Revista del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel

Calidad bacteriológica de comidas listas para su consumo, preparadas y distribuidas en la isla de Margarita (Venezuela), período 1991-2009

Se valoró la calidad bacteriológica de 696 comidas listas para su consumo preparadas desde 1991 a 2009. 454 muestras correspondían a alimentos tratados térmicamente y el resto a alimentos que llevaban ingredientes no so metidos a cocción. Las muestras se escogieron al final de su elaboración, y antes de distribuirlas, en diferentes establecimientos de res tauración (hoteles, empresas de catering, restaurantes, supermercados, panaderías, luncherías, areperas, ventas ambulantes, cantinas y comedores es colares y casas de alimentación). Los criterios considerados fueron NMP/g de Coliformes, Coliformes fecales y Escherichia coli; y recuentos (UFC/g) de aerobios mesófilos y Staphylo coccus aureus (coagulasa +), según normas COVENIN y FONDONORMA. Los resultados se compararon con requisitos internos establecidos por el Laboratorio de Microbiolo gía, Fundación La Salle de C.N. Al momento de la captación el promedio de la temperatura de las comidas servidas en frío fue 13,4 °C y el de las cocinadas 32,2 °C. Los menores porcentajes de cumplimiento a todos los requisitos los tuvieron las rebanadas de jamón y queso (28%), rellenos de arepas y empanadas (28%), pastas italianas (23%), postres horneados (13%) y ensaladas con ingredientes crudos (7%). En este tipo de ensaladas sólo cumplieron los requisitos de Coliformes, Coliformes fecales y re cuentos de aerobios mesófilos el 19%; 31% y 24% de las muestras respectivamente. El menor cumplimiento de S. aureus (72%) se obtuvo en las rebanadas de jamón y queso y de E. coli (45%) en los rellenos de arepas y empanadas. Los establecimientos que presentaron los mayores valores de conformidad fueron las casas de alimentación (66%), comedores escolares (51%) y catering (50%) y los menores, los kioscos y ventas ambulantes (24%), supermercados y panaderías (17%) y cantinas escolares (0%). Las causas por las cuales los resultados bacteriológicos no cumplieron los criterios internos del Laboratorio pudieran estar relacionadas, entre otras, con la calidad de la materia prima, fallas higiénicas en la preparación de los alimentos, temperatura de mantenimiento al igual que tiempo y temperatura de cocción.

The bacteriological quality of 696 samples of ready to eat (RTE) food prepared from 1991 to 2009 was assessed. 454 samples corresponded to food subject to thermal treatment and the remainder carried ingredients that were not subject to cooking. The samples were chosen at the end of their elabo ration and before distributing, from different dinning establishments (hotels, caterers, restaurants, supermarkets, baker shops, luncheon rooms, arepa shops, ambulatory sales, canteens, school lunchrooms, and feeding houses). Total and fecal coliforms, E. coli, aerobic plate count and S. aureus (coagulase +) according to COVENIN and FONDONORMA norms were the criteria used for the investigation. The results were compared with internal requirements established by the microbiology laboratory of La Salle Natural Sciences Foundation. At the moment of sampling, the average temperature of cool dishes was 13.4 °C and of hot dishes was 32.2 °C. The smallest percentage of observance to all requisites were: ham and cheese slices (28%); arepas and turnovers (28%); Italian pasta (23%), baked desserts (13%) and salad with raw ingredients (7%). In these last ones, the requirements of total coliforms, fecal coliforms and aerobic plate count norms were met only by the 19%, 31% and 24% of samples respectively. The lowest compliance with S. aureus (72%) was found in the ham and cheese slices, and with E. coli (45%) were the arepas and turnovers. The establishments that presented the highest compliance values were the feeding houses (66%), school lunchrooms (51%) and caterers (50%); while those with the lowest values were the ambulatory sales (24%), supermarkets and baker shops (17%), and school canteens (0%). The reasons for non compliance with the internal requirements can be related, among other things, with the quality of raw material, hygienic failure in food handling, maintenance temperatures, and time and temperature of cooking.

