Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiología

El mundo de los microbios

Ada Martínez

Sobrevivencia del parásito Leishmania en el insecto vector: interacciones moleculares

Resumen: Leishmania requiere de dos hospedadores para completar su ciclo de vida, un vertebrado y un insecto vector. Los flebotominos vectores han logrado sobrevivir en coexistencia con el parásito Leishmania. Esta convivencia se ha logrado gracias a las diversas estrategias de defensa desarrolladas por el insecto, que incluyen estrategias de inmunidad innata. La sobrevivencia del parásito en el vector se debe a su vez, a mecanismos complejos de evasión y co-evolución. Reconocer estos mecanismos de interacción Leishmania-vector y profundizar su estudio molecular, puede contribuir al desarrollo de blancos para nuevas estrategias que reduzcan la capacidad vectorial de los flebotominos vectores de Leishmania

Abstrac: Leishmania require two hosts to complete their life cycle, a vertebrate and a vector insect. Vector phlebotomies have been able to survive in co-existence with the Leishmania parasite. This co-existence has been reached due to the diverse defense strategies developed by the insect, which include innate immunity strategies. On the other hand, the survival of the parasite in the vector is due to complex evasion and co-evolution mechanisms. To recognize these Leishmania-vector interaction mechanisms and to further their molecular study can contribute to the development of targets for new strategies that reduce the vectorial capacity of Leishmania vector phlebotomies

El diagnóstico convencional de Mycoplasma pneumoniae como agente causal de Neumonías Adquiridas en la Comunidad (NAC)

Resumen Las enfermedades infecciosas constituyen un importante problema de salud y específicamente la neumonía se encuentra entre las diez primeras causas de muerte a nivel mundial y en novena posición entre las principales causas de muerte en Venezuela. La Neumonía Adquirida en la Comunidad (NAC), se define como aquella que se presenta en pacientes no hospitalizados en los siete días previos al diagnóstico, o durante las primeras 48 horas de ingreso en pacientes hospitalizados. Entre los principales agentes etiológicos de la NAC, ocupando un segundo lugar en orden de frecuencia, se encuentra Mycoplasma pneumoniae. Los patógenos implicados en la neumonía extra-hospitalaria, difieren de aquellos causales de neumonías originadas en el hospital, y existe una notable diferencia en cuanto a su frecuencia de aparición y patrones de sensibilidad a drogas, por lo que es importante la identificación del agente causal. En este trabajo revisaremos los principales métodos convencionales (cultivo y serología) para el diagnóstico de este microorganismo, y analizaremos sus limitaciones, las cuales a menudo resultan en la aplicación de tratamiento de forma empírica

Abstract Communicable diseases. among them specifically pneumonia, constitute an important public health problem, and they appear among the ten most important causes of death at a world wide level, and in the ninth place of causes of death in Venezuela. Community Acquired Pneumonia (CAP) is defined as that which occurs in non hospitalized patients during the seven days prior to diagnosis, or during the first 48 hours after internment in hospitalized patients. Mycoplasma pneumoniae is one of the main etiological agents of CAP, occupying the second place in order of frequency. Pathogens implicated in extra-hospital pneumonia differ from those that produce hospital originated pneumonia and there is a notable difference regarding their frequency of occurrence and drug sensibility patterns; therefore, it is important to identify the causative agent. In this study we will revise the main conventional diagnostic methods (culture and serology) for this microorganism, and we will analyze their limitations, that often are consequence of empirically applied treatments

Detección del virus de inmunodeficiencia humana tipo 1 mediante la PCR, en neonatos de madres seropositivas

