Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiología

José Gregorio Hernández: sabio y venerable

María de Lourdes González Pedroza

Tipificación de la meticilino resistencia en cepas de Staphylococcus spp. Hospital Universitario Antonio Patricio de Alcalá, Cumaná, estado Sucre, Venezuela

Staphylococcus spp. figura entre las bacterias patógenas más importantes para el ser humano. La caracterización molecular de cepas de Staphylococcus meticilino resistentes (SMR) es necesaria para conocer qué tipo de complejo cromosómico estafilocócico que transporta el complejo mec (SCCmec) circula en una región. Se estudiaron 21 cepas de S. aureus y 29 de Staphylococcus coagulasa negativa (SCN) aisladas en el Laboratorio de Bacteriología del HUAPA (enero a julio 2007) resistentes a meticilina. Se les realizó antibiograma, PCR múltiple y concentración mínima inhibitoria (CMI) a las cepas positivas para mecA. 19 cepas de S. aureus y 24 de SCN fueron resistentes a oxacilina, correlacionándose con la presencia del gen mecA principalmente en S. aureus; algunas discordancias fueron observadas en SCN. Solo se identificaron Staphylococcus SCCmec tipo I y IV. La caracterización del SCCmec permitió conocer el tipo de Staphylococcus circulante en el hospital, lo que hará posible monitorear cambios futuros en estas cepas.

Staphylococcus spp. figures as one of the most important bacteria for human beings. The molecular characterization of methicillin-resistant Sttaphylococcus strains (MRS) is necessary for knowing what type of staphylococcal chromosomic complex transporting the mec complex (SCCmec) circulates in a certain area. Twenty one methicillin-resistant S. aureus and 29 coagulase negative (CNS) Staphylococcus strains isolated at the Bacteriology Laboratory of the HUAPA were studied during the January-July 2007 period. The study included antibiogram, multiple PCR, and minimum inhibitory concentration (MIC) determination of the mecA positive strains; 19 S. aureus and 24 CNS strains were oxacilline resistant, correlated with the presence of the mec.A gene, mainly in S. aureus since some discordances were observed with the CNS strains. Only Staphylococcus SCCmec type I and II were identified. The SCCmec characterization identified the Staphylococcus type circulating in the hospital, possibilitating the monitoring of future changes of these strains.

Actividad antimicrobiana del aceite de lima (Citrus x aurantifolia) contra Listeria monocytogenes en jugo de manzana tindalizado

The antibacterial activity of lime (Citrus x aurantifolia) essential oil (EO) against the foodborne pathogen Listeria monocytogenes in tyndallised apple juice was studied at two temperatures. The EO concentration required to produce a significant increase in the lag phase of bacterial growth was determined. The addition of 200 µL of lime EO per 100 mL of apple juice completely inhibited the growth of L. monocytogenes at 5 ºC and at 37 ºC. This concentration of EO extended the lag time at least 292.7% compared to juice without EO. This is especially important considering that L. monocytogenes was able to grow in the juice at low temperatures in the absence of EOs.

En este trabajo se estudió la actividad antibacteriana del aceite esencial de lima (Citrus x aurantifolia) contra Listeria monocytogenes, patógeno alimentario, cultivado en jugo de manzana tindalizado a dos temperaturas. Se determinó la concentración necesaria del aceite esencial para producir una extensión significativa de la fase de retraso. La adición de 200 µL de aceite esencial de lima por 100 mL de jugo de manzana tindalizado, a 5 ºC produjo la inhibición total del crecimiento de L. monocytogenes, en tanto que con el mismo volumen a 37 ºC la fase de retraso se extendió a 24,7 h (292,7%). Esto es importante debido a que L. monocytogenes fue capaz de crecer en este sustrato a temperaturas bajas en ausencia de aceite esencial.

