Protozoarios en aguas superficiales y muestras fecales de individuos de poblaciones rurales del municipio Montes, estado Sucre, Venezuela. 

Leonor Mora, Indira Martínez, Lourdes Figuera, Merlyn Segura y Guilarte Del Valle. 

Laboratorio de Especialidades Parasitológicas, Departamento de Bioanálisis, Universidad de Oriente. Núcleo de Sucre, Cumaná, Venezuela. 

Autor de correspondencia: Marcos De Donato. Laboratorio de Genética Molecular, Instituto de Investigaciones en Biomedicina y Ciencias Aplicadas “Dra. Susan Tai”, Universidad de Oriente, Núcleo de Sucre. Cumaná 6101, Venezuela. Teléfono: 0293-4175285.  Correo electrónico: marcosdedonato@yahoo.com 

Resumen.

En el estado Sucre, el Río Manzanares se ve amenazado por actividades domésticas, agrícolas e industriales originadas por el hombre, convirtiéndose en factor de riesgo ambiental para sus habitantes. En este sentido se planteó evaluar la presencia de protozoarios en aguas superficiales de afluentes del Río Manzanares (Río Orinoco, Quebrada Seca, Río San Juan), municipio Montes, estado Sucre, Venezuela, así como también el análisis de muestras fecales de los habitantes de poblados aledaños. Se recolectaron muestras de aguas superficiales de los afluentes en estudio y fecales entre mayo 2006-abril 2007. Las muestras de aguas superficiales se procesaron con sedimentación por centrifugación, floculación y tinciones de Kinyoun y tricrómica; las muestras fecales se sometieron a examen directo con solución salina fisiológica y lugol, Ritchie modificado y las coloraciones antes mencionadas. Los protozoarios observados con mayor frecuencia en las aguas superficiales en los afluentes fueron: Amebas, Blastocystis sp., Endolimax sp., Chilomastix sp. y Giardia sp. Mientras que Blastocystis hominis, Endolimax nana y Entaomeba coli fueron los de mayor frecuencia observada en las muestras fecales. Los habitantes de Orinoco La Peña resultaron ser los más afectados por las infecciones parasitarias (77,60%), seguido de Río San Juan con 46,63%, y Quebrada Seca con 39,49%. La presencia de protozoarios patógenos y no patógenos en las aguas superficiales demuestra la contaminación fecal de los afluentes evaluados, por lo que representa un foco de infección permanente para los individuos que viven en las cercanías de estas aguas, esto se refleja por la observación de los mismos parásitos en ambas muestras. 

Palabras clave: Blastocystis hominis, protozoarios, afluentes, contaminación ambiental. 

Protozoans in superficial waters and faecal samples of individuals of rural populations of the Montes municipality, Sucre state, Venezuela.

Abstract. 

In Sucre state, the Manzanares river is threatened by domestic, agricultural and industrial activities, becoming an environmental risk factor for its inhabitants. In this sense, the presence of protozoans in superficial waters of tributaries of the Manzanares river (Orinoco river, Quebrada Seca, San Juan river), Montes municipality, Sucre state, as well as the analysis of faecal samples from inhabitants of towns bordering these tributaries were evaluated. We collected faecal and water samples from may 2006 through april 2007. The superficial water samples were processed after centrifugation by the direct examination and floculation, using lugol, modified Kinyoun and trichromic colorations. Fecal samples where analyzed by direct examination with physiological saline solution and the modified Ritchie concentration method and using the other colorations techniques above mentioned. The most frequently observed protozoans in superficial waters in the three tributaries were: Amoebas, Blastocystis sp, Endolimax sp., Chilomastix sp. and Giardia sp. Whereas in faecal samples, Blastocystis hominis, Endolimax nana and Entaomeba coli had the greatest frequencies in the three communities. The inhabitants of Orinoco La Peña turned out to be most susceptible to these parasitic infections (77.60%), followed by San Juan River (46.63%) and Quebrada Seca (39.49%). The presence of pathogenic and nonpathogenic protozoans in superficial waters demonstrates the faecal contamination of the tributaries, representing a constant focus of infection for their inhabitants, inferred by the observation of the same species in both types of samples. 

Key words: Blastocystis hominis, protozoans, affluents, environmental contamination. 

Recibido: 19-06-09. Aceptado: 15-04-10.

INTRODUCCIÓN 

La transmisión ambiental de microorganismos patógenos constituye un medio altamente efectivo para la diseminación de enfermedades a una proporción de la población, al respecto la Organización Mundial de la Salud estima que el 24% de las enfermedades que ocurren en el mundo están asociadas con factores ambientales, entre ellos la calidad del agua y las precarias condiciones higiénicas (1). Los parásitos protozoarios se caracterizan por permanecer en el ambiente por largos períodos bajo condiciones adversas. Sus formas infectivas son resistentes a la mayoría de procesos de desinfección química y tratamientos convencionales aplicados en aguas. Además se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza y tienen predilección por sitios húmedos con temperaturas que oscilan entre 20°C y 40°C, debido a esto son fácilmente recuperados en aguas (2). 