Resumen El diagnóstico temprano de la infección por el VIH-1 en el recién nacido es importante para su manejo clínico oportuno. Los objetivos de este trabajo fueron la detección del ADN proviral del VIH-1 mediante la técnica de PCR en neonatos de madres seropositivas al VIH-1 y la determinación de los posibles factores de transmisión vertical por VIH-1 en la población estudiada. Se analizaron 214 muestras sanguíneas de niños entre 0 y 18 meses de edad, referidos al INHRR entre Septiembre 2005-Agosto 2006. Todas las muestras se colectaron de manera estéril con EDTA, las células mononucleares de sangre periférica se separaron mediante gradiente de HISTOPAQUE. Posteriormente el ADN proviral fue extraido mediante columnas de silica-gel (QIAGEN). La amplificación del material genético de cada muestra se efectuó por dos ensayos de PCR a dos rondas, utilizando iniciadores conservados de los genes env y gag del VIH-1. Se encontró ADN proviral del VIH-1 en un 8% (17/214 muestras) de la población infantil evaluada, de los cuales el 82,4% mostraron elevados niveles de carga viral (>5.0 log10). Se corroboró la utilidad de la PCR como herramienta molecular en el diagnóstico oportuno de infección perinatal por el VIH-1

Abstract The early diagnosis of HIV-1 infection is important for the opportune management of these patients. Objectives of this work were detection of proviral HIV-1 DNA through the PCR technique in newborns from HVI-1 seropositive mothers and determination of the possible vertical HIV-1 transmission factors in the population studied. 214 blood samples taken from children aged between 0 and 18 months referred to the INHRR during the September 2005-August 2006 period. All the samples were mixed with EDTA under sterile conditions. Peripheral blood mononuclear cells were separated by an HISTOPAQUE gradient. Later, the proviral DNA was extracted through silica-gel columns (QIAGEN). The amplification of the genetic material of each sample was obtained through two PCR determinations in two stages, using initiators conserved from env and gag HIV-1 genes. Proviral HIV-1 DNA was found in 8% (17/214) of the samples of the child population evaluated, 82.4% of which showed elevated viral load levels (>5.0 log10). The usefulness of PCR as a molecular tool for the opportune diagnosis of perinatal HIV-1 infection is corroborated

Anticuerpos anti-citomegalovirus en sangre del cordón umbilical de recién nacidos

Resumen Se investigó la presencia de anticuerpos IgG e IgM anti-citomegalovirus (CMV), en el suero de muestras de sangre tomadas del cordón umbilical de recién nacidos, mediante técnica inmunoenzimática de uso comercial, cuantificando la concentración de IgG anti-CMV demostrada, comparando su densidad óptica, con las de muestras testigo positivo de 0, 0,4, 1,0, 4,0 y 10 UI/ml. La demostración de IgM anti-CMV, se hizo luego de determinar la densidad óptica de corte de la prueba, por encima de la cual los valores encontrados indicarían la presencia de IgM anti-CMV en la muestra. En 196 (96,0 %), de 204 muestras analizadas, se demostró IgG anti-CMV, pero, en contraste con lo anterior, todas las muestras fueron negativas para IgM anti-CMV. La presencia de IgG anti-CMV en las muestras, en ausencia de IgM anti-CMV, sugiere que esta inmunoglobulina provino de las madres. De ser esto así, el porcentaje de seropositividad materna para IgG anti-CMV, estaría indicando un elevado índice de endemicidad de la infección en mujeres adultas del área

Abstract Presence of IgG and IgM anti-cytomegalovirus (CMV) antibodies in the serum of blood samples taken from umbilical cord of newborns was investigated with a commercial immuno-enzymatic technique, quantifying the IgG concentration found by comparing its optical density with that of positive control samples containing 0, 0.4, 1.0, 4.0 and 10 IU/ml. Anti-CMV IgM was demonstrated after determining the cut-off optical density for anti-CMV IgM of the test, over which all values found would indicate anti-CMV IgM presence in the sample. Anti CMV IgG was demonstrated in 196 of 204 (96.0%) of the samples studied but, in contrast, all the samples were negative for anti-CMV IgM. Anti-CMV IgG presence and anti-CMV IgM absence in the samples suggests that this immunoglobulin came from the mothers. If this is so, the percentage of maternal anti- CMV IgG serum positivity would be indicating a high index of endemicity for this infection in adult women of the area