Bacterias nativas inductoras de precipitación de minerales de carbonato de calcio en suelos tropicales

As bactérias, consideradas como o grupo de microrganismos de maior abundância e diversidade que habitam os solos, são vitais no processo de bioprecipitação, no qual, estes microrganismos formam precipitados minerais cristalinos ou amorfos, como resultado de suas atividades metabólicas sob certas condições ambientais. Nesta pesquisa foram aplicados os conhecimentos sobre bactérias, para dar solução a alguns problemas da engenharia, estudando a capacidade das bactérias nativas existentes num solo tropical de precipitar minerais de carbonato de cálcio, a partir da adição do meio nutriente. Este nutriente se mostrou ótimo para induzir a bioprecipitação gerando fibras e cristais de carbonato de cálcio, que mudam as propriedades do solo, causando uma maior estabilidade estrutural dos grãos, um melhor desempenho dos agregados e uma menor deformabilidade da massa de solo.

Bacteria, considered as the group of soil microorganisms with the greatest abundance and diversity, are vital for bioprecipitation processes, where these microorganisms form crystalline or amorphous mineral precipitates as result of their metabolic activity under certain environmental conditions. In this investigation, knowledge about bacteria was applied for solving some engineering problems, studying the capacity of native bacteria found in tropical soil for precipitating calcium carbonate after the addition of a nutrient medium. This medium was optimal for inducing bioprecipitation, generating calcium carbonate fibers and crystals which modify soil characteristics, producing a greater structural stability of the grains, better performance of the aggregates, and less deformation of the ground mass.

Las bacterias, consideradas como el grupo de microrganismos de mayor abundancia y diversidad que habitan los suelos, son vitales en el proceso de bioprecipitación, en el cual estos microrganismos forman precipitados minerales cristalinos o amorfos, como resultado de sus actividades metabólicas sobre ciertas condiciones ambientales. En esta investigación, se aplicaron los conocimientos sobre bacterias para dar solución a algunos problemas de ingeniería, estudiando la capacidad de las bacterias nativas existentes en un suelo tropical de precipitar minerales de carbonato de calcio, a partir de la adición de un medio nutriente. Este nutriente resultó óptimo para inducir la bioprecipitación, generando fibras y cristales de carbonato de calcio, que varían las propiedades del suelo causando una mayor estabilidad estructural de los granos, un mejor desempeño de los agregados y una menor deformación en la masa de suelo.

**Especies de Candida colonizantes de cavidad oral en pacientes pediátricos oncológicos hospitalizados en el IAHULA, Mérida, Venezuela**

En pacientes con procesos neoplásicos, el tratamiento utilizado constituye un agente inductor del desequilibrio de la microbiota oral, permitiendo que la cavidad bucal se torne en un ambiente idóneo para la colonización y proliferación de microorganismos causantes de infecciones oportunistas como Candida spp. Se identificaron las especies de Candida colonizantes de cavidad oral en 26 pacientes pediátricos oncológicos hospitalizados en el Instituto Autónomo Hospital Universitario de Los Andes. Se tomaron muestras de la cavidad oral, se cultivaron en agar Sabouraud dextrosa con antibiótico y las levaduras fueron identificadas por métodos convencionales: formación de tubo germinal, formación de clamidoconidias, auxanograma y producción de color en el medio cromogénico Hicrome Candida agar base. Se obtuvo un 59,3% de colonización, predominando C. albicans con un 64%, seguido por las especies de Candida no albicans: C. krusei 19,5%, C. glabrata 9,8%, C. tropicalis 4,9% y C. parapsilosis 2,4%. Estas especies colonizantes no fueron concluyentes ni específicas de una patología oncológica determinada, sin embargo la estancia hospitalaria favoreció la colonización por las especies de Candida no albicans. El conocimiento de las especies colonizantes de cavidad oral ofrece información epidemiológica útil que permitirá orientar una profilaxis adecuada y un tratamiento oportuno, en caso de desarrollarse una candidiasis oral.

In patients with neoplastic processes, the treatment being used constitutes an agent which induces an unbalance of oral microbes, making the oral cavity a suitable environment for colonization and proliferation of microorganisms that produce opportunist infections such as Candida spp. In a study of 26 pediatric patients hospitalized at the Instituto Auónomo Hospital Universitario de los Andes, we identified the oral colonizing Candida spp. in these patients. Samples taken from the oral cavity were cultured in Sabouraud dextrose agar with antibiotics and the yeasts were identified by conventional methods: germinal tubes and chlamydoconidia formation, auxanogram, and color production with the medium Hicrome Candida chromogenic agar base. We determined 59.3% colonization with predomination of C. albicans in 64%, followed by non albicans Candida spp: C. krusei 19.5%, C. glabrata 9.8%, C. tropicalis 4.8%, and C. parapsilosis 2.4%. None of these colonizing species were conclusive or specific for a determined oncologic pathology; nevertheless, the hospitalization period favored colonization by non albicans Candida spp. Information about the colonizing species of the oral cavity offers useful epidemiological information for the orientation of adequate prophylaxis and opportune treatment when oral candidiasis develops.

