Aislamiento e identificación de especies del género Malassezia en piel sana de niños desnutridos y eutróficos de multihogares de cuidado diario. 

Evelyn González-Morán¹, Sofía Rodríguez-Valero^1, María L Del Monte¹, Marlin Briceño¹, Skarleth Sintjago¹, Luz Mila Mesa¹, Doris García², Rafael Villalobos³ y Nayda Pereira⁴.

¹Laboratorio de Micología, Escuela de Bioanálisis, Maracaibo, Venezuela.

²Laboratorio de Investigación y Desarrollo en Nutrición, Escuela de Nutrición y Dietética, Maracaibo, Venezuela.

³Cátedra de Medicina Tropical, Escuela de Medicina, Maracaibo, Venezuela.

⁴Cátedra de Inmunología, Escuela de Bioanálisis. Facultad de Medicina, Universidad del Zulia. Maracaibo, Venezuela.

Autor de correspondencia: Luz Mila Mesa. Cátedra de Micología, Escuela de Bioanálisis, Facultad de Medicina, Universidad del Zulia. Maracaibo, Venezuela. Correo electrónico: luzmila.mesa@gmail.com 

Resumen. El género Malassezia comprende un grupo de levaduras lipofílicas, integrantes de la microbiota normal de la piel del hombre y de animales. Se estudió la presencia de especies de Malassezia en piel sana de niños, que asistían a multihogares de cuidado diario de la ciudad de Maracaibo, estado Zulia, Venezuela. La evaluación antropométrica permitió el diagnóstico de niños desnutridos (n = 48) y eutróficos (n = 40). Estos niños, entre 1 y 6 años de edad, que no presentaban lesiones en la piel, se seleccionaron para el estudio. Las muestras de la piel se tomaron de distintas regiones anatómicas. Se empleó el método de la impronta con cinta plástica transparente. Se realizó un examen directo con azul de metileno (0,25%) y se cultivó en el medio Dixon con antibiótico. La identificación de los aislados se hizo según la metodología clásica. Los resultados indican que los niños desnutridos y eutróficos presentaron una colonización por Malassezia en un elevado porcentaje (66,6% y 65,0%, respectivamente). Se observó en los desnutridos un predominio significativo de M. furfur (77,0%). Esta especie se aisló en todas las localizaciones, tanto en los desnutridos como en los eutróficos, mientras que M. slooffiae predominó en la espalda en los eutróficos. Por otra parte, se observó en los desnutridos un predominio significativo de M. furfur en el sexo masculino y en los eutróficos en el femenino. Esta investigación demostró el predominio de M. furfur en piel sana de niños desnutridos y eutróficos.

Palabras clave:  Malassezia, aislamiento e identificación, desnutridos, eutróficos, niños

Isolation and identification of Malassezia species isolated of healthy skin of malnourished and eutrophic children attended in day care centers in Venezuela.

Abstract. The Malassezia genus contains a group of lipophilic yeasts that form part of the normal microbiota of human and animals skins. The presence of Malassezia species was studied on healthy skin in children, who attended day care centers, located in Maracaibo, Zulia state, Venezuela. Children without skin lesions that were anthropometrically classified as malnourished (48) and eutrophics (40), were studied. Samples were taken from different anatomic regions with a transparent plastic tape. The direct examination was done using blue methylene (0.25%) and then, samples were cultivated in Dixon medium with antibiotic. The identification of the isolated yeasts was done by classical methodology. The results obtained indicate that malnourished and eutrophics children were positive to Malassezia in relatively high prevalences (66.6% and 65.0% respectively). It is worthy of notice that M. furfur was predominantly present in malnourished children (77%). It was isolated from all the anatomic locations in both groups of children. M. slooffiae was mainly located in the back of the eutrophic children. M. furfur was isolated preferently in malnourished male children, while in the eutrophic children, it was observed in females. It was demonstrated that M. furfur was predominantly present in the healthy skin of malnourished and eutrophic children.

Key words: Malassezia, isolation and identification, bad nutrition, eutrophics, children 

Recibido: 16-11-2007. Aceptado: 02-08-2008.