Uso de un sistema experto en ambiente web para facilitar la identificación de géneros de bacilos gramnegativos no fermentadores de la glucosa

Resumen La identificación de bacilos gramnegativos no fermentadores de la glucosa (BGNNF) es una tarea compleja y laboriosa que exige la participación de expertos. Para facilitar la toma de decisiones se desarrolló y puso a prueba un Sistema Experto (SE) con una base de conocimientos construida aplicando el algoritmo C4.5 modificado, capaz de inducir un árbol de decisión (reglas primarias) para un conjunto de géneros, y la diferenciación entre éstos (reglas complementarias) para la identificación de géneros específicos. La incertidumbre del sistema es tratada mediante el esquema de factores de certeza. En este trabajo se sometió a prueba el SE con una selección de cultivos de BGNNF de diferente origen, identificados y preservados en el Centro Venezolano de Colecciones de Microorganismos (CVCM): géneros Achromobacter, Acinetobacter, Alcaligenes, Brevundimonas, Burkholderia, Chryseobacterium, Comamonas, Delftia, Moraxella, Myroides, Ochrobactrum, Oligella, Pseudomonas, Shewanella, Sphingobacterium y Stenotrophomonas. Mediante la aplicación de 11 pruebas (características primarias) se obtuvo una aproximación entre varios de los géneros posibles. Las pruebas complementarias sugeridas (entre 1 y 9), permitieron una mayor aproximación al género posible. Los resultados muestran una coincidencia del 95.8% con los reportados por el CVCM. En base a estos resultados se estudia la ampliación de la base conocimiento para la identificación de especies de BGNNF, y de otros grupos de bacterias

Abstract The identification of glucose non fermentative gram-negative bacilli (NFGNB) is a complex and laborious task. In order to facilitate genera identification an Expert System (ES) was developed applying a modified C4.5 algorithm able to induce a decision tree (primary rules) for a set of genera, and the differentiation between these (complementary rules) for the identification of specific genera- The uncertainty of the system is treated by means of a certainty factors scheme. In this work the ES was put on approval using a selection of cultures of NFGNB of different origin, identified and preserved in the Venezuelan Center for Microbial Collections (CVCM): genera Achromobacter, Acinetobacter, Alcaligenes, Brevundimonas, Burkholderia, Chryseobacterium, Comamonas, Delftia, Moraxella, Myroides, Ochrobactrum, Oligella, Pseudomonas, Shewanella, Sphingobacterium y Stenotrophomonas. By means of the application of 11 tests (primary characteristics) an approach between several of possible genera was obtained, The suggested complementary testes (between 1 to 9) allowed great approach to the possible generas.-.The results show a coincidence of the 95.8% with the reported ones by the CVCM. An extent of the ES for the identification of other genera is under study

La placa dental como reservorio de Helicobacter pylori

Resumen La placa dental ha sido propuesta como un reservorio para Helicobacter pylori, sugiriéndose que el microambiente oral pueda ser un nicho permanente para la bacteria. El objetivo de este estudio fue determinar el papel que juega la placa dental como reservorio de esta especie, evaluando la presencia de ADN de H. pylori en la placa dental y biopsias gástricas, mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR por sus siglas en inglés). Fueron evaluados 71 pacientes sintomáticos gastrointestinales referidos para examen endoscópico, provenientes del Servicio de Gastroenterología del Hospital Universitario de Caracas, Venezuela y 40 sujetos asintomáticos. Las muestras de placa dental fueron analizadas por PCR, basada en la secuencia del gen ure c. Se tomaron biopsias gástricas para análisis histopatológico y PCR. H. pylori. fue detectado en las biopsias gástricas de 48(68%) de los 71 pacientes, todos con gastritis crónica y en placa dental de 13(18%) de los 71 sujetos. En 8 (17%) de estos 48 pacientes, H. pylori fué también detectado en placa dental. De estos pacientes 4 presentaban adicionalmente displasia y 4 metaplasia. Tres pacientes del grupo control fueron positivos por PCR para H. pylori en placa dental. La placa dental puede ser un reservorio para la bacteria, y su presencia podría representar un factor de riesgo para la reinfección gastrointestinal, posterior al tratamiento de erradicación de la bacteria