**Determinación de germanio en muestras de exudado de Aloe vera (L.) Burm . f. (zábila), mediante la espectrometría de absorción atómica con atomización electrotérmica**

Esta investigación trata sobre la determinación de germanio en exudado de hojas de zábila, mediante la técnica ana lítica espectrometría de absorción atómica con atomización electrotérmica (ETAAS). El exudado de las hojas de zábila es el líquido amarillo y de sabor amargo que emana de las hojas de la planta cortadas en la base. Es también conocido como zumo o látex. Ha sido utilizado en el tratamiento de diversas afecciones tales como: tratamiento de heridas, infecciones bucales, irritaciones de la piel, otras. El germanio es un oligoelemento que ha sido utilizado como inmunoestimulante y en pacientes con neoplasia. La concentración del germanio presente en el exudado de Aloe vera (L.) Burm.f. fue de 7.42 ± 2.33 μg/g. La metodología empleada fue validada por estudio de recuperación, ubicándose en un valor promedio de 97.43 ± 2.22%. La desviación estándar relativa fue de 2.88%, lo que es un indicativo de la precisión. El método utilizado para la determinación del elemento en cuestión es exacto, preciso y libre de interferencias.

The objective of this work was to determine the concentration of germanium in Aloe vera (zábila) from leaves exudated, using the electrothermal atomic absorption spectrometry analytical technic (ETAAS). The exudated is a yellow and bitter liquid, used in wounds healing, skin irritations, mouth infections, etc. The germanium is a trace element used as immunestimulant in patients with tumour. A concentration of 7.42 ± 2.33 μg/g was found. The method for the determination of germanium was validated by recovery studies, a value of 97.43 ± 2.22% was obtained for germanium, and the relative standar deviation (RSD%) was 2.88%. The method was exact, precise and free from interferences.

Dimensionamiento de los sistemas de microfiltración y ultrafiltración para la producción de la Toxina Tetánica elaborada en el Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel

Se evaluó el uso de la tecnología de Flujo de Filtración Tan gencial (FFT), para obtener la toxina tetánica a partir de cultivos de la bacteria Clostridium tetani, usando el proceso de Micro filtración (MF), para eliminar el paquete celular y posteriormente, a partir del filtrado obtenido, concentrar y diafiltrar la Toxina Tetánica usando el proceso de Ultrafiltración (UF). Se determinaron las características de los filtros, condiciones de trabajo y el dimensionamiento de los equipos a adquirir para la nueva producción industrial de Toxina Tetánica. Se evaluaron el flujo, tiempo, rendimiento del proceso y las características del producto obtenido. Utilizando cultivos con Toxina Tetánica en un equipo de filtración de laboratorio, diseñado para producir el efecto de FFT. Se seleccionó las membranas tipo cassettes, formato Suspended Screen, porosidad 0,2μm, como las adecuadas para el proceso de MF, ya que mostraron un 100% de transmisión de la Toxina Tetánica, ausencia de restos celulares y flujo promedio de filtrado de 73.30 L/m2h. Así mismo, se seleccionaron las membranas tipo cassettes, formato Omega, porosidad 50 y 70 kDa, como las adecuadas para el proceso de UF, ya que mostraron 100% de recuperación de la toxina, ausencia de toxina en el filtrado y adecuados flujos de filtrado (106,7 y 104,4 L/m2h, respectivamente). Estos resultados permitieron dimensionar, considerando las variables a utilizar en la producción industrial (Volumen 650 a 950 litros, tiempo de procesos, 3 horas), el área de filtración de los equipos de MF y UF a adquirir, estimados en 20m2 y 5m2, respectivamente.

