Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiología

Venezuela país de contradicciones: III. Crisis humanitaria y descapitalización del conocimiento

María Luisa Novoa

Comparación del sistema BacT/ALERT® 3D con los métodos de cultivo Lowenstein-Jensen y Ogawa-Kudoh para el aislamiento de micobacterias

La tuberculosis es una enfermedad causada por bacterias pertenecientes al Complejo Mycobacterium tuberculosis. El diagnóstico se dificulta por su sintomatología inespecífica y los métodos bacteriológicos que ofrecen resultados tardíos. El objetivo del presente estudio fue comparar el desempeño del sistema automatizado BacT/ALERT® 3D con los métodos convencionales de cultivo en medio Lowenstein-Jensen (L-J) y Ogawa-Kudoh (O-K) para el aislamiento de micobacterias. Se procesaron 266 muestras provenientes de pacientes con sospecha de tuberculosis entre mayo y octubre de 2013. Se aislaron 63 bacilos acido-resistentes: 46 M. tuberculosis y 17 micobacterias no tuberculosas (MNT). Al comparar los tres métodos, se observó que todos presentaron desempeño similar en el aislamiento de M. tuberculosis. Las tasas de recuperación obtenidas no mostraron diferencia estadísticamente significativa (p>0,05) sin embargo, con BacT/ALERT® 3D se aislaron mayor número de MNT, con diferencia significativa respecto al L-J (p<0,05). El tiempo de detección promedio de M. tuberculosis fue de 11 días por BacT/ALERT® 3D, 20 días en L-J y 23 días en O-K. La contaminación cruzada, fue de 0,38%. Se concluyó que BacT/ALERT® 3D es una excelente herramienta para el aislamiento de M. tuberculosis, mejora la recuperación de las MNT y reduce significativamente el tiempo de diagnóstico, lo que permitiría un tratamiento oportuno, con mayor probabilidad de sobrevida del paciente.

Tuberculosis is a disease caused by species of the Mycobacterium tuberculosis complex. The diagnosis is difficult due to nonspecific symptoms and late results of bacteriological culture methods. The aim of this study was to compare the efficiency of the BacT/ALERT® 3D automated system with conventional methods of culture on Lowenstein-Jensen (L-J) and Ogawa-Kudoh (O-K). A total of 266 specimens from patients with clinical suspected tuberculosis were studied from May to October 2013. We recovered, 63 acid fast bacilli isolates: 46 identified as M. tuberculosis and 17 as nontuberculous mycobacteria (NTM). The three methods had a similar performance for isolation of M. tuberculosis; recovery rates obtained showed no statistically significant difference (p> 0.05). However, with the BacT/ALERT® 3D system, a larger number of MNT were isolated, with significant statistic difference for L-J (p <0.05). The average detection time for M. tuberculosis was 11 days with the BacT/ALERT® 3D system, with significant statistic difference for LJ (20.4 days) and O-K (23.2 days). Additionally, cross-contamination was determined as 0.38%. The study results showed that the BacT/ALERT® 3D system is an excellent tool for isolation of M. tuberculosis and it improves the recovery of NTM. Also, the time of diagnosis is significantly reduced, leading to earlier treatment that could improve patient recovery.

Identificación de genes que codifican enzimas modificadoras de aminoglucósidos en cepas intrahospitalarias de Klebsiella pneumoniae

Las infecciones por Klebsiella pneumoniae, constituyen un problema creciente en los centros hospitalarios. El objetivo de la presente investigación fue evaluar la resistencia a los aminoglucósidos, así como la presencia de genes que codifican enzimas modificadoras de aminoglucósidos (EMA) en aislados intrahospitalarios de Klebsiella pneumoniae. Se analizaron 56 cepas provenientes de pacientes con diagnóstico de infección intrahospitalaria del Hospital Universitario Antonio Patricio de Alcalá, durante el periodo enero-septiembre de 2008. Se determinó la susceptibilidad antimicrobiana mediante los métodos de difusión y dilución en agar, siguiendo los lineamientos del Instituto de Estándares Clínicos y de Laboratorio. Se empleó la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para detectar los genes que codifican EMA. Se encontró resistencia a gentamicina y tobramicina en el 33,9% y 35,7%, respectivamente. Los fenotipos de resistencia a aminoglucósidos más frecuentes fueron I (ANGMKTob) y II (GMKTob). Se identificaron los genes aadA (21,4%), aac(3)-IIa (16,1%), aadB (14,3%), aac (6`)-Ib (3,6%) y aph (3`)-Ia (1,8%). En 10 cepas se observó la presencia de más de un gen y en 13 cepas se correlacionó el fenotipo con los genes encontrados. La resistencia a los aminoglucósidos en los aislados evaluados se debe, principalmente, a enzimas de tipo acetiltransferasas.