Los humanos pueden ser infectados por varios tipos de protozoarios intestinales que incluyen amibas, flagelados, coccidios y ciliados, tales como: Entamoeba coli, Endolimax nana, Entamoeba hartmanni, Iodamoeba butschlii, Dientamoeba fragilis y Pentatrichomonas hominis, los cuales son reconocidos como comensales, mientras que Entamoeba histolytica, Giardia intestinalis, Blastocystis hominis, Cryptosporidium sp. y Balantidium coli son considerados patógenos (3). 

La principal vía de transmisión de éstos protozoarios es la fecal-oral, a través de la ingesta de aguas contaminadas por heces tanto humanas como de animales, así como también, por el consumo de alimentos regados con agua sin tratar (3, 4). 

En países latinoamericanos el tratamiento y la reutilización de aguas residuales pueden representar un serio riesgo de salud pública, debido a los altos contenidos de microorganismos patógenos presentes (5). 

En Venezuela se han reportado en aguas recreacionales un importante porcentaje de amibas de vida libre como: Acanthamoeba, Naegleria flowleri, además de otros parásitos como B. hominis, Isospora belli y G. intestinalis (3). 

En el estado Sucre, Venezuela el río Manzanares ha sido objeto de diversos estudios (6-11), sin embargo la presente investigación constituye el primer trabajo orientado a la búsqueda de protozoarios de importancia médica para el hombre. 

MATERIALES Y MÉTODOS 

Área de estudio 

La presente investigación se llevó a cabo en el Río Manzanares en las adyacencias de los poblados Orinoco La Peña, Quebrada Seca y Río San Juan. 

El río Manzanares está ubicado en el estado Sucre, su vertiente está situada a 2300 metros sobre el nivel del mar, en el macizo Turimiquire, desembocando en la entrada del Golfo de Cariaco, ejerciendo una gran influencia predominante hacia el lado oeste de la costa del golfo, cercano a la ciudad de Cumaná, la cual se encuentra ubicada entre 10° 24’ de latitud norte y 64° 10’ de longitud oeste y 10° 30’ de latitud norte y 64° 20’ de longitud oeste, posee un clima tropical modificado por la altura, debido a este factor posee un piso cálido hasta 800 metros de altitud. Las temperaturas varían entre 22,5°C y 25,3°C dependiendo del mes, presenta un clima de sub-húmedo a húmedo. Los poblados adyacentes se caracterizan por ser pequeños, con viviendas tipo rural y poca cantidad de habitantes, por lo que la intervención antrópica es reducida. La actividad predominante es la agricultura (9).

Características de las zonas de muestreo 

Quebrada de Orinoco: perteneciente a la cuenca alta del Río Manzanares, está limitada al norte con el cerro El Yaque y el caserío San Salvador, al sur con los caseríos La Peña y Boquerón, al este con el caserío La Fragua y al oeste con los Dos Ríos y el caserío Maural. En esta zona predomina la vegetación con arbustos y árboles de gran tamaño, la quebrada atraviesa la población de Orinoco, presenta poco caudal con aguas claras, olores desagradables, el fondo es arenoso y se observa abundantes escombros, así como animales domésticos en el cauce de la misma (12). 

Quebrada Seca: ubicada en la cuenca media y delimita al norte con el caserío Guarumo, al sur con el poblado San Fernando, al este con el poblado El Caro y al oeste con el poblado Puerto Escondido. Las aguas son bastante turbias, de coloración marrón. Se encuentran en las cercanías de la población Quebrada Seca y en épocas de lluvia principalmente reciben aportes de un pequeño curso de agua que lleva el mismo nombre de la población. En este sector existe un puente sobre el río, ya que el mismo atraviesa la carretera. La vegetación es boscosa y se observan extensiones de terreno dedicados al cultivo de caña de azúcar (12). 

Río San Juan: perteneciente a la cuenca media, es otro de los afluentes del Río Manzanares. Se caracteriza por presentar aguas tranquilas y transparentes, corrientes suaves, fondo arenoso pedregoso, en algunas zonas con rocas grandes cubiertas en su mayoría por un limo de color marrón, con predominio de vegetación boscosa (12).

Recolección y análisis de muestras de aguas superficiales 

Se realizaron ocho salidas de campo, una cada seis semanas, para la recolecta por duplicado de las muestras en diferentes puntos de la orilla hasta completar 75 muestras de aguas superficiales, durante el período mayo 2006-abril 2007. En cada zona de muestreo se recolectaron 25 muestras de agua en total, cada una de 5 litros, tomadas a 20 cm por debajo de la superficie del agua a contracorriente y a 2 m desde la orilla; las muestras fueron colectadas en envases plásticos transparentes, limpios y con tapa de rosca, previamente rotulados con: hora, fecha y nombre de la zona de muestreo y trasladadas a temperatura ambiente al laboratorio de Especialidades Parasitológicas, Departamento de Bioanálisis, UDO- Sucre, para su posterior procesamiento (13). 

