Investigación Clínica

Ciencia, razón de ser de la Universidad

No Deletion a Thalassaemia in Spain: Abnormal hematological index and molecular study

Las a talasemias en la mayoría de los casos es debida a deleciones que afectan a uno o a los dos genes a, siendo poco frecuente los casos debidos a mutaciones puntuales, inserciones o deleciones de pocos pares de bases, los cuales se han denominado a talasemias no deleción. Se determinó la incidencia de la a talasemia no deleción en los pacientes con a talasemia, mediante biología molecular. Se estudiaron 517 individuos remitidos al Hospital Clínico San Carlos, centro de referencia de estudios moleculares de Talasemias en Madrid- España, entre Enero del 2001 a Diciembre del 2003, en los que se había descartado ferropenia y presentaban microcitosis, hipocromía, Hb A2, Hb F y EEF de Hbs normales. Se estudiaron los 2 tipos de a talasemia no deleción más descritas en el Mediterráneo: 1) aHph debida a la deleción de 5 bp en el IVS I y 2) aNco a un cambio en el codón de iniciación del gen. De los 517, 40 presentaban una a talasemia no deleción (7,7%). De éstos, 28 fueron positivos para aHph del gen a2, 24 en estado heterocigoto, 1 homocigoto y 3 dobles heterocigotos asociados con la deleción 3,7 kb. Los 12 restantes resultaron positivos para la aNco del gen a2, 10 heterocigotos, 1 homocigoto y 1 doble heterocigoto asociado con la deleción 4,2 kb. La a talasemia no deleción representa < 8% de los casos de a talasemia en nuestro medio. La aHph es el tipo de a talasemia no deleción más frecuente y cuyas anormalidades hematológicas son más manifiestas que las presentadas en los casos de aNco

The a thalassaemia diseases in most cases are caused by deletions that affect one or two of the a genes, being less frequent the cases due to punctual mutations, insertions or deletions of a few pairs of bases, which have been denominated no deletion a thalassaemias. The objective of this investigation was to determine the incidence of the no deletion a thalassaemia in patients with a thalassaemia using molecular biology techniques. We studied 517 individuals of the San Carlos Hospital (Thalassemia Molecular Research Center, Madrid-Spain) between January 2001 and December 2003, in whom iron deficiency anemia had been ruled out, that presented microcytosis and hypochromia and that presented normal HbA2, HbF and EEF from normal Hbs. The two types of no deletion a thalassaemia most frequently described in the Mediterranean were studied: 1) a Hph due to deletion of 5bp in the IVS I and 2) aNco due to a change in the initiation codon of the gene. Of the 517 cases studied, 40 (7.7% of the cases) represented a no deletion a thalassaemia. Of these cases, 28 were positive for aHph of the a2 gene, 24 in the heterozygote state, one homozygote and three double heterozygotes associated with the 3,7 kb deletion. The remaining 12 cases were positive for the aNco of the a2 gene, 10 heterozygotes, one homozygote and one double heterozygote associated with the 4,2 kb deletion. The no deletion a thalassaemias represent < 8% from the cases in our environment. The aHph is the most frequent type of no deletion a thalassaemia and its haematological abnormalities are more manifest that the ones present in the cases of aNco

A combined proteomic and immunologic approach for the analysis of Schistosoma mansoni cercariae and adult worm protein extracts and the detection of one of the vaccine candidates, Sm28GST, from a Venezuelan parasite isolate

Understanding the mode of Schistosoma mansoni larval invasion and the mechanism of immune evasion utilized by larvae and adult worms is essential for a rational development of vaccines or drugs to prevent or cure the disease. This parasite has a very complex molecular organization in all parasite stages, and identifying the major parasite proteins would give clues to schistosome metabolism and to the interaction of the parasite with the host immune system. Our goal was the evaluation of the protein parasite repertoire using a proteomic approach, and the characterization of protein extracts from two different parasite stages of a Venezuelan isolate, such as cercariae and adult worms, previously performed by other authors in some other strains. A comparison among authors was made. Besides, we aimed to identify different isoforms of one of the vaccine candidates, the gluthation-S-transferase protein (Sm28GST), by 2D SDS-PAGE and mass spectrometry, and to achieve its immunologic detection using sera from rabbits immunized with synthetic peptides derived from the Sm28GST protein. These techniques allowed the identification of some of the target molecules of the protective immune response that are being evaluated as potential members of a multi-component and multi-stage anti-S. mansoni vaccine and to clarify if the selected peptides induce antibodies that are able to recognize different isoforms of the Sm28GST

