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Boletín de Malariología y Salud Ambiental

versión impresa ISSN 1690-4648

Bol Mal Salud Amb vol.53 no.1 Maracay ene. 2013

 

Malation vs. Aedes aegypti (Linnaeus) (Diptera: Culicidae) de diferentes regiones de Venezuela

Darjaniva Molina de Fernández*, Danny M. Bastidas B. & Luisa Elena Figueroa Acosta

Centro de Estudios de Enfermedades Endémicas y Salud Ambiental (CEEESA), S.A. Instituto de Altos Estudios “Dr. Arnoldo Gabaldon”, Ministerio del Poder Popular para la Salud (IAE/MPPS). Avenida Bermúdez Sur Nº 93, Maracay, edo. Aragua. Venezuela.

*Autor de correspondencia: darja2410@gmail.com

RESUMEN

  En Venezuela, el malation ha sido ampliamente usado  en  forma  continua  en  programas  de  control  de Aedes  aegypti.  Por  tal  motivo  se  realizó  un  estudio  en mosquitos  provenientes  de  zonas  urbanas  con  alta casuística de dengue de los estados: Amazonas, Aragua, Bolívar, Lara, Mérida y Zulia, para determinar el status de susceptibilidad en este vector al malatión, en comparación con la cepa susceptible referencial, Rockefeller (Rock). Se hicieron bioensayos en botellas tratadas con el insecticida malatión  evaluando  la  dosis  diagnóstica  100ug/mL  en 30  minutos  y  ensayos  bioquímicos  en  microplacas  para determinar  mecanismos  metabólicos  asociados  al  status frente  al  insecticida.  Los  resultados  de  los  bioensayos mostraron  que  existe  susceptibilidad  a  malatión,  lo  cual fue  confirmado  por  pruebas  bioquímicas.  Sin  embargo,  se  encontraron  diferencias  significativas    entre  todas  las cepas evaluadas con valores de P<0,005 para esterasas alfa  (α),  esterasas  beta  (β)  y  acetilcolinesterasa  normal (Ache) y acetilcolinesterasa inhibida (Achei). La prueba de comparación  de  medias  de  Bonferroni  encontró  similitud entre la cepa Rock, Amazonas y Lara para esterasas α y β. Se encontró similitud de la cepa Rock con las cepas de Bolívar  y  Zulia  para  las  pruebas  con Ache  y Achei.  Este estudio  concluye  que  el  malatión  mostró  su  potencial  de uso en el control del vector del dengue de las localidades evaluadas.

Palabras  claves:  Aedes  aegypti,  esterasas,  malation, susceptibilidad.

Malathion vs.  Aedes aegypti  (Linnaeus, Diptera: Culicidae) from different regions of Venezuela

SUMMARY

In  Venezuela,  malathion  has  been  widely  used continuously  in  control  programs  for  Aedes  aegypti. Therefore,  a  study  in  mosquitoes  from  urban  areas with  high  dengue  casuistry  in  the  states  of  Amazonas, Aragua, Bolivar, Lara, Merida and Zulia was conducted to  determine  the  status  of  this  vector  susceptibility  to malathion,  compared  with  the  reference  susceptible strain,  Rockefeller.  Bioassays  were  done  on  bottles treated  with  the  insecticide  malathion,  100ug/mL evaluating  the  diagnostic  doses  in  30  minutes  and biochemical  assays  in  microplates  were  performed  to determine metabolic mechanisms associated with status against  insecticide.  The  bioassay  results  showed  that there  is  malathion  susceptibility,  which  was  confirmed by  biochemical  tests.  However,  significant  differences were  found  among  all  strains  assessed  values    of P<0.005  for  esterases  alpha  (α),  beta  esterases  (β) and standard acetylcholinesterase (AChe) and inhibited acetylcholinesterase  (Achei).  The  mean  comparison test of Bonferroni showed similarity between the strains Rock, Amazon and Lara for esterases α and β. Similarity was  found  between  the  strains  Rock,  Bolivar  and  Zulia for the Ache and Achei tests. This study concludes that malathion  showed  its  potential  use  in  controlling  the dengue vector in the locations evaluated.

