Revista de la Facultad de Ciencias Veterinarias

**Morphological Characterization of the Organs of the Endocrine System of the Spectacled Cayman (Caiman crocodilus crocodilus): Histological Aspects**

Se realizó la descripción histológica de los órganos endocrinos de nueve babas, cinco hembras y cuatro machos (Caiman crocodilus crocodilus), provenientes del Hato Santa Ana, estado Guárico y de la laguna de oxidación de la Facultad de Agronomía de la Universidad Central de Venezuela (UCV), estado Aragua. Las muestras se fijaron en formol neutro al 10% v/v y se incluyeron en parafina en el Laboratorio de Histoquímica de la Facultad de Ciencias Veterinarias de la UCV. Todos los órganos fueron sometidos a la coloración de rutina con hematoxilina y eosina. También, se utilizaron otras coloraciones especiales para la hipófisis como: ácido peryódico de Schiff, tricrómico de Shorr, tricrómico de Gallego y el método de Wilder. Los hallazgos del presente estudio permitieron evidenciar la presencia de la hipófisis, tiroides, paratiroides, glándulas adrenales y la porción endocrina del páncreas, con estructuras bien definidas, como se presentan en otros reptiles, aves y mamíferos; a diferencia de la epífisis, que no se ubicó macroscópicamente. Los hallazgos revelaron que la hipófisis se encontraba organizada de manera similar a otras especies, con una adenohipófisis y una neurohipófisis. La epífisis o glándula pineal no se presentó como un órgano independiente; histológicamente, estuvo representada por células con citoplasma difícil de distinguir y un núcleo redondeado, con nucléolo prominente, a nivel del encéfalo. La tiroides presentó folículos tiroideos y células parafoliculares características. En la glándula paratiroides se evidenciaron las células principales, oxífilas y células similares a las parafoliculares. Las glándulas adrenales mostraron tejido cortical y tejido medular entremezclados. El páncreas mostró tejido linfático asociado, destacándose la porción endocrina, por su agrupación en islotes de Langerhans, constituidos por células con citoplasma pálido, en comparación con las de los acinos.

A histological description of the endocrine organs of nine spectacled caimans (Caiman crocodilus crocodilus) of both sexes, from the Santa Ana farm, in the State of Guárico and the manure lagoon of the Agronomy School of the Universidad Central de Venezuela (UCV), in the State of Aragua, Venezuela, was performed. Samples were fixed in 10% v/v neutral formalin and embedded in paraffin at the Histochemistry Laboratory of the School of Veterinary Medicine of the UCV. All organs were subjected to routine histological staining techniques with hematoxylin and eosin; also, special techniques for the hypophysis such as the periodic acid-Schiff, the Shorrs trichrome, the Gallegos trichrome, and the Wilder method were used. The results of the present study showed the presence of the hypophysis, thyroid, parathyroid, adrenal glands, and the endocrine portion of the pancreas, with well defined structures as seen in other reptiles, birds and mammals; unlike the epiphysis, which was not macroscopically identified. The pituitary was organized in a manner similar to other species, with an adenohypophysis and a neurohypophysis. The pineal gland was not seen as an independent body. From the histological stand point, this gland was represented by cells with a difficult to distinguish cytoplasm, with a rounded nucleus, and prominent nucleoli at the brain level. The thyroid showed typical follicles and characteristic parafollicular cells. In the parathyroid gland the main cells, oxyphyl, and parafollicular-like cells were evidenced. The adrenal glands had intermingled cortical and medullary tissues. The pancreas exhibited associated lymphatic tissue, standing out the endocrine portion, due to the clustering of Langerhans islets, made up of cells with pale cytoplasms, compared to those of the acini.

Enzootic Bovine Leukosis Assessment by Hematology Gottingen Keys and ELISA in Boyacá, Colombia

La Leucosis Enzootica Bovina (LEB) es una enfermedad de distribución mundial que genera grandes pérdidas económicas. Esta enfermedad, afecta principalmente la ganadería de las zonas lecheras y en Colombia no se tienen datos exactos del estado sanitario, ni se han estimado las pérdidas generadas a causa de esta patología. El objetivo fue determinar la presencia de LEB utilizando las claves hematológicas de Göttingen en Toca, Boyacá (Colombia). Se tomaron 243 muestras serológicas a 81 hembras de razas lecheras, seleccionadas al azar en intervalos de dos meses. Posteriormente, las muestras positivas y sospechosas a las claves, fueron procesadas mediante la técnica de ELISA, con el fin de corroborar su seropositividad. Las claves de Göttingen permitieron clasificar, de los 81 ejemplares, cinco muestras positivas y 18 sospechosas, de las cuales las cinco positivas resultaron también positivas a la técnica de ELISA. De los 18 ejemplares sospechosos, cinco resultaron seropositivos. La prevalencia total fue del 13.5 %; para los ejemplares entre 3 y 6 años de edad fue de 25% y para mayores de seis años fue del 6%. Se pudo concluir que el recuento de leucocitos fue de relevancia para el diagnóstico de la LEB. Sin embargo, las técnicas de Göttingen resultan no ser tan específicas para la detección de la enfermedad, por lo cual se recomienda la aplicación de técnicas con una especificidad y una sensibilidad mayor como ELISA y PCR.

