada por transmisión activa de dos familias, una reflejando comunicación con el resto del país, y otra sugiriendo que es un aislado propio de algunos Barrios del municipio.

La administración de melatonina a largo plazo mitiga el estrés oxidativo mediado por paraquat en Drosophila melanogaster

We investigated the effect of melatonin (MEL) in the activities of cytosolic superoxide dismutase (SOD) and catalase as well as in the levels of H2O2 and mitochondrial malondialdehyde (MDA) in paraquat-intoxicated Drosophila melanogaster. Paraquat (40 mM) was administrated for 36 h. Three groups of flies intoxicated with paraquat were used: PQ (exposed during 36h to paraquat), PQ-MEL (exposed during 36h to paraquat and then treated with MEL [0.43 mM] for 12 days) and PQ-Control (maintained in standard corn meal for 12 days). Two additional groups without pre-intoxication with PQ were added: Control (maintained in standard corn meal) and MEL (treated with MEL for 12 days). Immediately after PQ intoxication the concentration of MDA (17.240 ± 0.554 nmoles MDA/mg protein) and H2O2 (3.313 ± 0.086 nmol hydrogen peroxide/mg protein) and the activities of SOD and catalase (419.667 ± 0.731 and 0.216 ± 0.009 Units/mg of protein, respectively) in the PQ group were significantly increased with respect to Control. After 12 days of intoxication with PQ, the PQ-Control flies showed increases in H2O2 (4.336 ± 0.108) and MDA levels (8.620 ± 0.156), and in the activities of SOD and catalase (692.570 ± 0.433 and 0.327 ± 0.003, respectively) as compared to PQ-MEL (p<0.001). Treatment with MEL extended the life span of the groups PQ-MEL and MEL when compared to their corresponding controls. Motor activity decreased significantly in PQ-Control and PQ-MEL flies, suggesting that the damage caused by PQ affected the nervous system of flies. Our findings showed that oxidative damage caused by paraquat was observed even after 12 days and that melatonin mitigates this damage.

Investigamos el efecto de la melatonina (MEL) en la actividad de la superóxido dismutasa citosólica (SOD) y la catalasa, así como en las concentraciones del H2O2 y del malondialdehido mitocondrial (MDA) en la toxicidad inducida por paraquat (PQ) en Drosophila melanogaster. El paraquat (40 mM) fue administrado durante 36h. Tres grupos de moscas se utilizaron después de la intoxicación con paraquat: PQ (expuestas a paraquat durante 36 h), PQ-MEL (expuestas durante 36 horas a PQ y luego tratadas con MEL [0,43 mM] por 12 días) y PQ-Control (mantenidas en medio estándar por 12 días). Se incluyeron dos grupos adicionales sin pre-intoxicación con PQ: Control (mantenido en medio estándar) y MEL (tratado con MEL por 12 días). Inmediatamente después de la intoxicación con PQ, las concentraciones de MDA (17,240 ± 0,554 nmol de MDA/mg de proteína), H2O2 (3,313 ± 0,086 nmol de H2O2/mg de proteína) y las actividades de la SOD y catalasa (419,667 ± 0,731 y 0,216 ± 0,009 unidades/mg de proteína, respectivamente) se incrementaron significativamente con respecto al Control. Doce días después de la intoxicación con PQ, las moscas PQ-Control mostraron un aumento en la concentración de H2O2 (4,336 ± 0,108), de los niveles de MDA (8,620 ± 0,156) y en las actividades de la SOD y la catalasa (692,570 ± 0,433 y 0,327 ± 0,003, respectivamente) en comparación con el grupo PQ-MEL (p<0,001). El tratamiento con MEL extendió el tiempo de vida de los grupos PQ-MEL y MEL en comparación con sus correspondientes controles. La actividad motora disminuyó significativamente en las moscas de los grupos PQ-Control y PQ-MEL, lo que sugiere que el PQ afectó el sistema nervioso de las moscas. Nuestros hallazgos demostraron que el daño oxidativo causado por paraquat en las moscas fue observado aún después de 12 días de intoxicadas y que la melatonina logró mitigar este daño.