Key  words:  Aedes  aegypti,  esterases,  malathion, susceptibility.

Recibido el 13/02/2012   Aceptado el 08/12/2012

INTRDUCCIÓN

    Aedes  aegypti,  el  "mosquito  de  la  fiebre amarilla", es el vector primario en el ser humano de los flavivirus dengue y fiebre amarilla  y del alfavirus chikungunya.  Dado  que  las  vacunas  todavía  no están  disponibles,  el  dengue  es  actualmente  una  de las  enfermedades  reemergentes  más  importantes  en el  mundo,  ya  que  se  reportan  aproximadamente  20 millones de infectados anualmente (CDC, 2010). En la Región de las Américas, el número de casos de dengue ha aumentado sostenidamente durante los últimos 25 Disease Control and Prevention, Atlanta, U.S.A.), San Juan de Puerto Rico. Fue desarrollada a partir de posturas existentes en el Laboratorio de Biología de Vectores y Reservorios del CEEESA (IAE Dr. Arnoldo Gabaldon) siguiendo para la cría, metodología estandarizada en el mismo laboratorio.

Aedes aegypti cepas de campo

  Se  realizaron  colectas  de  fases  inmaduras (larvas  y  pupas)  de  Ae.  aegypti  en  cada  una  de  las regiones aplicando los métodos sugeridos por la OMS (1993) utilizando cucharones, goteros y succionadores. Las  colectas  se  realizaron  en  zonas  urbanas  de  los estados  Amazonas  (56º61´5,15”  N,  67º62´0,74” W),  Aragua  (10º35’02’’  N,  62º59’12’’  W),  Bolívar (08º19’53,09’’ N, 62º39’02,18’’ W), Lara (10º03’01,53’’ N,  69º23’37,65’’  W),  Mérida  (08º33’42.63’’  N, 71º11’32.92’’ W) y Zulia (11º05’07,06’’ N, 71º50’35,43’’ W). Los inmaduros que fueron colectados se colocaron en  bolsas  plásticas  transparentes  (de  un  kilogramo  de capacidad)  con  aproximadamente  500mL  de  agua  de los mismos recipientes de donde fueron extraídas. Cada bolsa  se  rotuló,  se  cerró  y  luego  fueron  colocadas  en cavas  de  anime  para  ser  transportadas  al  laboratorio.

Posteriormente, se procedió a realizar un pool de larvas de  cada  lugar  de  muestreo,  vaciando  el  contenido  de cada bolsa en cubetas plásticas que fueron distribuidas y debidamente identificadas con los nombres de los estados de procedencia, donde se desarrollaron bajo condiciones de  cría  estandarizadas  hasta  la  obtención  de  adultos; para  los  ensayos  con  insecticidas  se  utilizaron  adultos desarrollados hasta la tercera generación filial.

Insecticida

  Fue evaluado el insecticida órganofosforado malatión (96% p/p), en presentación grado técnico, sin valor comercial, el mismo fue suministrado por Insecticidas  Internacionales  Compañía  Anónima. (INICA).

