El objetivo del presente estudio fue el de detectar los tipos de VPH en muestras de tejido laríngeo de 15 pacientes entre 3 y 20 años de edad con diagnóstico clínico e histopatológico de papilomatosis laríngea juvenil (PLJ), por medio de la prueba de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), con mezcla de ADN genómicos de VPH 6, 11, 16, 18, 31, 33 y 35, en el Servicio de Otorrinolaringología del Hospital Universitario de Caracas, período 1994-1999. En el 53% de las muestras procesadas se determinaron serotipos de VPH, 4 del tipo VPH 6 y 4 del tipo VPH 11, coincidiendo estos datos con lo descrito en la literatura mundial. En el resto de muestras (47%) la determinación del VPH fue negativa. No se detectó ninguno de los otros serotipos investigados ni se evidenció coinfección viral.

Palabras Claves: Papilomatosis laríngea juvenil, Virus Papiloma Humano (VPH), Reacción en Cadena de Polimerasa (PCR).

The objective of this study was to determine the HPV types from tissue samples from fifteen (15) patients aged between 3 and 20 years, who had been clinically and histopathologicaly diagnosed as juvenile laryngeal papillomatosis, by means of the Polymerase Chain Reaction (PCR) test, using a compound of the genomic DNA of HPV types 6, 11, 16, 18, 31, 33 and 35, in the Otoralyngology Department of the University Hospital of Caracas, during the interval 1994-1999. In 53% of the specimen processed were positive, four (4) for HPV type 6 and four (4) for HPV type 11. These results are similar to the findings of international publications. In the remaining samples (47%) were negative for HPV. Furthermore, no other serological types investigated were found, or viral coinfection was detected.

Key Words: Juvenile laryngeal papillomatosis, Polymerase Chain Reaction, HPV.

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La papilomatosis laríngea juvenil (PLJ) es una enfermedad infecciosa de la mucosa laríngea causada por el virus del papiloma humano (VPH) que pertenece a la familia papovaviridae constituida por un grupo de virus ADN epiteliotrópicos con gran afinidad por órganos tubulares en contacto con el exterior tales como fosas nasales, cavidad oral, faringe, laringe, tráquea, bronquios, esófago, vagina, etc^(1,2,3). Debido a su elevado potencial de recurrencia, localización múltiple especialmente en laringe y conocimiento incompleto del mecanismo patogénico, el índice de prevalencia de la enfermedad se mantiene elevado y a través del tiempo se ha convertido en un verdadero problema terapéutico^(4,5).

Su mayor incidencia en las dos primeras décadas de la vida la colocan como la lesión tumoral benigna de laringe más frecuente de la infancia. En Estados Unidos, la incidencia infantil es de 4,3 por 100.000 niños con una frecuencia mayor entre los 2 y 4 años^(6,7,8). El mecanismo de transmisión de la PLJ aunque todavía no se ha determinado en forma exacta, la mayoría de los autores están de acuerdo en que una de las formas más frecuente es debida a la ingestión de partículas virales o de células infectadas durante el paso del niño a través del canal del parto en el momento del nacimiento, de una madre con condilomatosis genital^(9,10).

El diagnóstico de la enfermedad es determinado por la clínica caracterizada principalmente por disfonía, estridor, disnea progresiva y la presencia de papilomas en estructuras de la vía aérea-digestiva, que al crecer obstruyen la vía aérea (Fig. 1) provocando la aparición de insuficiencia respiratoria que muchas veces compromete la vida del paciente. El examen laringoendoscópico, la biopsia de las lesiones y su estudio histopatológico determinado por la presencia de coilocitos, hiperplasia epitelial e hiperqueratosis (Fig. 2) confirman el diagnóstico de infección por virus del papiloma humano (VPH). La microscopia electrónica ha permitido visualizar las partículas o inclusiones virales dentro del núcleo como se puede ver en la Fig. 3, lo cual confirma aún más el diagnóstico⁽¹¹⁾.

El número total de serotipos de VPH se ha incrementado notoriamente en los últimos 20 años, de los cuales unos 25 han sido detectados en la laringe. La tipificación virológica de las cepas involucradas es muy importante por dos razones: 1) La recurrencia de la enfermedad es la regla y según algunos estudios los tipos VPH 6 y 11 están relacionados con este proceso y 2) Los tipos VPH 16, 18 y 30 se relacionan con procesos de malignización especialmente de laringe^(12,13).