Tangential Flow Filtration (TFF) technology was evaluated to process tetanus toxin which is produced by Clostridium tetani bacterium. Microfiltration (MF) is used to retain cells while allowing passage of the toxin to the filtrate stream. The filtrate is co - llected and further processed by Ultrafiltration (UF) to concentrate the toxin and to maximize the wash of small species by a Dia filtration step. Both, MF and UF processes were evaluated to specify the filters and corresponding critical process parameters to scale-up the application. As part of the evaluation, flow ra te, processing time, yield and product attributes were characterized. The cell harvest containing the tetanus toxin was processed using a laboratory scale TFF system designed to product the TFF effect. The evaluation demonstrated that a cassette in sus pended screen format and membrane with 0.2μm pore is the right selection for the MF step. It showed 100% of toxin transmission without the presence of cellular debris and average process flux of 73.30 L/m2h. The UF step was conducted using the same system with cassettes in me dium screen format with pores of 50 and 70kDa. It showed 100% retention of the toxin with a process flux of 106,7 and 104,4L/m2h, respectively. To maximise product retention during UF, the 50 kDa membrane was selected. These results were used to scale-up the application to process the industrial volume of 650 a 950 liters in 3 hours of processing time. Membrane area sizing of MF and UF to be acquired is estimated in 20m2 and 5m2, respectively.

Diseño de un control de temperatura inteligente para incubadoras de recién nacidos

En este artículo se presenta el diseño de un control de temperatura con técnicas de protección inteligente, con la finalidad de implementarlo en incubadoras para recién nacidos. El funcionamiento del control de temperatura se centra en la utilización de un microcontrolador, programado para responder por modulación de ancho de pulso sobre el calefactor, y así lograr una alta precisión en la regulación de la temperatura. Lo novedoso del proyecto radica en la técnica de protección utilizada. Esta técnica está basada en la supervisión constante de las irregularidades térmicas, en múltiples puntos del ambiente de la incubadora. Esto permite establecer un criterio para el apagado del calefactor y la activación de la alarma en función de la lectura individual de 4 sensores tipo termistor NTC, ubicados estratégicamente dentro de la incubadora. Este diseño se ve motivado a la necesidad de adaptar controles modernos a incubadoras antiguas que pueden ser totalmente recuperadas, además abre la posibilidad de diseñar un equipo de incubadora completo. Cabe destacar que este proyecto contribuye con el desarrollo de tecnología propia en el área de la instrumentación y control aplicado a ingeniería biomédica.

This paper presents an intelligent temperature control design with smart protection techniques, implemented in newborn incubators. The operation of the temperature control was focused on the use of a programmed microcontroller, which respond with pulse width modulation at the heater, and thus achieve, high precision temperature regulation. The novelty of this design, lies, on the protection technique used. That is based, on a constant monitoring of the incubator thermal variations; at several parts of the environment. That allows establishing, an approach for the shutdown of the heater and the alarm on, depending on the individual reading of 4 sensors NTC thermistor, strategically located within the incubator. This design is motivated by the necessity of adapt modern controls to old incubators that can be fully recovered; also opens the possibility to design a complete new incubator. It is important to note that this project contributes with our own development technology; especially on biomedical engineering, instrumentation and control.

Estudio clínico-epidemiológico de alteraciones hemorrágicas y necróticas causadas por el veneno de la serpiente de cascabel (crotalus durissus cumanensis) en pacientes venezolanos

Se describieron los efectos hemorrágicos, necróticos y edematosos de 135 pacientes provenientes de los estados Miranda, Aragua, Vargas y Distrito Capital, Venezuela, ocasionados por la mordedura de la serpiente cascabel común venezolana (Crotalus durissus cumanensis), durante los años 1998-2008. Los trastornos hemorrágicos, que tradicionalmente eran casi imperceptibles en los Crotalus venezolanos, hemos encontrado que hay evidencias francas de manifestaciones clínicas como: afibrinogenemia, alargamiento del tiempo de coagulación manual (TCM), tiempo parcial de tromboplastina (TTP) y tiempo de protrombina (TP), lo cual indica la presencia de estas fracciones hemorrágicas en el veneno de cascabeles nacionales. Se apreciaron diferencias entre ambos sexos, siendo predominante en el sexo masculino (82%). Sin embargo ha habido un aumento de incidencia significativa en el sexo femenino (17%). Por grupo etario, se observó predominancia entre 11 a 30 años de edad, en ambos sexos. El sitio de mordedura mayormente afectado fue el miembro superior (58,5%), con un porcentaje no menos significativo de miembros inferiores (40,7%). Estos hallazgos, permiten sugerir que el veneno de algunas serpientes cascabeles comunes en Venezuela, poseen un efecto sistémico sobre el músculo esquelético, y también efectos sobre capilares que generan edema, fenómenos hemorrágicos y necrosis, que habían pasado desapercibidos.