Bovine Leukemia Virus (BLV) is an internationally prevalent disease that causes great economic losses. It mainly affects livestock in dairy production areas. Colombia lacks accurate data on the prevalence of BLV and its economic effect. This study aimed to determine the presence of BLV using Göttingen Hematological Keys in Toca, Boyacá (Colombia). A total of 243 serological samples were taken from 81 females of randomly selected dairy breeds at two-month intervals. Subsequently, the positive and suspect samples to the keys were processed by the ELISA technique in order to corroborate their seropositivity. The Göttingen keys allowed researchers to classify, from the 81 specimens, five positive samples and 18 suspicious ones, of which the five positive samples were also positive for the ELISA technique. Of the 18 suspected specimens, five were also seropositive. The total prevalence was 13.5%; for individuals between 3 and 6 years of age the prevalence was 25% and for individuals over 6 years the prevalence was 6%. Researchers concluded that the leukocyte count was relevant for the diagnosis of LEB. However, the Göttingen techniques are unspecific for the detection of the disease, so techniques with greater specificity and sensitivity such as ELISA and PCR yield more accurate results.

In vitro Resistance of Rhipicephalus microplus ticks to Organophosphates, Pyrethroids and Amitraz in Boyacá Department, Colombia

El presente estudio evaluó la resistencia in vitro de la garrapata Rhipicephalus microplus a organofosforados (OF), piretroides sintéticos (PS) y amitraz (AM). Las garrapatas adultas fueron recolectadas en Boyacá, Colombia y sometidas a la prueba de inmersión para evaluar la eficacia de los fármacos, el efecto sobre la ovoposición y el porcentaje de eclosión larvaria. Se utilizó un diseño experimental completamente al azar con cinco grupos y tres repeticiones por tratamiento, con 10 garrapatas por repetición. Los resultados demostraron tasas de mortalidad a las moléculas evaluadas, encontrando 43, 56, 60 y 96% de mortalidad para el grupo control, PS, AM y OF, respectivamente, al día 21 del experimento. La inhibición de la ovoposición fue de 13,4% para el grupo control, 44,6% para AM, 45,5% para PS y 96% para OF. El porcentaje de eclosión de huevos fue de 88% para el grupo control, 16% para AM, 14% para PS y 4% para OF. El presente estudio in vitro representa el primer diagnóstico en el departamento de Boyacá, Colombia.

The present investigation evaluated the in vitro resistance of the Rhipicephalus microplus tick, to organophosphates (OP), synthetic pyretroids (SP), and amitraz. Adult ticks were collected in the Department of Boyacá, Colombia, and subjected to the immersion test, to assess the efficacy of drugs, their effect on oviposition, and the percentage of larvae eclosion. A completely randomized experimental design was used, with 5 groups and 3 replicates per group, with 10 ticks per replicate. The results showed that the mortality rates in terms of percentage (%) of the assessed molecules were: 43 for the control group; 56 for SP; 60 for AM, and 96 for OP, respectively, at day 21 of the study. The inhibition of oviposition was: 13.4% for the control group; 44.6% for AM; 45.5% for SP; and 96% for OP. The present in vitro study represents the first diagnostic of resistance in the Department of Boyacá, Colombia.

**Effect of Supplementation with Canavalia ensiformis Seeds on Gastrointestinal Parasites and Performance on West African Ewe Lambs**

Con el objetivo de evaluar el efecto de la suplementación con semillas de Canavalia ensiformis molidas, sobre el contaje de huevos de nematodos (HPG), el contaje de ooquistes por gramo de Eimeria (OPG), el peso vivo (PV) y la prevalencia de los géneros de parásitos, se diseñó un experimento con 21 corderas West African, balanceadas por pv y carga parasitaria gastrointestinal y divididas al azar en 3 grupos homogéneos (n=7). Los animales pastoreaban 6 h/d, luego de la suplementación con uno de los tres tratamientos: T (sin semilla de canavalia), C (2,5g de semilla de canavalia/kg PV) y C+ (5g de canavalia/kg PV). Para HPG y OPG se tomaron muestras de heces en un día fijo a la semana y se utilizó la prueba de Kruskal-Wallis para su análisis estadístico. Los HPG resultaron 1346,8; 1498,7 y 1801,9 para T, C, y C+, respectivamente, sin efecto de tratamiento (P=0,1762). Los contajes de ooquistes fueron 1756,5; 1822 y 1257 OPG para T, C, y C+, respectivamente, siendo menor para C+ (P=0,05). El PV resultó similar entre tratamientos (P=0,5834). El género predominante del grupo T fue Bunostomun (61%), para C Haemonchus (28%) y para C+ Cooperia (26%), (P<0,001). En conclusión, la suplementación con 5g de canavalia/kg PV controló las cargas de ooquistes, sin afectar el comportamiento productivo de los animales.