Es esencial comprender la forma como las larvas de Schistosoma mansoni invaden y los mecanismos de evasión inmune utilizados por larvas y adultos, para el desarrollo racional de vacunas o drogas para prevenir o curar la esquistosomiasis. Este parásito tiene una organización molecular muy compleja en todos sus estadíos, por lo que la identificación de las proteínas más importantes es clave para investigar el metabolismo del esquistosoma y la interacción del parásito con el sistema inmune del hospedero. El objetivo de este trabajo fue evaluar el repertorio proteico del parásito utilizando una aproximación proteómica y la caracterización de extractos proteicos de dos estadios parasitarios diferentes de un aislado venezolano, como la cercaria y el verme adulto, previamente realizado por otros autores en otras aislados. Se realizó una comparación entre autores. Además, se identificaron diferentes isoformas de uno de los candidatos a vacuna, la glutation S transferasa (Sm28GST) por 2D SDS-PAGE y espectrometría de masas y se logró su detección inmunológica, usando sueros de conejos inmunizados con péptidos sintéticos derivados de la proteína Sm28GST. Estas técnicas permitieron identificar algunas de las moléculas blanco de la respuesta inmune protectora que están siendo evaluados como miembros potenciales de una vacuna multi-estadio y multi-componente y aclarar si los péptidos seleccionados indujeron anticuerpos capaces de reconocer diferentes isoformas de la Sm28GST

**Effect of the intake of an integral bread formulated with gum from Hymenaea courbaril on the concentrations of blood lipids of patients with mild-moderate dyslipidemia**

Hymenaea courbaril (Caesalpiniace), especie ampliamente diseminada en Venezuela, produce una goma clara y soluble en la semilla. El contenido de fibra dietética de la goma (60,7%) se usó como criterio para la formulación de un pan integral en la dieta para pacientes con dislipidemia. Se determinó la composición proximal del pan integral. La aceptabilidad del producto se evaluó por una prueba de comparación y por una escala hedónica. El diseño experimental, se hizo con una muestra de 30 voluntarios masculinos que presentaban dislipidemia. Se dividieron en dos grupos: el grupo A, se alimentó con una modificación de la dieta, que contenía un pan preparado con goma de H. courbaril, y el grupo B, recibió la dieta, sin la goma, con base en las recomendaciones de la Asociación Americana de Dietética (Control). Ambos grupos se mantuvieron en sus respectivas dietas durante 6 semanas. El perfil lipídico, se determinó en cada paciente, antes de iniciar la dieta y después del período señalado. El pan formulado, contenía 17,60% de proteínas; 1,19% de grasa y 0,97% de fibra cruda, de conformidad con lo establecido por las normas COVENIN. El Test de par de preferencia, demostró la mayor aceptación por el pan preparado con una concentración de goma al 7,0%, y un bajo contenido de grasa. Se produjo una disminución significativa en la concentración de triacilglicéridos y VLDL-colesterol en el grupo A. Estos hallazgos sugieren un posible uso de la goma de H. courbaril, como una modificación de la dieta, para pacientes con dislipidemia