The bleeding, necrotic and edematous Snake bite effects from 135 patients of Miranda, Aragua, Vargas States and Capital District (Venezuela), caused by the Venezuelan common rattlesnake (Crotalus durissus cumanensis) from 1998 to 2008 were described. In bleeding disorders, which traditionally were almost imperceptible in Venezuelan Crotalus, we have found reliable evidence of clinical manifestations such as: afibrinogenemia, lengthening of the manual time of coagulation (MTC), and Partial Time of Thromboplastin (PTT) and Prothrombin time (PT), which indicates the presence of hemorrhagic fractions in the Venezuelan rattlesnakes venoms. There were differences between the sexes, still predominant in male (82%). However, there has been an increase of significant impact on female (17%). By age, there was prevalence between 11 and 30 years old, both male and female. The mostly affected bite si te was upper limb (58,5%), with a no less significant percentage of lower limbs (40,7%). These findings, allowed us to suggest that some rattlesnake venoms have a systemic effect on skeletal muscle, and also effects on capillaries that generate swelling, hemorrhagic phenomena and necrosis.

Funcionalismo hepático en ratas Wistar tratadas con dosis terapéuticas de Nimesulide

Introducción: El nimesulide es un analgésico antiinflamatorio no esteroideo, asociado en reportes de casos clínicos con hepatotoxicidad. Sin embargo, se han publicado pocos estudios controlados en animales. Objetivo: Determinar si la administración de dosis terapéuticas de nimesulide, durante diferentes periodos, altera el funcionalismo hepático en ratas Wistar machos y hembras. Materiales y métodos: Cuarenta ratas Wistar fueron distribuidas en 4 grupos de 10 cada uno (5 hembras y 5 machos). Grupo I (control): recibió 0.1 mL de solución salina durante 7 días, los animales de los grupos II, III y IV fueron tratados con nimesulide (3 mg/kg) durante 7, 21 y 35 días, respectivamente. Se determinaron niveles séricos de bilirrubina, fosfatasa alcalina y transaminasas. Resultados: La actividad de la enzima alanino-amino-transferasa (ALT) aumentó en machos (p< 0.01) y hembras (p < 0.02) de los grupos III y IV respecto a los controles. En los machos de los grupos II y IV aumentó la fosfatasa alcalina en comparación con las hembras de los mismos grupos (p < 0.05). Las bilirrubinas di - recta y total disminuyeron en las hembras del grupo IV respecto al control (p < 0.03). Conclusiones: Los resultados sugieren que a dosis terapéuticas el nimesulide altera el funcionalismo hepático en ratas Wistar.

Introduction: Nimesulide is a non-steroidal antiinfflamatory drug associated with hepatotoxicity. Nevertheless, there have few published controlled studies with animals. Objec - tive: Determine whether the administration of therapeutic doses of nimesulide during differents periods alters hepatic function in male and female rats. Materials and me - thods: Forty Wistar rats were classified into 4 groups of 10 rats each. Group I received 0,1 ml of saline for 7 days, whe reas the animals from groups II, III and IV were treated with Ni mesulide (3 mg/kg) during 7, 21 and 35 days, respectively. It has determined serum levels of bilirubin, alkaline phos pha tase and transaminases. Results: Alanino-amino-transferase (ALT) enzyme was increased in males (p<0.01) and females (p<0.02) from groups III and IV in com parison with the control group. Alkalin phosphate increased in males from groups II and IV in comparison with the females from these same groups (p< 0.05). Direct and total bilirubins decreased in group IV females (p< 0.03) in comparison with the control group. Conclusions: The administration of therapeutic doses of nimesulide affects hepatic function on Wistar rats.