Pruebas biológicas

  Los  bioensayos  para  evaluar  susceptibilidad a  insecticidas  se  realizaron  siguiendo  el  método  de exposición residual de insecticidas en botellas del CDC (Brogdon & McAllister, 1998). Los mosquitos adultos hembras  Ae.  aegypti  cepa  Rock,  fueron  expuestos  a botellas  de  vidrio  tipo  Wheaton  de  250  mL,  tratadas con  soluciones  cetónicas  de  insecticidas,  las  cuales años y este aumento se interpreta como una falla de las  políticas  de  salud  pública  (Gubler,  2005;  Clark, 2008).  En  Venezuela,  desde  la  primera  epidemia  en 1989-1990, se han reportado cientos de miles de casos hasta la fecha. De hecho en el quinquenio 2004-2008 se  reportaron  más  de  235  mil  casos.  (MPPS,  2005, 2007, 2008). El control de Ae. aegypti sigue siendo la opción principal para prevenir y controlar los brotes de las enfermedades causadas por esos arbovirus. Aunque algunos Programas de control están haciendo énfasis en  las  distintas  formas  de  transferir  a  la  comunidad la  responsabilidad,  capacidad  y  motivación  que requieren el control y la prevención del dengue, estas acciones de promoción y la participación comunitaria, estrategias  COMBI  (Parks  &  Lloyd,  2004),  aun tienen escaso impacto en las epidemias debido a las dificultades  para  su  sostenibilidad  en  ambientes  con problemas socioeconómicos. Por ahora el tratamiento focal y perifocal con larvicidas químicos sigue siendo la principal herramienta de prevención, en tanto que la  aplicación  de  adulticidas  en  volumen  ultra  bajo (ULV) o nebulizaciones con organofosforados y más recientemente  con  piretroides,  se  mantienen  como las medidas de control durante brotes o epidemias en Venezuela. Sin embargo la eficacia del control químico está amenazada por el desarrollo de resistencia, como ha sido demostrado en numerosos reportes de resistencia en Ae. aegypti (Georghiou et al., 1987; Rawlins, 1998; Braga & Valle, 2007; Flores et al., 2007; Bisset et al., 2001; Alvárez  et  al.,  2008,  Rodríguez  et  al.,  2007).

Los  insecticidas  pueden  matar  un  gran  número  de mosquitos  en  un  corto  tiempo  y  pueden  reducir  su densidad lo suficiente como para suprimir la población del  vector,  pero  el  uso  frecuente  de  insecticidas  o aplicando el mismo compuesto en una misma área por largo tiempo puede causar resistencia, los mosquitos necesitan adaptarse a los insecticidas para ser capaces de  sobrevivir  (Saelim  et  al.,  2005).  En  tal  sentido, considerando  que  en  Venezuela  el  control  químico de  Ae.  aegypti  con  adulticidas  ha  sido  mayormente con el malatión se quiere conocer si el uso frecuente de  este  compuesto  ha  seleccionado  individuos  con mecanismos de resistencia capaces de evadir el efecto tóxico del malatión.

MATERIALES Y MÉTODOS

Insectos

  Aedes  aegypti  cepa  Rockefeller  susceptible referencial  suministrada  por  los  CDC  (Centers  for Disease Control and Prevention, Atlanta, U.S.A.), San Juan de Puerto Rico. Fue desarrollada a partir de posturas existentes en el Laboratorio de Biología de Vectores y Reservorios del CEEESA (IAE Dr. Arnoldo Gabaldon) siguiendo para la cría, metodología estandarizada en el mismo laboratorio.

Aedes aegypti cepas de campo

  Se  realizaron  colectas  de  fases  inmaduras (larvas  y  pupas)  de  Ae.  aegypti  en  cada  una  de  las regiones aplicando los métodos sugeridos por la OMS (1993) utilizando cucharones, goteros y succionadores.

Las  colectas  se  realizaron  en  zonas  urbanas  de  los estados  Amazonas  (56º61´5,15”  N,  67º62´0,74” W),  Aragua  (10º35’02’’  N,  62º59’12’’  W),  Bolívar (08º19’53,09’’ N, 62º39’02,18’’ W), Lara (10º03’01,53’’ N,  69º23’37,65’’  W),  Mérida  (08º33’42.63’’  N, 71º11’32.92’’ W) y Zulia (11º05’07,06’’ N, 71º50’35,43’’ W). Los inmaduros que fueron colectados se colocaron en  bolsas  plásticas  transparentes  (de  un  kilogramo  de capacidad)  con  aproximadamente  500mL  de  agua  de los mismos recipientes de donde fueron extraídas. Cada bolsa  se  rotuló,  se  cerró  y  luego  fueron  colocadas  en cavas  de  anime  para  ser  transportadas  al  laboratorio.