The seeds of Hymenaea courbaril (Caesalpiniace), a species widely disseminated in Venezuela, produce a clear and soluble gum. The dietetic fiber content (60.7%) of the gum was used as a good criterion for the formulation of integral bread in a diet for dyslipidemia patients. The proximal composition of the integral bread was determined. The product acceptability evaluation was done by a comparison test and by a hedonic scale. The experimental design was carried out with a total of 30 male volunteers with dyslipidemia. They were divided into two groups: Group A was fed with a modified diet, which included bread prepared with the H. courbaril gum; and Group B received the same diet without the gum, based on the American Dietetic Association recommendations. Both groups were maintained on their respective diets for six weeks. The lipid profile was determined in each patient, before starting the diets and after the specified period. The bread formula contained 17.60% protein, 1.19% fat and 0.97% crude fiber, in accordance with standards established by COVENIN. The paired preference test showed grater acceptance of the bread prepared with a gum concentration of 7% and low fat content. Significant decreases in the concentrations of triacylglycerol and VLDL-cholesterol were observed in Group A. These findings suggest a possible use of the H. courbaril gum, as a diet modifier for dyslipidemic patients

Trypanosoma cruzi infection in pregnant mice induces a cellular immune response with citokines production in their fetuses

El objetivo del presente estudio fue detectar las citocinas IFN-g, IL-4 e IL-10 expresadas por células T CD4+ en tejidos de fetos de ratones con infección chagásica aguda. Para ello, se examinaron fetos de ratones NMRI cuyas madres fueron infectadas con 22×10³ tripomastigotes metacíclicos de la cepa M/HOM/BRA/53/Y de T. cruzi y preñadas durante la fase aguda de la infección. Para la detección y localización de infiltrados inflamatorios, nidos de parásitos, antígenos de T. cruzi y citocinas se emplearon las técnicas de hematoxilina-eosina, peroxidasa-anti-peroxidasa e inmunofluorescencia indirecta. Se detectaron infiltrados inflamatorios y antígenos con nidos de amastigotes en el músculo esquelético fetal. Células T CD4+ productoras de IFN-g así como depósitos de IFN-g e IL-10 fueron detectados en las secciones de placenta, corazón y músculo esquelético de fetos de ratones infectadas, mientras que células CD4+/IL-10+ se encontraron sólo en músculo esquelético, adicionalmente se detectaron depósitos de IL-4 sólo en placentas de ratones sanas. Estos resultados indican que el feto es capaz de generar una respuesta inmune propia frente a antígenos transmitidos por su madre, lo cual induce la secreción de citocinas que actuando en sinergia con los anticuerpos maternos le confieren un estado de protección contra la infección, y que la transmisión del parásito depende de factores específicos de cada madre, la cual puede modificar su capacidad de controlar tal transmisión ya sea a nivel placentario o sistémico

The objective of this study was to detect the cytokines IFN-g, IL-4 and IL-10 expressed by CD4+ T cells in tissues of fetal mice with acute chagasic infection. For this, we examined the fetuses of NMRI mice whose mothers were infected with 22×10³ metacyclic trypomastigotes of the M/HOM/BRA/53/Y strain of T. cruzi and made pregnant during the acute phase of infection. For the detection and localization of inflammatory infiltrates, nest parasites, antigens of T. cruzi and cytokines we used hematoxylin-eosin techniques, peroxidase-anti-peroxidase and immunofluorescence. The immunohistochemical study revealed the presence of inflammatory infiltrates and antigens with amastigote nests in fetal skeletal muscle. CD4 + T cells producing IFN-g, as well as deposits of IFN-g and IL-10, were detected in sections of placenta, heart and skeletal muscle of fetuses of mice infected, while CD4+/IL-10+ was found only in skeletal muscle; in addition, deposits of IL-4 were detected only in placentas of healthy mice. These results indicate that fetuses are capable of generating their own immune response to antigens transmitted by their mother, which induces the secretion of cytokines and that, acting in synergy with the maternal antibodies, confer them a state of protection against infection; and that the transmission of the parasite depends on factors specific to each mother, which may modify its ability to control such transmission at the placental or systemic levels

HPV infection associated with nonclassic cytological signs in patients from Mérida, Venezuela