INTRODUCCIÓN 

La colonización de la piel sana por especies de Malassezia comienza durante las primeras semanas de vida, alcanzado niveles del 30% al cabo de un mes (1). En niños menores de 10 años esta colonización es baja, pero durante la edad prepuberal y puberal, la colonización es mayor, debido al aumento de actividad de las glándulas sebáceas. Se ha sugerido un descenso en la colonización por estas levaduras a medida que se incrementa la edad; sin embargo, Gupta y col. (2), observaron el mayor número de aislamientos en el grupo de edad mayor de 60 años. 

Se estima que Malassezia spp puede aislarse del 90% de la piel de individuos sanos; la colonización de estas levaduras parece estar influenciada por factores raciales, sexuales y cambios estacionales, siendo más aislada en épocas cálidas y húmedas. Es posible que factores climáticos juegan un papel importante en las especies de Malassezia presentes en la piel sana, por ejemplo: M. sympodialis es más común en climas fríos y M. globosa en climas cálidos con localización tropical (2).

En individuos sanos, las especies de Malassezia varían de acuerdo a la región corporal. Del tronco se ha aislado M. sympodialis, M. furfur y M. slooffiae, en el cuero cabelludo además de las especies mencionadas también se ha aislado M. restricta (2, 3), en conducto auditivo externo M. restricta, M. globosa y M. sympodialis, evidenciándose una alta diversidad de especies en individuos sanos (4). La prevalencia de las especies de Malassezia también parece estar relacionada con la edad. Se ha señalado que M. furfur y M. globosa son especies frecuentemente aisladas en niños y adolescentes, mientras que M. sympodialis es la más común en adultos sanos (2).

Las especies de Malassezia, a excepción de M. pachydermatis, son lípido-dependiente por lo cual requieren de ácidos grasos de cadenas largas para el crecimiento. La presencia de determinados tipos de ácidos grasos libres y triglicéridos en la piel del hombre promueve el desarrollo de Malassezia (5). La utilización de esos lípidos hace que la presencia de estas levaduras sea mayor en aquellas zonas con abundancia de glándulas sebáceas como espalda, pecho y cuero cabelludo. La dependencia de Malassezia a una fuente externa de ácidos grasos se atribuye a la incapacidad de sintetizar ácidos grasos saturados entre 12 y 14 átomos de carbono de longitud como el ácido mirístico. Estos ácidos grasos son indispensables para la formación de estructuras morfológicas de estas levaduras (6).

En niños desnutridos la carencia de ácidos grasos en la piel ocasiona una piel seca, escamosa, delgada e inelástica semejante a la piel de los ancianos, por lo cual es importante realizar estudios que permitan establecer la prevalencia de las especies de Malassezia en la piel de niños desnutridos.

El propósito de este trabajo fue la caracterización morfológica y fisiológica de las especies de Malassezia aisladas en la piel sana de niños desnutridos y eutróficos, asistentes a hogares de cuidado diario de dos parroquias de la ciudad de Maracaibo, estado Zulia, Venezuela.

MATERIALES Y MÉTODOS 

Se realizó un estudio analítico, transversal, no experimental, en el cual se seleccionaron, de acuerdo a criterios de inclusión clínicos y antropométricos, 88 niños de ambos sexos y condiciones socioeconómicas comparables, pertenecientes a familias de bajos ingresos (estrato IV y V) según método de Graffar modificado. Dichos niños asistían a diferentes hogares de cuidado diario, centros de atención integral en nutrición, salud, cuidado y socialización para hijos de madres trabajadoras, financiado por el Gobierno Regional.

Población

Estuvo conformada por 88 niños, 56 del sexo masculino y 32 del femenino, sin lesiones en la piel, con edades comprendidas entre 1 a 6 años, de los multihogares de la parroquias Antonio Borjas Romero y Venancio Pulgar de la ciudad de Maracaibo, estado Zulia, Venezuela, a quienes se les realizó una evaluación antropométrica, la cual permitió diagnosticar a 48 niños desnutridos y 40 eutróficos. 