Hallazgo de Acanthamoeba spp en biopsia cerebral de un paciente con adenocarcinoma metastásico

Las amibas de vida libre (AVL) del género Acanthamoeba son parásitos facultativos ampliamente distribuidos en el ambiente, por lo cual el contacto del humano con ellos es frecuente, sin embargo, los reportes de enfermedades producidas por AVL son escasos. La gravedad de éstas justifica su búsqueda, sobre todo cuando la infección es del sistema nervioso central (SNC) y cuando hay compromiso in munológico. En este trabajo se reporta el hallazgo de Acanthamoeba spp en una biopsia cerebral, tomada a un paciente de 44 años de edad con adenocarcinoma. Se exa minó la muestra bajo el protocolo del Laboratorio de Amibiasis, de la Cátedra de Parasitología, Escuela de Bioanálisis, Facultad de Medicina, Universidad Central de Venezuela, para la investigación de AVL y Entamoeba histolytica. Se realizó examen directo y coloraciones especiales, inducción de la flagelación y cultivos a diferentes temperaturas. Se observó crecimiento de Acanthamoeba spp en el medio de Page modificado por Chinchilla y col. (1979), incubado a 37 °C a las 96 horas. La descripción morfológica coincide con la morfología del grupo 3 de Acanthamoeba, según Visvesvara (1991). Se destaca la importancia de la realización del cultivo para el crecimiento e identificación de estos organismos en aquellos laboratorios donde los métodos basados en biología molecular aun no se hayan implementado como parte del diagnóstico y así aplicar el tratamiento oportuno y específico al paciente.

Free-living amoebas (FLA) of genus Acanthamoeba are parasitic facultative organisms whose are widely distributed in the environment, thus the human contact with them is frequent; nevertheless, there are few reports of diseases produced by FLA. The severity of these diseases justifies its re search, mainly when the infection is at central nervous system (CNS) and when there is an immunocompromised host. This work reports the finding of Acanthamoeba spp in a cerebral biopsy from a 44 year-old patient with adenocarcinoma. We followed the protocol established by the Amibiasis Laboratory, Parasitology Chair, School of Bioanalisis, Medicine Faculty, Central University of Venezuela, for the investigation of FLA and Entamoeba histolytica. It wasmade by direct examination of the sample and special stains, flagellation induction and cultures incubated at different temperatures. We observed Acanthamoeba spp growth in biphasic Page media modified by Chinchilla and col. (1979), incubated for 96 hours at 37 °C. The morphologic des cription agrees with the morphology of group 3 of Acanthamoeba, according to Visvesvara (1991). We emphasize the importance of using growth culture for isolation and identification of these organisms in those laboratories where molecular methods has not been implemented yet as part of the diagnosis scheme and thus for applying the opportune and specific treatment to the patient.

Morfometría ultraestructural de la glándula adrenal de ratones infectados experimentalmente con dos aislados venezolanos de Trypanosoma evansi

Este trabajo describe cualitativamente y analiza cuantitativamente las variaciones ultraestructurales de la glándula adrenal de ratones durante el desarrollo de infecciones murinas experimentales por dos aislados venezolanos de Trypanosoma evansi, uno proveniente de asno y otro de caballo. Las modificaciones submicroscópicas observadas incluyeron alteraciones en el retículo endoplasmático liso, mitocondrias, gotas lipídicas, aparato de Golgi y núcleo. También se apreciaron alteraciones en el número de vesículas de epinefrina, norepinefrina, gránulos de lipofucsina y presencia singular de figuras mielínicas. Estos cambios ultraestructurales estarían asociados a problemas metabólicos que inducirían la muerte de los animales infectados. El estudio cuantitativo demostró diferencias significativas en las características y las magnitudes del daño causado por ambos aislados, siendo el tripanosoma proveniente de caballo más patogénico. El análisis multivariante de los cambios submicroscópicos discriminó la acción patogénica en la glándula adrenal de tripanosomas de la misma especie que provienen de hábitats diferentes (Equus asinus y E. caballus) y de zonas geográficas distintas (estado Apure y estado Guárico).