Abstract Dental plaques have been proposed as Helicobacter pylori reservoirs, suggesting that the oral microenvironment can be a permanent niche for the bacterium. The objective of this study was to determine the role played by the dental plaque as reservoir for this species, evaluating the presence of H. pylori DNA in dental plaques and gastric biopsies through the polymerase chain reaction (PCR). The evaluation included seventy-one gastro-intestinal symptomatic patients referred for endoscopic examination by the Gastroenterology Service of the Caracas University Hospital, as well as 40 asymptomatic subjects. The dental plaque samples were analyzed by PCR based on the ure c gene sequence. Gastric biopsies were taken for histopathological analysis and PCR. H. pylori was detected in 48 (68%) gastric biopsies from the 71 patients, all with chronic gastritis, and in the dental plaque of 13 (18%) of the same 71 patients. In 8 (17%) of these 48 patients H. pylori was also detected in dental plaque. Four of these patients also presented displasia and metaplasia. Three patients from the control group were PCR positive for H. pylori in dental plaque. Dental plaques can be a reservoir for these bacteria and their presence could represent a risk factor for gastrointestinal re-infection after treatment for eradicating this bacterium

Plásmidos conjugativos aislados de cepas multirresistentes de pacientes de cuatro centros de salud del área metropolitana de Caracas

Resumen Los plásmidos conjugativos y movilizables son las estructuras extracromosomales de mayor importancia epidemiológica, responsables de la propagación horizontal de múltiples genes de resistencia. En este trabajo, se evaluaron cepas de E. coli y K. pneumoniae para determinar la presencia de plásmidos conjugativos y su relación con la adquisición, estabilización y diseminación de múltiples genes de resistencia. Utilizando ensayos de conjugación, se demostró la presencia de plásmidos conjugativos en el 67% de las cepas analizadas. El análisis del tratamiento con enzimas de restricción demostró que existen cepas bacterianas aisladas en diferentes áreas del mismo hospital que portan plásmidos con idénticos patrones de restricción. Los perfiles de resistencia de las cepas transconjugantes revelaron que se transfirieron determinantes de resistencia contra todas las familias de antibióticos analizadas, evidenciándose la contribución de los plásmidos al fenotipo de múltiple resistencia. Nuestros resultados sugieren que las cepas de E. coli y K. pneumoniae aisladas de pacientes de cuatro centros de salud del área metropolitana han podido adquirir el fenotipo de multirresistencia mediante la adquisición de plásmidos portadores de múltiples genes que codifican resistencia a diversos agentes antimicrobianos

Abstract Conjugative and movable plasmids are the extra chromosomal structures of greater epidemiological importance, responsible for the horizontal propagation of multiple resistance genes. In this study we evaluated E. coli and K. pneunoniae strains to determine the presence of conjugative plasmids and their relationship with the acquisition, stabilization and dissemination of multiple resistance genes. Using conjugation assays we demonstrated the presence of conjugative plasmids in 67% of the strains analyzed. The analysis of restriction enzyme treatments demonstrated that there were bacterial strains isolated from different hospital areas with identical restriction patterns. The resistance profiles of the transconjugating strains revealed that there was transfer of resistance determinants against all the antibiotic families analyzed, demonstrating the plasmid contribution to the multiple resistance phenotype. Our results suggest that the E. coli and K. pneumoniae strains isolated from patients in four health centers of the metropolitan areas may have acquired the multi resistance phenotype through the acquisition of plasmids that bear multiple genes that codify resistance to various antimicrobial agents