**Aislamiento de Candida spp. en ambiente y personal que labora en una unidad de cuidados intensivos**

Las infecciones nosocomiales por especies de Candida son causa importante de morbilidad y mortalidad, especialmente en pacientes críticos, siendo relevante establecer la fuente potencial de infección en ambientes hospitalarios. El objetivo de este estudio fue aislar e identificar especies de Candida en equipos médicos, mobiliarios y manos del personal que labora en una unidad de cuidados intensivos y evaluar su susceptibilidad a fluconazol y voriconazol.Se obtuvieron muestras mediante hisopo estéril, humedecido en caldo cerebro corazón suplementado con cloranfenicol. La identificación se realizó mediante las características de crecimiento en agar cromogénico y por métodos convencionales; la susceptibilidad a fluconazol y voriconazol fue evaluada mediante el método de difusión del disco (CLSI M44-A). De mobiliario y equipos médicos se obtuvieron 26 (68,4%) aislados y de las manos del personal 12 (31,6%). C. parapsilosis fue la especie más frecuente (55,4%), seguida de C. tropicalis, C. famata, C. glabrata y C. guilliermondii; además, se aislaron otras levaduras, Rhodotorula spp. y el Complejo Trichosporon (23%). El 65,8% de los aislados fue sensible a fluconazol y el 81,6% a voriconazol. La presencia ambiental de especies de Candida sugiere que deben mejorarse las normas de higiene intrahospitalarias para prevenir su transmisión horizontal.

Nosocomial infection by Candida species are an important cause of morbidity and mortality, especially in seriously ill patients, and it is important to establish the infection source in hospital environments. The purpose of this study was to isolate and identify Candida species in medical equipments, furniture, and hands of staff working in intensive care units and evaluate their susceptibility to fluconazole and voriconazole. Samples were obtained with sterile swabs humidified with brain-heart broth supplemented with chloramphenicol. Identification was done through growth characteristics in chromogenic agar and by conventional methods; fluconazol and voriconazole susceptibility was evaluated by the disk diffusion method (CLSI M44-A). Twenty-six (68.4%) of the isolates were obtained from furniture and medical equipments and 12 (31.6%) from the hands of the staff. The most frequent species was C. parapsilosis (55.4%), followed by C. tropicalis, C. famata, C. glabrata and C. guilliermondii; other yeasts were also evaluated, Rhodotorula spp. and the Trichosporum Complex (23%). Regarding sensitivity, 65.8% of the isolates were sensitive to fluconazole and 81.6% to voriconazole. The environmental presence of Candida spp suggests that intra-hospital hygiene regulations should be improved in order to prevent their horizontal transmission.

Detección de microorganismos en maíz tierno molido comercializado en Maracay, estado Aragua, Venezuela

Con el fin de evaluar la microbiota asociada al maíz tierno molido, se analizaron 20 muestras provenientes de varios centros de distribución de Maracay, estado Aragua. A cada muestra se le realizó un análisis físico-químico (medición de pH y acidez). Se utilizó el método de contaje en placa para la cuantificación de mohos y levaduras (Norma Covenin 1337:1990) y bacterias mesófilas (Norma Covenin 902:1978). Para la estimación de coliformes totales y fecales se usó el método NMP (Norma Covenin 1104:1996). Los datos obtenidos se analizaron mediante análisis de varianza. No se encontraron diferencias estadísticamente significativas en los valores de pH, acidez, contajes de mohos, levaduras y bacterias mesófilas, ni en la estimación de coliformes totales y fecales en las muestras analizadas. Los valores de pH se encontraron entre 6,1-6,4 y los de acidez entre 2,6-2,8. Los contajes de mohos, levaduras y la estimación de coliformes totales y fecales excedieron el límite permitido por la norma mexicana NOM-147-SSA1-1996 de cereales y sus productos y la venezolana Covenin 1452:1993, evidenciándose una elevada contaminación de las muestras analizadas, a excepción de los contajes de bacterias mesófilas. El elevado crecimiento de coliformes en todas las muestras analizadas representa un riesgo para la salud humana.