This work describes qualitatively and analyzes quantitatively the ultrastructural variations of the mice adrenal gland during the development of murine experimental infections by two Venezuelan isolates of Trypanosoma evansi, one de rived from a donkey and another from a horse. The submicroscopic modifications included modifications in the smooth endoplasmic reticulum, mitochondria, lipid droplets, Golgi apparatus, and nucleus. Alterations in the number of epinephrine, norepinephrine vesicles, and lipofuscin granules and singular myelin-like figures were also observed. Such ultrastructural changes would be associated to metabolic problems including the infected animals death. The quantitative study demonstrated significant differences in the characteristics and magnitude of the damage caused by both isolates, being more pathogenic the horse derived trypanosome. The multivariate analysis of the submicroscopic changes discriminated the pathogenic action of trypanosomes of the same species coming from different habitats (Equus asinus and E. caballus) and different geographic zones (Apure state and Guarico state) in the adrenal gland.

Reporte de cinco casos de Cyclosporiosis en un centro penitenciario en Venezuela

Cyclospora cayetanensis, es un protozoario intestinal humano, productor de diarrea en individuos inmunocompetentes e inmunocomprometidos. La transmisión ocurre por ingestión de ooquistes que han esporulado en el ambiente. La transmisión del parásito ocurre a través de un vehículo ambiental. En los países en vías de desarrollo, la ciclosporiosis se ha relacionado con el agua y los alimentos contaminados, contacto con la tierra o animales, y variables asociadas con bajas condiciones socioeconómicas. En junio de 2004 se realizó un estudio parasitológico en un centro pe nitenciario en Venezuela, donde se presentaron varios casos con diarrea. A 7 personas del sexo masculino, con edades entre 19-39 años y con diarrea de 2 a 10 días de du ración, se les realizó examen de heces con S.S. 0,85%, lugol, Quesel, Sudán III, ziehl Neelsen, Micrometría y Esporulación en K2Cr2O4 2,5%. Se encontró ooquistes de C. cayetanensis en 5 (71, 42%) y huevos de Ancylos tomídeos en 1 (14,3%). El número de casos, en los cuales se observó C. cayetanensis, en individuos con diarrea, en este centro penitenciario en Venezuela, resulta muy llamativo en virtud de ser este un microorganismo de baja prevalencia a escala mundial y nacional. No obstante, las condiciones de hacinamiento y probablemente medidas higiénicas inadecuadas, tanto en las áreas físicas como en la conservación y manipulación del agua y alimentos, favorecen la transmisión de parásitos que ocasionan diarrea. Lo cual demuestra, la necesidad de establecer medidas de control y educación sanitaria a los manipuladores de alimentos, para evitar la transmisión y aparición de diarrea por diversos agentes infecciosos entre estas poblaciones.

Cyclospora cayetanensis is a human intestinal protozoan, causing diarrhea in immunocompetent and immunocompromised individuals. Transmission occurs by ingestion of oocysts that have sporulated in the environment. In developing countries, ciclosporosis has been associated with contaminated food and water, contact with soil or animals and low socioeconomic conditions. In June 2004, a parasitological survey in a venezuelan prison in, where several diarrhea cases appeared. All seven (7) people were male, age ranging 19-39 year-old with diarrhea during between 2 and 10 days; they were evaluated by stool examination with ss 0,85%, iodine, quensel, sudan III, ziehl Neelsen stain/mi - crometry and sporulation in K2Cr2O4 2,5%. C. cayetanensis oocysts were found in 5 (71,42%) and hookworm eggs in one (14,3%). The number of diarrhea cases at this prison in Venezuela in which C. cayetanensis was observed, is very striking, knowing the premise for this microorganism to be global and regional low prevalent protozoan. However, overcrowding and poor hygienic measures, probably both, in the physical areas and in the storage and food/water handling, contribute to diarrhea-causing parasites transmission. This shows the need to implement control measures and health education for food handlers to prevent transmission and diarrhea outbreaks caused by infectious agents among this population.

La bioética, una reflexión ética ante la vida