El objetivo de esta investigación fue identificar aquellos signos citológicos no clásicos que permitan predecir la infección por virus papiloma humano (VPH) en este medio. Se revisaron los resultados citológicos de las pacientes que acudieron a consultas ginecológicas públicas y privadas, entre enero de 2006 y diciembre de 2008. Las muestras citológicas fueron informadas según los criterios establecidos por el Sistema Bethesda 2001 y se seleccionaron los informes con interpretación citológica de Lesión Intraepitelial Escamosa de bajo grado/VPH (LIEBG/VPH). De la hoja de solicitud de citología se tomaron los datos de edad y características citológicas. Se revisaron 25.565 resultados citológicos, de los cuales 291 eran LIEBG/VPH. La edad promedio de las pacientes fue de 32,01 años y el rango de edad varió entre 15 y 67 años. El 55,10% de las pacientes fueron menores de 30 años de edad. El coilocito fue el signo citológico viral más frecuente (66,1%). Entre los signos no clásicos asociados a la infección por VPH se observaron en orden de frecuencia: megalocariosis (44%), megalocitosis (38,5%), seguidos de la binucleación y cromatina granula fina ligeramente irregular, en igual proporción (33,7%) y las células de paraqueratosis (33,3%). La hipercromasia nuclear discreta y las células de hiperqueratosis fueron los criterios morfológicos menos frecuentes (28,5%). Los signos indirectos significativamente asociados a la infección fueron: binucleación, cromatina ligeramente irregular, hipercromasia nuclear discreta y células de paraqueratosis. La combinación de cambios morfológicos no clásicos asociadas a la infección por VPH permitiría la identificación de una elevada proporción de pacientes con esta infección, aumentando así la sensibilidad del estudio citológico en la detección del VPH y la posibilidad de seleccionar subgrupos de riesgo para el desarrollo de lesión cervical y su evaluación clínica oportuna

The purpose of this work was to identify those nonclassic cytological signs that would allow the prediction of human papillomavirus (HPV) infection. Cytology samples taken from outpatients that attended public and private gynecological practices, between January of 2006 and December of 2008, were studied. The cytological samples were informed following the criteria of the Bethesda system 2001. Those reports with a cytological interpretation of low-grade squamous intraepithelial lesion/HPV (LSIL/HPV) were selected. Age data and other cytologic characteristics were also taken. 25,565 Pap smears were revised, of which 291 were LSIL/HPV. The age average of the patients was 32.01 years and the age range was between 15 and 67 years. 55.10% of the patients were below 30 years of age. The koilocytosis was the most frequent viral cytological sign (66.1%). Among the HPV infection associated nonclassic cytologic signs were in order of frequency: nuclear enlargement (44%), megalocytosis (38.5%), followed by binucleation and lightly irregular chromatin distribution, in the same proportion (33.7%) and the typical parakeratotic cells (33.3%). Discreet nuclear hyperchromasia and hiperkeratotic cells were the less frequent morphological changes (28.5%). The indirect signs significantly associated to the infection were: binucleation, lightly irregular chromatin distribution, discreet nuclear hyperchromasia and parakeratotic cells. The combination of HPV infection associated with nonclassic cytological signs would allow the identification of a high proportion of patients with this infection, increasing in this way the sensibility of the cytological study in the detection of HPV and the possibility of selecting subgroups at risk for the development of cervical lesions and their opportune study

Synchronic hepatocellular carcinoma with atrial myxoma: A case report

Se presenta el caso de una mujer de 60 años que ingresó al Hospital General de México con diagnóstico de cirrosis hepática criptogénica y tumor hepático de estirpe no determinada, quien falleció por hemorragia digestiva alta secundaria a várices esofágicas. En la autopsia se encontró un hepatocarcinoma y un mixoma auricular izquierdo con elementos glandulares. Se hace una revisión de la literatura, buscando la asociación de estas dos neoplasias entre sí, y con otros tumores

The case of a 60-year-old woman with history of cryptogenic hepatic cirrhosis and a probable hepatic tumor, who died of upper gastrointestinal bleeding secondary to esophageal varices, is presented. An autopsy study was carried out, which showed a hepatocellular carcinoma and a left atrial cardiac myxoma with glandular elements. A review of the literature, searching for the association between these two tumors, in addition to other tumors, is presented