Efecto de la nisina sobre la microflora patógena del queso blanco artesanal tipo"telita" elaborado en una quesera de Upata, Estado Bolívar, Venezuela

Resumen Se evaluó el efecto inhibitorio de dos concentraciones de nisina (10,0 y 16,7 mg/kg) sobre la población de Staphylococcus aureus, coliformes totales, Escherichia coli, Salmonella spp y Listeria monocytogenes en queso blanco tipo "telita" elaborado en una quesera de Upata, Estado Bolívar. El número de S. aureus, coliformes totales y Escherichia coli se determinó mediante la siembra en películas secas rehidratables Petrifilm 3M; siendo los recuentos de S. aureus significativamente menores (p < 0,05) en las muestras de queso "telita" con las dos concentraciones de nisina ensayadas con respecto a las muestras control. No se detectó Salmonella spp ni Listeria monocytogenes en ninguna de las muestras analizadas Se encontró que las dos concentraciones de nisina adicionadas al queso "telita" ejercieron un efecto inhibitorio sobre la población de S. aureus presente como microflora contaminante en las mismas

Abstract The inhibitory effect of two nisin concentrations (10.0 and 16.7 mg/kg) over the Staphylococcus aureus, total coliforms, Escherichia coli, Salmonella spp and Listeria monocytogenes population was evaluated in "telita" type white cheese produced at a cheese factory in Upata, Bolivar State. The number of S. aureus, total coliforms and Escherichia coli was determined by inoculation in Petrifilm 3M dry rehydratable films. The S. aureus counts were significantly smaller (p<0.05) in the "telita" cheese samples with the two nisin concentrations tested as compared with the control samples. No Salmonella spp or Listeria monocytogenes were detected in any of the samples analyzed. It was determined that the two nisin concentrations added to the "telita" cheese exerted an inhibitory effect over the S. aureus present in them as contaminant microflora

Diagnóstico inmunológico de las micosis sistémicas durante cinco años 2002-2006

Resumen El objetivo de este estudio fue determinar la frecuencia diagnóstica de las micosis sistémicas en el Departamento de Micología del Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel (INHRR) durante 5 años (2002-2006). Se revisaron retrospectivamente las historias micológicas en el período señalado y sólo se tomaron en cuenta los diagnósticos iniciales de las micosis detectadas, descartando los controles sucesivos. Las muestras (suero y líquido cefalorraquídeo) fueron procesadas por las técnicas de inmunodifusión doble y aglutinación con látex. De 7653 muestras, 409 (5,3%) resultaron positivas para el diagnóstico de micosis sistémicas. 39% (2990/7653) procedían de pacientes con VIH/SIDA, con 203/2990 (6,8%) casos positivos y 4663/7653 (61%) procedían de pacientes sin VIH/SIDA, con una positividad general de 4,4% (206/4663 casos). La histoplasmosis fue la micosis más frecuente en los pacientes con SIDA (67%), seguida de la criptococosis con 26,6%. La paracoccidioidomicosis se diagnosticó con mayor frecuencia en pacientes sin VIH/SIDA (54,4%), seguida de la histoplasmosis (32%) y la criptococosis (11,2%). La vigilancia epidemiológica de las micosis es esencial para fomentar los conocimientos sobre las mismas. El Departamento de Micología del INHRR funciona como centro de referencia para el diagnóstico micológico y realiza una parte importante de los estudios de estas enfermedades a escala nacional. La presentación de las revisiones de casuística en forma sistemática contribuye con el conocimiento de estas patologías en nuestro país