Posteriormente, se procedió a realizar un pool de larvas de  cada  lugar  de  muestreo,  vaciando  el  contenido  de cada bolsa en cubetas plásticas que fueron distribuidas y debidamente identificadas con los nombres de los estados de procedencia, donde se desarrollaron bajo condiciones de  cría  estandarizadas  hasta  la  obtención  de  adultos; para  los  ensayos  con  insecticidas  se  utilizaron  adultos desarrollados hasta la tercera generación filial.

Insecticida

  Fue evaluado el insecticida órganofosforado malatión (96% p/p), en presentación grado técnico, sin valor comercial, el mismo fue suministrado por Insecticidas  Internacionales  Compañía  Anónima. (INICA).

Pruebas biológicas

  Los  bioensayos  para  evaluar  susceptibilidad a  insecticidas  se  realizaron  siguiendo  el  método  de exposición residual de insecticidas en botellas del CDC (Brogdon & McAllister, 1998). Los mosquitos adultos hembras  Ae.  aegypti  cepa  Rock,  fueron  expuestos  a botellas  de  vidrio  tipo  Wheaton  de  250  mL,  tratadas con  soluciones  cetónicas  de  insecticidas,  las  cuales se  usaron  como  cámaras  de  prueba  para  detectar  la resistencia  o  susceptibilidad  a  los  insecticidas.  Estas fueron  preparadas  en  el  laboratorio  de  Evaluación  de Insecticidas del CEEESA, IAE, siguiendo metodología estandarizada  por  Figueroa  Acosta  et  al.,  2006.  Se determinaron las dosis diagnósticas y el límite o umbral de  resistencia  en  función  del  tiempo  en  la  cepa  de laboratorio  susceptible  Rockefeller,  parámetros  que se  tomaron  como  referencia  para  categorizar  como resistentes  los  mosquitos  de  poblaciones  de  campo que  superaron  el  umbral  o  susceptibles  aquellos  que murieron en tiempos menores al umbral de referencia. La  dosis  diagnóstica  se  definió  como  la  menor  dosis que  causó  el  mayor  porcentaje  de  mortalidad  en  el menor tiempo en los insectos expuestos. (Brogdon & McAllister, 1998).

  Los bioensayos se realizaron en el laboratorio a  temperaturas  aproximadas  de  23ºC  ±  2  y  humedad relativa de 55% ± 5. Fueron expuestos aproximadamente 15  ±  5  mosquitos  adultos  hembras  por  botella  y  se evaluaron cuatro repeticiones por cada concentración de insecticida y dos repeticiones como grupo control. Cada quince minutos fue registrado el número de mosquitos muertos  hasta  observar  el  100%  de  mortalidad.  Los bioensayos fueron replicados tres veces el mismo día de ejecución de la prueba.

Criterio de mortalidad

  Situación  en  la  que  el  insecto  se  encuentra sin ningún movimiento evidente de cualquier apéndice después de la observación por un mínimo de 3 segundos.