Evaluación antropométrica 

Se llevó a cabo utilizando las variables edad, sexo, talla y peso, las cuales al ser relacionadas entre sí permitieron obtener los indicadores corporales tradicionales: peso para la talla (P/T) y talla para la edad (T/E). Para la estimación del déficit nutricional se analizaron los resultados de talla por edad (desnutrición crónica) y peso por talla (desnutrición aguda) expresadas por Score Z (<–2 para niños desnutridos y >–2 para los eutróficos) (7). Se realizó la evaluación clínica con el objetivo de excluir aquellos que pudieran presentar lesiones de piel. Previo consentimiento de los padres y de la Coordinación de los hogares de cuidado diario, bajo los lineamientos establecidos en el tratado de Vancouver, se procedió a la obtención de las muestras.

Recolección y procesamiento de las muestras

Las muestras de la piel de los niños, se tomaron de cuero cabelludo, pabellón auricular, pecho y espalda. Se utilizó el método de la impronta con cinta plástica transparente. De cada región anatómica se obtuvo dos muestras, una se extendió sobre una lámina portaobjeto con unas gotas de azul de metileno al 0,25% y se observó al microscopio con la finalidad de apreciar las estructuras morfológicas características de Malassezia (blastoconidias, de forma y tamaño variable).

Para el cultivo, las muestras se colocaron en placas de petri con el medio Dixon Agar con cloranfenicol e incubaron a 32°C por 14 días. Las colonias compatibles con Malassezia spp se subcultivaron en Dixon Agar con cloranfenicol para identificar las diferentes especies.

Identificación de los aislados 

Se realizó siguiendo la metodología para la identificación de especies descritas por Gueho y col. (8), el test de difusión en tween propuesto por Guillot y col. (9) y la prueba de la catalasa.

El estudio macro y micro morfológico se realizó con base en la consistencia, aspecto, color de las colonias y la forma y tamaño de las blastoconidias.

Para el test de difusión en tween, se utilizó una placa de petri con el medio Sabouraud Dextrosa Agar previamente licuado en el cual se colocó una suspensión de la colonia a identificar. Luego que se solidificó se hicieron orificios de 3 mm, con un sacabocado y se colocó con la ayuda de una micropipeta automática, 5 µL de los tween 20, 40, 60 y 80. Se incubó en estufa a 32°C por 7 días. Se leyó como positiva la formación de un halo de opacidad alrededor de los diferentes tween. La prueba de la catalasa se realizó mediante la técnica tradicional.

Análisis estadístico

Los resultados se presentaron como frecuencias absolutas y relativas. Para identificar las diferencias estadísticas en las variables estudiadas se practicaron el análisis porcentual y la prueba del Chi cuadrado. Se tomó el 95% como índice de confiabilidad estadística (p < 0,05). 

RESULTADOS 

De un total de 88 niños estudiados, 58 (65,9%) fueron positivos a Malassezia. De los 48 niños desnutridos, 32 fueron positivos con un 66,6% y de los 40 eutróficos, 26, con un 65,0%.

La Tabla I muestra la distribución de la colonización del sitio anatómico de acuerdo a la condición nutricional. Tanto en los desnutridos como en los eutróficos predominaron dos o más sitios de colonización, con un 65,6% y 77%, respectivamente.

La Tabla II presenta la distribución de los aislados de las especies de Malassezia según los grupos estudiados. M. furfur presentó un predominio tanto en los desnutridos (77,0%) como en los eutróficos (65,0%), mientras que M. slooffiae se presentó en un mayor porcentaje (16,7%) en los eutróficos que en los desnutridos (5,4%). Solo se observó un aislado de M.globosa, en los eutróficos.

La Tabla III muestra la distribución de los aislados de Malassezia según el sexo y la condición nutricional. M. furfur predominó en el sexo masculino en los desnutridos (49,0%) y en el femenino en los eutróficos (21,8%). M. slooffiae también se observó con mayor frecuencia en el sexo masculino en los desnutridos (14,3%) y en el femenino en los eutróficos (21,4%). El único aislado de M. globosa se presentó en una niña eutrófica.

La Tabla IV presenta los aislados de las especies de Malassezia distribuidos según la condición nutricional y la localización anatómica de la colonización. En los desnutridos M. furfur se aisló en todas las localizaciones en un porcentaje mayor que en los eutróficos. M. slooffiae predominó (12,5%) en la espalda, en los eutróficos.

CC: Cuero cabelludo. PA: Pabellón auricular. PE: Pecho. ESP: Espalda. D: Desnutridos. E: Eutróficos.

* p < 0,01. El análisis porcentual corresponde a los totales expresados en la última fila.