Las muestras de aguas se dejaron reposar durante un período de 48 horas. Se descartaron 4800 mL, el sedimento (200 mL) se agitó y se transfirió en alícuotas en tubos plásticos de 15 mL. Se realizaron procedimientos de sedimentación por centrifugación, floculación y tinciones, por triplicado, como se describe a continuación. Primeramente, las alícuotas de agua se centrifugaron a 1006 g durante 5 minutos, se descartó el sobrenadante con pipeta Pasteur, se tomó una gota del sedimento y se colocó una en cada extremo de una lámina portaobjeto. Luego, se colocó una gota de Lugol sobre una de las gotas de sedimento y se cubrió la preparación con laminilla, se observó al microscopio con objetivos de 10X y 40X para la búsqueda de las formas evolutivas de los parásitos (13). 

En segundo lugar, se tomó una alícuota de agua superficial y se mezcló en partes iguales con solución salina fisiológica. Se filtró la preparación a través de gasa. Se agitó enérgicamente y luego se dejó en reposo de 30 a 45 minutos. Se descartó el sobrenadante y el sedimento se colocó en lámina portaobjeto para ser observado con objetivos de 10 y 40X (14). 

En tercer lugar, una porción de 25 mL de cada muestra de agua superficial, fue sometida a un proceso de floculación mediante la adición de 50 mL de cloruro de calcio 1 mol/L y 50 mL de bicarbonato de sodio 1 mol/L. Luego se agitó vigorosamente y se ajusto a pH 10 con NaOH 2 mol/L, aquellas muestras con pH mayor de 10, no fue necesario modificarlo con ácido. Posteriormente se dejaron sedimentar por 24 horas, se retiró el sobrenadante y se recuperó en tubos de centrífuga con capacidad de 15 mL. El sedimento se centrifugó a 3000 g por 10 minutos, se realizaron lavados con PBS hasta obtener un pH final de 7,4. Las preparaciones se almacenaron en nevera a 4°C hasta su montaje y observación microscópica (15). 

Finalmente, una gota de cada preparación fue colocada en dos láminas portaobjetos y se dejó secar a temperatura ambiente. Luego fueron teñidas con las coloraciones de Kinyoun y Tricrómica: utilizadas para teñir los ooquistes de Cryptosporidium sp., Isospora belli o Cyclospora cayetanensis y para la tinción de la morfología nuclear de protozoarios intestinales, respectivamente (3, 16). 

Recolección y análisis de muestras fecales 

Se realizaron visitas casa por casa explicando los objetivos del estudio; previo consentimiento del representante de la familia se aplicó una encuesta, la cual permitió obtener información epidemiológica de las familias, cumpliendo con los parámetros establecidos en la declaración de Helsinki del año 2000 (17). 

Se entregaron los colectores de heces a cada una de las familias, dándole una previa explicación para la recolección de la muestra. Una vez obtenidas se llevaron al Laboratorio de Especialidades Parasitológicas del Departamento de Bioanálisis de la Universidad de Oriente, para su procesamiento. A cada una de las muestras fecales se les realizó el examen coproparasitológico directo con solución salina fisiológica al 0,85% y lugol y el método de Ritchie modificado (3, 18). A las muestras de heces se les realizó las coloraciones aplicadas a las muestras de aguas superficiales. 

Análisis estadístico 

Se utilizaron tablas de prevalencia para presentar los porcentajes (%) de aparición de los géneros y especies parasitarias (19). 

RESULTADOS 

Al evaluar las muestras de aguas superficiales correspondientes a los tres afluentes Río Orinoco, Quebrada Seca y Río San Juan, se logró evidenciar la presencia de diferentes géneros de protozoarios tanto patógenos como no patógenos, observándose variación en cuanto a su prevalencia, como se observa en la Tabla I. Es de señalar que la mayoría de las especies de protozoarios se encontró en los tres afluentes en estudio, con excepción de las muestras analizadas en Quebrada Seca donde no se observó la presencia Isospora sp, Balantidium sp. e Iodamoeba sp. 

TABLA I. PROTOZOARIOS EN AGUAS SUPERFICIALES DE AFLUENTES DEL RÍO MANZANARES,
MUNICIPIO MONTES, ESTADO SUCRE, VENEZUELA 

Adicionalmente a los protozoarios se observaron helmintos como Trichuris sp., ancylostomídeos, Hymenolepis sp., además de otros microorganismos como Paramecium sp. 

En cuanto al análisis de las 426 muestras fecales, se encontró una prevalencia global de parásitos de 50,94%. Además, se apreció que la mayoría de los individuos de los poblados estudiados se encontró parasitado por al menos una especie parasitaria, siendo los de Orinoco La Peña los más afectados con 77,60%, segundo los de Río San Juan 46,63% y de último, los de Quebrada Seca con 39,49% (Tabla II).

TABLA II. HABITANTES PARASITADOS Y NO PARASITADOS PROVENIENTES DE LOS POBLADOS ORINOCO LA PEÑA, QUEBRADA SECA Y RÍO SAN JUAN. MUNICIPIO MONTES, ESTADO SUCRE, VENEZUELA