Pruebas bioquímicas

  Estas  consistieron  en  detectar  la  presencia de  mecanismos  de  resistencia  específicos  en  insectos individuales que podrían proveer precisión en el control de  la  resistencia.  Cada  mosquito  fue  triturado  en  50 µL de solución tampón pH 7,5 y 0,05 M y se le añadió 0,5  mL  de  la  misma  solución.  Se  tomaron  alícuotas de  50  µL  de  cada  muestra  que  fueron  colocadas  en placas para microtitulación de 96 pocillos. Se evaluaron cuatro  sistemas  enzimáticos  que  confieren  resistencia  a insecticidas; esterasas alfa (α) y beta (ß), acetilcolinesterasa normal (AChe) y acetilcolinesterasa inhibida (AChei). Los substratos  utilizados  en  cada  caso  incluyen  alfa  y  beta-naftil acetato para las esterasas no específicas, el yoduro de acetiltiocolina se usó para evidenciar la presencia de la AChe y para la AChei se utilizó el insecticida carbamato propoxur añadido a la muestra. La absorbancia fue medida en  un  lector  de  ELISA  (Ensayo  Inmuno  Absorbente Ligado a Enzimas), Multiskan Plus de Fisher Scientific, empleando filtros de 405 nm para AChe y AChei, y para las esterasas se empleó un filtro de 620 nm.

Análisis de los Resultados

Pruebas Biológicas

  Se  relacionaron  las  variables  tiempo-mortalidad  para  los  insectos  evaluados.  Los  datos obtenidos  con  las  botellas  fueron  graficados  en  el programa  Excel.  Dicho  análisis  arrojó  una  curva sigmoidal, el porcentaje de mortalidad y los tiempos letales  en  minutos  para  el  insecticida  malation,  la mortalidad  entre  5  y  20%  en  el  grupo  control  fue corregida aplicando la formula de Abbott (1925):

Pruebas bioquímicas

  Se aplicó la prueba de normalidad de Shapiro Wilk para cada cepa (IC 95%), se compararon con la cepa Rock mediante la prueba de comparaciones múltiples  de  Dunnes  (IC  95%).  También  se  aplicó estadística  descriptiva, Análisis  de Varianza  de  una sola vía y prueba de comparación de medias LSD a través  del  programa  Statistix  versión  8.0  (Sokal  & Rohlf, 1979)

RESULTADOS

Pruebas Biológicas
 
  Los  resultados  de  los  bioensayos  se muestran  en  la  Fig.  1,  en  la  que  se  presentan  las curvas  de  tendencia  de  cepas  de  campo  de  Ae. aegypti  y  la  cepa  susceptible  de  referencia  Rock., ante el efecto del insecticida malatión a 100 ug por botella. En los registros de mortalidad que se hicieron a los 30 minutos se registró el 100% de mortalidad en todas las cepas de campo evaluadas, evidenciando un  solapamiento  con  la  cepa  Rock,  lo  cual  las caracterizó como susceptibles al insecticida malatión. En el tratamiento control no se encontró mortalidad superior al 5% por lo que no fue necesario corregir con la formula de Abbott.

Fig. 1. Datos de tiempo-mortalidad en adultos de Aedes aegypti cepa susceptible control (Rockefeller) y seis cepas de campo, expuestos al organofosforado malation a una concentración de 100 ug/mL por botella.


No  deja  de  ser  importante  mencionar que a los primeros quince minutos de exposición, el  mayor  porcentaje  de  mortalidad  se  encontró en  mosquitos  de  la  cepa  Bolívar  (93%)  seguido por  mosquitos  de  la  cepa  Amazonas  (83,6%), Rock  (83,3%)  y  Zulia  (81,7%),  mientras  que  los mosquitos de las cepas Mérida, Aragua y Lara con porcentajes de mortalidad de 65, 19,1% y 16,9% , respectivamente.

Pruebas bioquímicas

  Aún cuando las cepas resultaron susceptibles al  malatión,  se  presenta  el  perfil  de  las  esterasas elevadas  y  acetilcolinesterasa,  encontrados.  En  la Fig.  2  (a)  y  (b)  se  representa  el  diagrama  de  cajas donde  se  observa  gráficamente  el  comportamiento de las esterasas alfa (α) y beta (ß) en las siete cepas evaluadas. El ANOVA de una sola vía para esterasas alfa (α) reveló un coeficiente de variación (CV) de 9,37, lo que indica que hay muy poca variación entre las  cepas  evaluadas  (P<0,0012  y  F=104).  Además se  aplicó  la  prueba  de  medias  de  Bonferroni  y  se encontró similitud entre la cepa Rock con Amazonas y Zulia; así como diferencias significativas entre estas y los mosquitos de Lara, Aragua, Bolívar y Mérida.