DISCUSIÓN 

En esta investigación se estudiaron 48 niños desnutridos y 40 eutróficos, de los cuales 32 (66,6%) y 26 (65,0%) respectivamente, fueron positivos para Malassezia, coincidiendo con los resultados obtenidos por Bergbrant y Broberg (10) quienes reportan un alto porcentaje de Malassezia (87%) en la piel de niños sanos y difieren de Gupta y col. (2) quienes señalan un 36,3% de positividad en individuos entre 0 a 14 años de edad, con una cantidad de aislamiento baja al compararla con otros grupos de edad. En esta investigación no hubo diferencia significativa entre la presencia o ausencia de Malassezia entre desnutridos y eutróficos; sin embargo, 58 (65,9%) de los niños estaban colonizados. La malnutrición proteica energética, es causa de inmunodeficiencia en los niños desnutridos, lo cual conlleva a una alta prevalencia de infecciones bacterianas, parasitarias y micóticas (11). 

Al evaluar la prevalencia de Malassezia en los niños, se observó que M. furfur fue la especie con mayor número de aislamientos (71,6%), predominando en los niños desnutridos, seguida de M. slooffiae (10,4%); en el 17,2% de los casos no se logró identificar la especie. Estos resultados son similares a los reportados en otras investigaciones (2, 12-14), donde M. furfur fue la especie más frecuente. Sin embargo difieren de los obtenidos por Hernández y col. (4), en México, donde M. restricta fue la más frecuente (47,6%), seguida de M. globosa (23,8%) en piel sana; Crespo y col. (3), en España aislaron a M. sympodialis con un 91.7% y M. restricta con un 63,9%. Se ha señalado que los factores climatológicos podrían tener un papel importante en la especie de Malassezia presente en la piel sana; en este sentido, se ha observado que M. sympodialis es más frecuente en climas subtropicales mientras que M. furfur y M. globosa en climas tropicales (2). 

Al relacionar la prevalencia de las especies de Malassezia según el sexo de la población estudiada, se observó que M. furfur predominó significativamente en el sexo masculino (p = 0,014) en los desnutridos y en el sexo femenino en los eutróficos (p = 0,048). Resultados similares en relación al sexo masculino y femenino han sido reportados (13). En contraste, otro estudio (12) observó que no existía diferencia significativa entre el sexo masculino y el femenino, en la colonización de la piel sana por especies del género Malassezia. 

En la distribución de las especies de Malassezia aisladas de las diferentes áreas del cuerpo no hubo diferencia significativa. Sin embargo, se observó un leve predominio de M. furfur en espalda. Resultados que coinciden con los reportados por Gupta y col. (2), quienes señalan a la espalda como el sitio anatómico más frecuente para M. furfur y M. globosa. La presencia de las diferentes especies de Malassezia parece estar influenciada por cambios estaciónales, en este sentido la mayoría de los aislamientos aparecen en épocas cálidas y húmedas (15). Se ha reportado a M. globosa como agente predominante en pitiriasis versicolor en zonas de clima templado (16). En la superficie de la piel existen una amplia gama de sustancias liposolubles, las cuales se eliminan por el sudor y las elevadas temperaturas y la humedad incrementan el material sebáceo excretado, aproximadamente 3 veces más de la cantidad normal (12, 17), lo cual hace que la colonización de estas levaduras sea mayor. El clima cálido y húmedo en la región zuliana, además de la ausencia de sistemas de climatización en las habitaciones donde se encontraban los niños estudiados, podría haber influido en la colonización por Malassezia. 

Los resultados obtenidos en este estudio demuestran un predominio de M. furfur en la piel sana de los niños desnutridos y eutróficos evaluados. El análisis discriminante confirmó que la única variable relacionada con el estado nutricional es la especie de Malassezia aislada. Es necesario continuar realizando investigaciones en piel sana y enferma de otros grupos de individuos que permitan establecer cuales son las especies de Malassezia predominantes en un clima tropical como el de Venezuela y evaluar el potencial patógeno de las mismas. 

AGRADECIMIENTO 

Al Consejo de Desarrollo Científico y Humanístico de La Universidad del Zulia (CONDES) por el soporte financiero de la investigación. 

REFERENCIAS 

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