To evaluate the effect of supplementation with ground seeds of Canavalia ensiformis on nematode eggs counts (number of eggs per gram of stools or EPG), Eimeria oocysts counts per gram (OPG), body weight (BW) and prevalence of parasites genera, twenty one (21) West African lambs, balanced by initial weight and gastro-intestinal parasite load and randomly divided into three homogeneous groups (n=7), were used. The animals grazed 6 hours/day, after supplementation with one of the following three treatments: T (no canavalia); C (2.5g of canavalia/kg per BW); and C+ (5g/kg of canavalia per BW). The assay lasted 77 d. Stool samples for EPG and OPG were taken on a fixed day of the week and the Kruskal-Wallis test was used for the statistical analysis. The results of the experiment show no treatment effect on EPG (1346.8; 1498.7 and 1801.9, for T, C, and C+, respectively = 0.1762). OPG were 1756.5; 1822 and 1257 for T, C, and C+, respectively, being lower for C+ (P = 0.05). BW were similar between treatments (P=0.5834). The predominant genus was Bunostomun for T group (61%), Haemonchus for animals under treatment C (28%) and Cooperia (26%) in animals subjected to treatment C+, (P<0.001). In conclusion, supplementation of the diet with ground canavalia seeds (5g/kg of BW) exerted control on parasite load without affecting productive performance.

Subdominant Antigens of Anaplasma marginale: New Vaccine Candidates Against Bovine Anaplasmosis

La anaplasmosis es una enfermedad infecciosa que afecta a los bovinos y es causada por la rickettsia intraeritrocítica Anaplasma marginale. A pesar de su impacto global, hasta el momento, no se ha desarrollado una vacuna efectiva. Se ha postulado que la inmunización del ganado con la membrana externa de la rickettsia, genera protección parcial contra la exposición al Anaplasma marginale y que esta respuesta está dirigida a seis polipéptidos denominados Proteínas Principales de Superficie (MSPs del inglés, Major Surface Proteíns). Estas proteínas presentan un carácter inmunodominante cuando se emplean como antígenos en su forma nativa o recombinante, lo que ha hecho pensar que son los antígenos indicados para una vacuna. Sin embargo, la protección brindada fluctúa entre una protección total o parcial a ninguna protección. La búsqueda de antígenos alternativos a las MSPs, se ha visto limitada a consecuencia de su muy baja o ausente capacidad inductora de formación de anticuerpos o de linfocitos T reactivos, los cuales son indispensables para su identificación mediante inmunoensayos. El objetivo de este trabajo fue describir las estrategias aplicadas recientemente para identificar nuevos antígenos de A. marginale, denominados antígenos subdominantes, porque representan una pequeña porción del proteoma de la rickettsia, los cuales han demostrado ser buenos candidatos vacunales contra la anaplasmosis. Actualmente, diversos estudios moleculares y bioinformáticos han definido varias proteínas de superficie y componentes del Sistema de Secreción Tipo IV, como antígenos potenciales; entre ellos están las proteínas Ana17, Ana29, Ana32, Ana37 y Ana43, que le han brindado una protección parcial al ganado después de la exposición al proceso infeccioso; y las proteínas VirB9-1, VirB9-2 y VirB10 (Sistema de Secreción tipo IV), las cuales generan una fuerte respuesta inmune en el ganado, aunque se desconoce su nivel de protección.

The Anaplasmosis is an infectious disease of cattle caused by the intraerythrocytic rickettsia Anaplasma marginale. Despite its overall impact, no effective vaccine has been developed so far. It has been postulated that immunization of cattle with the native outer membrane of rickettsia generates partial protection against Anaplasma marginale challenge; and that this response is directed to six polypeptides known as Major Surface Proteins (MSPs). These proteins display an immunodominant character when they are used as immunogens in their native or recombinant form, which has suggested that they are the appropriate vaccine antigens. However, the protection provided varies from a total or partial protection to no protection. The search for alternative antigens to MSPs has been limited as a result of their very low or null capacity for inducing the production of potential antibodies or reactive T cells, which are essential for their identification through immunoassays. The objective of this review was to describe the recently applied strategies for the identification of new antigens of A. marginale, the so-called subdominant antigens, proteins that represent a small portion of the proteome of the rickettsia. These proteins have shown to be good vaccine candidates against anaplasmosis. Currently, molecular and bioinformatics studies have defined several surface proteins and components of the Type IV Secretion System as potential antigens; among them are the Ana17, Ana29, Ana32, Ana37, and Ana43 proteins, which have given partial protection to cattle after the infectious challenge; and VirB9-1, VirB9-2, and VirB10 proteins (Type IV Secretion System), which generate a strong immune response in cattle, although their level of protection is unknown.