Klebsiella pneumoniae infection is a growing problem in hospitals. The objective of this study was to evaluate resistance to aminoglycosides and detection of genes encoding for aminoglycoside modifying enzymes (AME) in hospital isolates of K. pneumoniae. Fifty-six isolates from patients with diagnosis of nosocomial infection at the University Hospital Antonio Patricio de Alcala, during the period January to September 2008 were included for study. Antimicrobial susceptibility was determined by the methods of diffusion and agar dilution, following the Institute for Clinical and Laboratory Standards Guidelines. Genes encoding AME were determined by the polymerase chain reaction procedure. Resistance results for Gentamycin were 33.9% and for Tobramycin 35.7%. Aminoglycoside resistance phenotypes most frequently identified were I (ANGMKTob) and II (GMKTob). The genes involved were aadA (21.4%), aac(3)-IIa (16.1%), aadB (14.3%), aac (6`)-Ib (3.6%) y aph (3`)-Ia (1.8%) For 10 of the isolates studied more than one gene was identified. In 13 isolates the phenotype corresponded to the genes found. Aminoglycoside resistance in the isolates studied is mainly due to the presence of acetyltransferase enzymes.

**Resistencia a metales pesados, antibióticos y factores de virulencia en cepas de Enterococcus aisladas en la provincia del Chubut, Argentina**

La contaminación por metales pesados (MP) constituye un problema creciente para la salud pública. La utilización de bioindicadores permite evaluar el impacto de la contaminación antrópica. En este estudio se evaluaron 730 cepas de Enterococcus provenientes de diferentes fuentes de la comarca VIRCh-Valdés (Provincia de Chubut), mediante la prueba de sensibilidad a Pb++ por el método de dilución en placa, a concentraciones comprendidas entre 50 mg/L y 1.200 mg/L. De las cepas evaluadas, 223 exhibieron resistencia a plomo a concentraciones ≥ 50 mg/L. Dentro de este grupo se seleccionaron 22 aislados altamente resistentes a plomo (≥ 800 mg/L) con el objetivo de evaluar su resistencia a otros metales pesados, resistencia a antibióticos y determinar sus factores de virulencia. Todas las cepas seleccionadas mostraron alta sensibilidad a Hg++, un patrón variable de resistencia frente a Cd++ y Cr+6 y resistencia moderada a Ni++. Las cepas resultaron susceptibles a ampicilina y penicilina, y presentaron un patrón variable de resistencia a los restantes antibióticos ensayados. Entre los factores de virulencia, se detectó actividad de gelatinasa en dos cepas y sólo una cepa exhibió actividad hemolítica. Estos resultados sugieren una relación entre la resistencia a metales pesados, resistencia a antibióticos y factores de virulencia en cepas de Enterococcus aisladas del medio ambiente.

Contamination by heavy metals is a growing problem for public health and the use of bio-indicators are means for assessing anthropogenic pollution. In this study 730 Enterococcus strains were isolated from different sources of the region VIRCh - Valdés (Province of Chubut) were tested for sensibility to Pb++ by the plate dilution method at concentrations ranging from 50 mg/L to 1200 mg/L. A total of 223 strains displayed resistance to lead at concentration ≥ 50 mg/L. Among this group, and on the basis of its high resistance to lead (≥ 800 mg/L), 22 strains were selected with the goal to determine antibiotic and heavy metal resistance pattern and also the presence of virulence traits. All isolates showed high sensibility to Hg++, a variable pattern against Cd++ and Cr+6, and moderate resistance to Ni++. The strains were all susceptible to ampicillin and penicillin and displayed a variable pattern of resistance towards the remaining antibiotics assayed. Among the virulence traits determined, gelatinase production was detected in 2 strains and only one isolate showed hemolytic activity. The results obtained in this work suggest a relationship between heavy metal resistance, antibiotic resistance and virulence factors in Enterococcus strains isolated from the environment.

Evaluación microbiológica uterina durante el puerperio de vacas Nelore primíparas

O objetivo deste estudo foi avaliar a microbiota uterina de vacas primíparas da raça Nelore durante o período puerperal. Foi coletado material do útero de 15 fêmeas recém-paridas, uma vez por semana, durante 60 dias. O material coletado foi inoculado em meio de cultura, e os microrganismos foram identificados por meio de coloração de Gram, coloração Azul de Algodão e testes bioquímicos. As amostras foram isolados Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, Staphylococcus aureus, Streptococcus spp., S. intermedius, Bacillus spp., Actinomyces pyogenes, Sporothrix schenckii, Trichophyton verrucosum e Candida albicans, geralmente em associações. Com isso, concluímos que o puerpério é um processo séptico, e os agentes encontrados são os mesmos que provocam a maioria dos casos de infecções uterinas pós-parto. O número e a variação de microrganismos decrescem a cada semana, demonstrando o processo natural de autodefesa do útero que ocorre quando o animal apresenta-se sadio.