Debido a que este virus no puede ser cultivado "in vitro" se realiza la detección y tipificación de los ácidos nucleicos del virus del papiloma humano (VPH) mediante métodos moleculares de ingeniería genética uno de los cuales es la prueba de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) que tiene una gran especificidad⁽¹⁴⁾.

El objetivo de este trabajo fue contribuir al estudio más preciso de la enfermedad papilomatosa laríngea juvenil en Venezuela por medio de la tipificación del virus del papiloma humano según el método de PCR, de pacientes menores de 20 años que consultaron al Servicio de Otorrinolaringología del Hospital Universitario de Caracas en el período 1994-1999.

Se realizó estudio prospectivo y descriptivo a una población de 15 pacientes con edades comprendidas entre los 3 y 20 años de edad con el diagnóstico clínico e histopatológico de papilomatosis laringea juvenil del Servicio de ORL del HUC en el período 1994 y 1999. Se efectuó la detección de VPH y tipificación viral por métodos moleculares de Ingeniería Genética a especimenes clínicos (muestras de tejidos) utilizando la prueba de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) con un mezcla de los ADN genómicos de VPH 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35.

En los pacientes evaluados, 7 fueron del género masculino y 8 del femenino. La mayor incidencia se observó en los grupos etarios de 0 a 10 años, con una edad promedio de 9 años, una mínima de 3 años y una máxima de 20 años (Fig. 4). Se determinó el tipo serológico en el 53% de las muestras procesadas: 4 con serotipo 6 y 4 con serotipo 11. No se estableció serotipo de VPH en el 47% de los pacientes (Tabla 1), sin que esto quiera decir que no exista la enfermedad, sino que el serotipo puede corresponder a uno diferente de los investigados.

             Tabla 1: Papilomatosis laríngea juvenil tipificación viral.

Lograr el control de la papilomatosis respiratoria recurrente ha sido el deseo de todos los investigadores dedicados al estudio de la enfermedad, tratando a través de numerosos estudios encontrar un método de diagnóstico específico y efectivo que ayude a lograr un tratamiento eficaz que controle completamente la recurrencia de la infección viral.

Hasta los años 80, el diagnóstico de la papilomatosis se basó en la clínica y los hallazgos histopatológicos, pero el avance tecnológico de la medicina ha permitido demostrar la etiología viral y la presencia de ácidos nucleicos de VPH en las lesiones papilomatosas. Dado que hasta la fecha el virus del papiloma humano no ha podido ser cultivado, se han introducido métodos moleculares de ingeniería genética, uno de ellos de PCR que permite la tipificación de los diferentes virus de VPH, lo cual es importante por el potencial oncogénico detectado en ciertos serotipos y que han sido encontrados en laringe⁽¹⁵⁾. En este estudio se procesaron por ensayo de PCR, 15 muestras de tejido de laringe de pacientes de ambos géneros, entre 3 y 20 años de edad, lo cual permitió el despistaje y tipificación de ADN viral en el 53% de las muestras, permitiendo hacer el diagnóstico de certeza y la determinación del tipo viral de cada caso. El 47% de las muestras procesadas no revelaron presencia de ADN viral, lo cual no descarta la infección por VPH debido a que sólo fueron utilizados los seis genomas clonados disponibles en Venezuela los cuales son 6, 11, 16, 18, 31, 33, 35, pudiéndose inferir que en las muestras con resultado negativo pudiera estar presente un tipo de VPH no investigado. Los tipos de VPH detectados en las muestras del estudio fueron el 6 y el 11 (4 de cada tipo) lo cual coincide con lo reportado en la literatura mundial para la papilomatosis laríngea juvenil.

Aunque la papilomatosis laríngea juvenil no es una enfermedad frecuente, es importante tenerla en cuenta por: 1) Se presenta principalmente en niños en la primera década de la vida, con una prevalencia elevada y una evolución incierta. 2) La determinación del serotipo del virus del papiloma humano es importante en el diagnóstico y pronóstico de la enfermedad debido a la relación observada entre la infección por ciertos tipos de VPH y la presencia de cáncer de laringe. 3) La prueba de PCR en la tipificación de los papilomavirus humanos tiene una alta especificidad y su realización es relativamente fácil de realizar.