Abstract The purpose of this study was to determine the diagnostic frequency of systemic mycoses at the Mycology Department of the Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel (INHRR) during a five-year period (2002-2006). Mycology case histories during the mentioned period were revised retrospectively and only the initial diagnoses of the mycoses detected were considered, discarding successive controls. Samples (serum and spinal fluid) were processed by double immunodiffusion and latex agglutination techniques. Of 7653 samples, 409 (5,3%) were positive for systemic mycoses. Thirty nine percent (2990/7653) came from HIV/AIDS patients, with 203/2990 (6,8%) positives, and 4663/7653 (61%) from non HIV/AIDS patients, with a 4,4% (206/4663) general positivity. Histoplasmosis was the most frequent mycosis in AIDS patients (67%), followed by cryptococcosis with 26,6%. Paracoccidioidomycosis was diagnosed more frequently in non HIV/AIDS patients (54,4%), followed by histoplasmosis (32%) and cryptococcosis (11,2%). Epidemiological surveillance of mycoses is essential to improve knowledge regarding them. The Mycology Department of the INHRR functions as a reference center for mycological diagnosis and performs an important part of these studies at a national scale. The systematic presentation of case revisions contributes to the knowledge of these pathologies in our country

Equinococosis hepática poliquística autóctona por Echinococcus vogeli en el amazonas venezolano: Descripción de un caso

Resumen Echinococcus vogeli y Echinococcus oligarthrus, especies autóctonas de América, producen equinococosis poliquística. El objetivo del trabajo es presentar un caso de equinococosis hepática poliquística por Echinococcus vogeli en una indígena de la etnia Yekuana del área amazónica venezolana. Presentó dolor abdominal punzante, hepatomegalia y eosinofilia marcada. Los estudios por imágenes mostraron lesiones poliquísticas en hígado. La serología para equinococosis resultó positiva. Se inicia tratamiento con albendazol previo a la cirugía, sin mejoría clínica. Se extrajo una gran masa quística del hígado por cirugía. Se determinó el promedio de longitud de los ganchos cefálicos de los protoescólices y las proporciones correspondían a E. vogeli. La paciente evolucionó satisfactoriamente y continuó el tratamiento con albendazol por 6 meses. La zona amazónica de Venezuela es abundante en animales silvestres, como roedores infectados con E. vogeli, Cuniculus paca o lapa y Dasyprocta aguti o picure venezolano. La paca es la principal presa tanto para Speothus venaticus como para los humanos que cazan las lapas por el excelente sabor de su carne. Los cazadores alimentan a los perros domésticos con las vísceras de la paca infectada, traspasando la infección a los humanos a través de los huevos excretados por las heces. Se sugiere pensar en equinococosis poliquística en individuos nativos con dolor abdominal, imágenes poliquísticas, calcificaciones en el hígado y eosinofilia, procedentes de la zona selvática del amazonas venezolano

Abstract Echinococcus vogeli and Echinococcus oligarthrus, new world autochthonous species are responsible for polycystic echinoco-ccosis. The purpose of this work is the presentation of a polycystic hepatic echinococcosis case due to Echinococcus vogeli in an indigenous inhabitant of the Venezuelan amazon area. The patient presented a penetrating abdominal pain, hepatomegalia and marked eosinophilia. Liver imaging (echosonogram and computerized axial tomography) as well an echinococcosis positive serology (ELISA and Western-blot) contributed to the pre-surgical diagnosis. Treatment with albendazol was initiated previous to surgery. The cephalic hooks of the protoscolexes were studied and it was determined that their mean length, morphology and proportions corresponded to E. vogeli. The patient evolved satisfactorily and continued albendazol treatment during six months. In the Venezuelan amazon area there are still numerous wilds animals which are intermediate and final hosts of this cestode. Cuniculus paca or lapa, Dasyprocta aguti or Venezuelan aguti, Speothus veneticus, wild dogs and wild cats, are natural host of both species. We suggest considering the possibility of polycystic echinococcosis in native individuals with polycystic imagining and liver calcifications (and eosinophilia) who come from Venezuelan tropical forests. Nevertheless, it should be remembered that domestic dogs and cats are responsible of human infections

Cazadores de Microbios en Venezuela