With the purpose of evaluating the macrobiotic population associated with tender ground corn, we analyzed 20 samples obtained at several distribution centers in Maracay, Aragua State. Each sample was submitted to a physical-chemical analysis (pH and acidity measurements). For quantification of molds and yeasts we used the NMP method (Covenin Regulation 902.1978). The data obtained were analyzed through a variance analysis. There were no statistically significant differences in pH and acidity values, or in mold, yeasts or mesophilic bacterial counts, or in the estimation of total and fecal coliforms in the samples analyzed. pH values were between 6.1 - 6.4, and acidity values between 2.6 - 2.8. Molds and yeasts counts and estimation of total and fecal coliforms exceeded the limits allowed by the Mexican Regulation NOM-147-SSA1-1996 for cereals and their products, and the Venezuelan Regulation Covenin 1452-1993, showing a high contamination of the samples analyzed, except for the mesophilic bacterial counts. The high coliform growth in all the samples analyzed represents a risk for human health.

Requerimientos nutricionales de un cultivo iniciador de Saccharomyces cerevisiae utilizado en la elaboración de vino de naranja

The study of the yeasts present in the orange juice microbiota and used in the winemaking involves the isolation, identification and production of biomass. In order to optimize the yeast growth, the nutritional requirements should be determined. The aim of this work was to determine the vitamin and other growth organic factors demand for the S. cerevisiae isolated from fermented orange juice. The culture medium was formulated with sucrose (4 g/L) as carbon and energy source (CES), urea as nitrogen source (NS), six vitamins (calcium pantothenate, pyridoxine, thiamine, biotin, niacin, folic acid), and inositol and p-aminobenzoic acid (PABA) as growth factors. The complete culture medium was used as blank, and three other media were prepared: without the vitamins and growth organic factors, with calcium pantothenate, pyridoxine, thiamine, biotin and inositol and with the latter four vitamins, but for inositol. Finally, four new media were obtained by elimination of one vitamin at a time. The temperature was set at 30 ºC and the pH, at 5.0. The S. cerevisiae present in the orange juice needs calcium pantothenate, pyridoxine, thiamine and biotin to grow adequately under aerobic conditions in a batch system, not being auxotroph for niacin, folic acid, PABA and inositol.

El estudio de levaduras autóctonas para ser usadas en la elaboración de vino de naranja, incluye aislamiento, identificación y obtención de biomasa. Para optimizar su crecimiento se deben establecer los requerimientos nutricionales. El objetivo de este estudio fue definir las necesidades de vitaminas y factores orgánicos de crecimiento de S. cerevisiae aislada de jugo de naranja fermentado. Se formuló un medio de cultivo con sacarosa (4 g/L) como fuente de carbono y energia (FCE) y urea como fuente de nitrógeno (FN), con 6 vitaminas (pantotenato de calcio, piridoxina, tiamina, biotina, niacina, ác. fólico) e inositol y ácido p-aminobenzoico (PABA) como factores de crecimiento. El medio completo se usó como testigo, preparándose además otros tres medios: con ausencia de todas las vitaminas y factores orgánicos de crecimiento, con pantotenato de Ca, piridoxina, tiamina, biotina e inositol y con esas 4 vitaminas, pero sin inositol. Finalmente, se procedió a eliminar una vitamina. Los cultivos se realizaron en aerobiosis a 30 ºC y pH 5,0. La cepa autóctona de S. cerevisiae requiere las vitaminas pantotenato de calcio, piridoxina, tiamina y biotina para crecer adecuadamente en condiciones aeróbicas en sistema batch; en cambio, no es auxótrofa para niacina, ácido fólico, PABA e inositol.