Immunology of pregnancy

Uno de los fenómenos que abre más interrogantes en la Inmunología es ¿Por qué el embrión, comportándose como un injerto semialogénico, no es rechazado por la madre? Se sabe que la madre produce una activa respuesta inmunológica frente al feto y sin embargo, en condiciones normales, el rechazo inmunológico no se produce. En el presente trabajo de revisión, se describen algunos mecanismos por medio de los cuales se genera la tolerancia inmunológica específica de la madre hacia el embrión. Todos estos mecanismos son interdependientes, y en conjunto constituyen una trama para evitar el rechazo fetal. Aquí se detalla la acción de las hormonas sexuales femeninas sobre el sistema inmunológico, el cambio del perfil de citoquinas, la generación de proteínas inmunomoduladoras y de anticuerpos bloqueantes, el efecto de la expresión de los HLA-G y el papel de algunas células inmunocompetentes como los linfocitos T reguladores, las células dendríticas y las células asesinas naturales o Natural Killer. Asimismo se detallan otras vías por las cuales el embrión se defiende del ataque inmunológico materno como la inducción de la apoptosis en el endometrio y en los leucocitos, el metabolismo de hierro y triptofano, la inhibición del sistema del complemento y la expresión de anexinas

One of the phenomena that offers more questions in Immunology is: Why the embryo, behaving like a semialogenic graft, is not rejected by the mother? It is known that the mother produces an active immunological response against the fetus and, nevertheless, in normal conditions, the immunological rejection does not take place. In the present work of revision, some mechanisms are described by means of which the specific immunological tolerance of the mother is generated towards the embryo. All these mechanisms are interdependent and altogether they constitute a safety network to avoid the fetal rejection. Here the effects of female sex hormones on the immunological system, the change of the profile of cytokines, the generation of immunomodulating proteins and blocking antibodies, the effect of the expression of the HLA-G and the paper of some cells, like Regulatory T lymphocytes, dendritic and Natural Killer cells, are detailed. Also other routes by which the embryo defends itself of the maternal immunological attack are described, like the induction of apoptosis in the endometrium and leukocytes, the tryptophan and iron metabolisms, the inhibition of the complement system and the expression of annexins

Attention-deficit / hyperactivity disorder in autism spectrum disorders

De acuerdo al DSM-IV-TR los síntomas de falta de atención e hiperactividad son frecuentes entre los individuos con Trastornos del Espectro Autista (TEA). Estas aseveraciones están reflejadas en a observación clínica y la valoración formal. Sin embargo, el diagnóstico de TEA aún continúa dentro de los criterios de exclusión para el Trastorno por Déficit de Atención-Hiperactividad (TDAH). Dicha exclusión ha ocasionado controversia e interrogantes con respecto a la necesidad y el beneficio de mantener o no estas separaciones; tanto así, que los criterios propuestos para el DSM-V eliminan dicho criterio de exclusión. Es necesaria una clara comprensión de la comorbilidad entre ambas entidades para realizar una secuencia óptima y apropiada de los objetivos de la intervención. Es por esto, que si se considera la falta de atención e hiperactividad en individuos con un diagnóstico asociado de TEA como una representación de un diagnóstico comórbido de TDAH, los planes de tratamiento serán más apropiados y con mayor impacto en su funcionamiento adaptativo

According to the DSM-IV-TR, symptoms of inattention and hyperactivity are frequent in children with Autism Spectrum Disorders (ASD). This statement is supported by clinical observation and formal assessment. However, ASD diagnosis is still among the exclusion criteria for the Attention-Deficit/Hyperactivity Disorder (ADHD). Such exclusion generates controversy and questions regarding the need and benefits of maintening or not these separations; so much so, that the proposed criteria for the DSM-V eliminate that exclusion condition. It is necessary a better understanding of the comorbidity between both entities in order to be able to have an appropriate sequence of the intervention goals. For that reason, if inattention and hyperactivity in individuals with ASD are considered as a representation of a comorbid diagnosis of ADHD, treatment plans for this group would be better adjusted and more likely to offer a real benefit in the outcome of their adaptive functioning