El objetivo de este estudio fue evaluar la microbiota uterina de vacas primíparas de la raza Nelore durante el puerperio. El material fue recogido del útero de 15 vacas que habían parido recientemente, una vez a la semana durante 60 días. El material recogido se inoculó en medios de cultivo y los microorganismos fueron identificados mediante las tinciones de Gram, Azul de Algodón, y por pruebas bioquímicas. En los cultivos se aislaron Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, Staphylococcus aureus, Streptococcus spp., S. intermedius, Bacillus spp., Actinomyces pyogenes, Sporothrix schenckii, Trichophyton verrucosum y Candida albicans, generalmente con más de un microorganismo por muestra. Se concluyó que el puerperio es un proceso séptico, y que estos agentes son la causa de la mayoría de los casos de infecciones uterinas después del parto. El número y variedad de microorganismos disminuyeron cada semana, lo que demuestra un proceso natural de autodefensa del útero cuando el animal está sano.

It was aimed to evaluate the uterine microbiota of primiparous Nelore cows during the puerperal period. To 15 fifteen females immediately parous, secretions were obtained from the uterus once a week, during sixty days. Material obtained was inoculated in culture media, and microorganism identification was made by smears stained by the Gram method, cotton blue and biochemical tests. Microorganisms recovered were Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Proteus mirabilis, Staphylococcus aureus, S. intermedius, Streptococcus spp, Bacillus spp, Actinomyces pyogenes, Sporotrix schenckii, Trichophyton verrucosum and Candida albicans, generally recovering more than one microorganism per culture, demonstrating that the puerperium is a septic process. The number and type of microorganisms decreased every week, demonstrating the natural process of self-defense of the uterus that occurs by the end of puerperium.

Estudio de la desialización producida por larvas musculares de Trichinella spiralis

Trichinella spiralis es agente causal de una zoonosis endémica en Argentina. El objetivo fue estudiar la desialización eritrocitaria producida por larvas musculares (LM) de T. spiralis. Se trabajó con concentrados de LM, incubados en partes iguales con glóbulos rojos (GR) Grupo O (37 °C) durante 3 horas (con y sin agitación controlada) durante 150 minutos, a intervalos de 30 minutos, para estudiar el curso de la desialización en el tiempo. Los GR controles fueron incubados de la misma manera, con igual volumen de solución fisiológica. Se aplicó el método de titulación de la agregación, calculando título y coeficiente de puntuación total (CexpST). Se encontró que los eritrocitos incubados con LM presentaron mayor agregación que los controles. El valor medio de CexpST con agitación (0,43) fue significativamente menor que cuando los GR no se agitaron (0,72). El estudio de la desialización eritrocitaria en el tiempo mostró que el título de los GR control disminuyó significativamente a los 90 minutos en 5/10 repeticiones y a los 150 minutos en 9/10. El aumento del tiempo de incubación produjo el incremento de la desialización excepto a los 120 y 150 minutos donde no existieron diferencias significativas en el valor de CexpST. La experiencia realizada in vitro, sugeriría que en la infección in vivo, las LM podrían captar el ácido siálico a partir de los residuos sializados presentes en la célula muscular.

Trichinella spiralis is the cause of an endemic zoonosis in Argentina. The objective was to study the erythrocyte desialylation by T. spiralis muscle larvae (ML) applying an aggregation titulation method. We worked with ML concentrates, which were incubated with an equal volume of O Group erythrocytes (RBCs) at 37° C for 3 hours, (with and without controlled agitation) and for 150 minutes, taking samples at 30 minutes intervals to study the course in time of the desialylation. RBCs control were incubated with an equal volume of physiological saline solution. Aggregation titulation method was applied and the title and total score coefficient (TSexpC) were calculated. The results showed that erythrocytes incubated with ML showed more aggregation than controls. The average TSexpC with agitation (0.43) was significantly lower than when erythrocytes were not stirred (0.72). The course in time of the erythrocyte desialylation showed that the RBCs contol title decreased significantly at 90 minutes in 5/10 repetitions and at 150 minutes in 9/10. Increasing the incubation time produced an increase in erythrocyte desialylation, except at the 120 and 150 minutes interval where no significant differences in TSexpC values were found. The in vitro experience would suggest that in cases of in vivo infection, ML could capture sialic acid from sialylate residues present in the muscle cell.