**Seroprevalencia de infección por Trypanosoma cruzi en bancos de sangre públicos del oriente de Venezuela**

Se evaluó la seroprevalencia de anticuerpos tipo IgG anti-Trypanosoma cruzi en tres bancos de sangre públicos del oriente Venezolano (estado Sucre: Hospital Universitario Antonio Patricio de Alcalá Cumaná; Hospital Santos Aníbal Dominicci Carúpano; estado Monagas: Hospital Núñez Tovar, Maturín). Se evaluaron 1.301 sueros provenientes de donantes (rango de edad: 18 a 59 años), de ambos sexos. Quinientos dieciocho (n=518) procedieron del banco de sangre del Hospital de Cumaná, 281 del banco de sangre del Hospital de Carúpano y 502 del banco de sangre del Hospital de Maturín. El diagnóstico serológico fue realizado mediante la prueba de ELISA (EPI-ELISA) y como prueba confirmatoria la técnica de Western blot (TESA-blot). Para la evaluación de los resultados de las pruebas no concluyentes, se empleó una tercera prueba serológica (inmunofluorescencia indirecta: IFI). La seropositividad de anticuerpos tipo IgG anti-T. cruzi fue de 0,6% (8/1301 donantes) en los tres bancos de sangre evaluados. La seroprevalencia de infección por T. cruzi en los tres bancos de sangre públicos estudiados resultó baja; no obstante, se recomienda aplicar más de una prueba serológica para mejorar el diagnóstico de la enfermedad de Chagas en los bancos de sangre de Venezuela.

The seroprevalence of IgG type anti-Trypanosoma cruzi antibodies was evaluated at three public blood banks in Eastern Venezuela (Hospital Universitario Antonio Patricio de Alcala, Cumaná and Hospital Santos Anibal Dominici, Carúpano, Sucre State; and Hospital Nuñez Tovar, Maturin, Monagas State). The evaluation included 1,301 serum samples obtained from donors (ages: 18-59 years, both sexes). Five hundred and eighteen (N=518) came from the blood bank at the Hospital in Cumaná, 281 from the blood bank at the Hospital in Carúpano, and 502 from the blood bank at the Hospital in Maturín. The serologic diagnosis was done by the ELISA test (EPI-ELISA) and as confirmation we used the Western blot test (TESA-blot). For the evaluation of non conclusive results we used a third serologic test (indirect immunoflourescence (IIF)). Seropositivity of IgG type anti-T. cruzi antibodies was 0.6% (8/1301 donors) from the 3 blood banks evaluated. T. cruzi infection seroprevalence at the 3 blood banks studied was low; nevertheless, it is recommended to apply more than one serologic test to improve the diagnosis of Chagas disease at Venezuelan blood banks.

**Infección por Hymenolepis diminuta en infante del municipio Girardot, Maracay, estado Aragua, Venezuela**

Se presenta un caso inusual de infección por Hymenolepis diminuta en infante de un año de edad residente en Maracay, estado Aragua. El hallazgo se realizó de manera fortuita por el personal del Laboratorio de Parasitosis Intestinales y Serología de Esquistosomiasis de la Dirección General de Salud Ambiental del Ministerio del Poder Popular para la Salud, a donde fueron remitidos ejemplares adultos del parásito eliminado de forma espontánea por el paciente. Antes de la expulsión del parásito, el paciente presentó sintomatología digestiva, fiebre y manifestaciones alérgicas. La representante del infante refirió la presencia de ratas y ratones en el jardín de la vivienda. Este caso se constituye en el primer informe de infección por H. diminuta en el estado Aragua. Se sugiere realizar investigación epidemiológica más rigurosa para determinar la prevalencia de himenolepiosis.

Presentation of an unusual case of Hymenolepis diminuta infection in a one-year old infant residing at Maracay, Aragua State. The finding occurred fortuitously by the staff of the Intestinal Parasites and Schistosomiasis Serology Laboratory of the General Direction of Environmental Health of the Ministerio del Poder Popular para La Salud, who received two adult forms of the parasite eliminated spontaneously by the patient. Before the expulsion of the parasite, the patient had digestive symptoms, fever and allergic reactions. The infants guardian referred the presence of rats and mice in the garden of the house. This case is the first report of this type of infection by H. diminuta in Aragua State. A more rigorous epidemiological investigation is suggested to determine the prevalence of himenolepiosis.