**Mutación c.1190-1delG/N en el intrón 8 y c.1708G>C/N en el exón 12 no reportada en el gen de IDUA desarrolló un fenotipo clínico de síndrome de Scheie**

Mucopolysaccharidoses are a group of lysosomal storage disorders caused by deficiency of enzymes catalyzing the degradation of glycosaminoglycans. Mucopoly-saccharidosis I can present a wide range of phenotypic characteristics with three major recognized clinical entities: Hurler and Scheie syndromes represent phenotypes at the severe and mild ends of the clinical spectrum, respectively, and the Hurler-Scheie syndrome is intermediate in phenotypic expression. These are caused by the deficiency or absence of α-L-iduronidase, essential to the metabolism of both dermatan and heparan sulfate, and it is encoded by the IDUA gene. We report the case of a 34-year-old male patient with enzymatic deficiency of α-L-iduronidase, accumulation of its substrate and a previously unreported mutation in the IDUA gene that developed a phenotype of Scheie syndrome.

Las mucopolisacaridosis son un grupo de trastornos de almacenamiento lisosomal causada por la deficiencia de enzimas que catalizan la degradación de glicosaminoglicanos. La mucopolisacaridosis tipo I puede presentar un amplio rango de características fenotípicas englobadas en tres entidades clínicas reconocidas: los síndromes de Hurler y Scheie representan los fenotipos graves y leves del espectro clínico, respectivamente y el síndrome de Hurler-Scheie intermedio en la expresión fenotípica. Estos son causados por la deficiencia o ausencia de la α-L-iduronidasa esencial para el metabolismo del dermatán y el heparán sulfato y es codificada por el gen IDUA. Se presenta el caso de paciente masculino de 34 años de edad con deficiencia enzimática de α-L-iduronidasa, acumulación de su sustrato y una mutación en el gen IDUA, no reportada previamente, que desarrolló un fenotipo del síndrome de Scheie.

Células madre y cáncer

La cirugía, la radioterapia y la quimioterapia siguen siendo los tratamientos reconocidos universalmente como los más efectivos en la lucha contra el cáncer, a pesar de los avances logrados para elucidar sus mecanismos moleculares y haber desarrollado nuevas y sofisticadas técnicas para su tratamiento. Al ser esta enfermedad un importante problema de salud pública, el descubrimiento y estudio de las células madres tumorales ha creado nuevas líneas de investigación dirigidas a comprender y controlar la recurrencia de un tumor, la resistencia a los medicamentos y los mecanismos que hacen posible las metástasis. De esta forma, con una mejor comprensión de las células tumorales, surgen nuevas alternativas terapéuticas que hacen más factible el control y la posible solución que permita la cura definitiva del cáncer. Por la importancia fundamental del tema, el presente artículo tiene como objetivo resumir las características y propiedades de las células madres tumorales, las investigaciones en curso y las nuevas estrategias para la prevención y control de los mecanismos que llevan a la recurrencia de los tumores en los pacientes de cáncer que han sido tratados.

Surgery, radiotherapy and chemotherapy are universally recognized as the most effective anti-cancer therapies. Despite significant advances directed towards elucidating molecular mechanisms and developing clinical trials, cancer still remains a major public health issue. Cancer stem cells are a subpopulation of the cells that form the tumor. The discovery of these human cancer cells opens a perspective for understanding tumor recurrence, drug resistance and metastasis; and opens up new research directions on how cancer cells are capable of switching from dormancy to malignancy. Therapeutic alternatives emerge from a better understanding of the biology and the environment of tumor stem cells. The present paper aims to summarize the characteristics and properties of cancer stem cells, the ongoing research, as well as the best strategies for prevention and control of the mechanisms of tumor recurrence.

Juan de Dios: Un enigma para las ciencias médicas

Some cures carried out by Medium João Teixeira de Faría (John of God) are presented. He claims to channel spiritual entities (Drs. Augusto de Almeida, Oswaldo Cruz, and José Valdivino) that have instantaneous access to the physical, emotional and spiritual history of each patient who is then treated by physical or “spiritual” surgeries, herbs, meditation, prayers and the ingestion of “energized” water. People operated on have no pain during the interventions and infections have not been observed. The mechanisms responsible for the healings are unknown.

Se presentan algunas curaciones realizadas por el Médium João Teixeira de Faría (Juan de Dios). Al parecer, el Médium João canaliza entidades espirituales (Dres. Augusto de Almeida, Oswaldo Cruz y José Valdivino) que tienen acceso instantáneo a la historia física, emocional y espiritual de cada paciente, que luego es tratado mediante cirugías “espirituales” o físicas, hierbas, meditación, oración e ingestión de agua “energizada”. Los enfermos operados no sintieron dolor durante las intervenciones y las heridas no se infectaron. Aún se desconocen los mecanismos responsables de las curaciones.