Para  esterasas  beta  (ß),  se  encontró  un  CV  =  8,01, que también demuestra muy poca variación entre las cepas evaluadas (P<0,000 y F=207). De igual manera, se encontró similitud de la cepa Rock con Amazonas y Lara; así como diferencias significativas entre estas y los mosquitos de Mérida, Aragua, Bolívar y Zulia.

  En  la  Fig.  3  (a)  y  (b),  se  representa  el diagrama  de  cajas  donde  se  observa  gráficamente el  comportamiento  de  las AChe  Normal  e  Inhibida (AChei) en las siete cepas evaluadas. El ANOVA de una sola vía para Acetilcolinesterasa normal, reveló un coeficiente de variación (CV) de 14.50, lo que indica que hay moderada variación entre las cepas evaluadas (P<0,000 y F=1191). También se aplicó la prueba de medias de Bonferroni y se encontró similitud de la cepa Rock con Bolívar y Zulia; así como diferencias significativas entre estas y los mosquitos de Mérida, Lara, Amazonas y Aragua. Para la Acetilcolinesterasa Inhibida  (AChei),  se  encontró  un  CV  =  15,31,  que también demuestra moderada variación entre las cepas evaluadas (P<0,000 y F=1127). De igual manera se encontró similitud entre la cepa Rock con Bolívar y Zulia; así como diferencias significativas entre estas y los mosquitos de Mérida, Aragua, Amazonas y Lara.

Fig. 2. Diagrama de cajas correspondiente a los valores de absorbancias para las esterasas alfa (a) y beta (b) en siete cepas de Aedes aegypti de Venezuela.

Fig. 3. Diagrama de cajas correspondiente a los valores de absorbancias para la acetilcolinesterasa inhibida (a) y normal (b) en siete cepas de Aedes aegypti de Venezuela.

DISCUSIÓN

  Diversas  especies  de  insectos  han desarrollado  resistencia  a  los  organofosforados.  La resistencia de amplio espectro a organofosforados, o la resistencia específica para malation están presentes en  las  principales  especies  vectoras  del  género Anopheles  (Hemingway  &  Ranson,  2000;  Molina de  Fernández  et  al.,  2007;  Molina  de  Fernández &  Figueroa  Acosta,  2009),  Culex  (Hemingway  & Karunaratne, 1998; Bastidas et al., 2011) y también en Ae. aegypti (Georghiou et al., 1987; Vaughan et al., 1998; Rawling, 1998; Bisset et al., 2006; Pérez & Molina, 2009). En 1960 se reportaron los primeros casos de resistencia a insecticidas organofosforados y  carbamatos  en  Ae.  aegypti  (Fox  et  al.,  1961),  en una  cepa  en  Puerto  Rico  resistente  a  malation  y diazinon.  La  capacidad  de  resistir  al  malation  se asoció con la destoxificación mediada por enzimas de actividad  específica:  carboxilesterasa.  No  obstante, nuestros resultados mostraron que a pesar de cuatro décadas de intenso uso del insecticida malation como adulticida en Venezuela las cepas de Ae. aegypti de regiones  con  alta  casuística  de  dengue  y  que  han tenido  presión  por  la  aplicación  de  este  insecticida en el histórico, resultaron susceptibles al efecto del malation  a  dosis  diagnóstica  referencial  de  100ug/mL. A pesar de la presión no se han dado alteraciones en  el  carácter  susceptible  en  los  mosquitos  a  esta clase de insecticida en las cepas de campo evaluadas, por  cuanto  los  registros  de  mortalidad  previos  al umbral evidenciaron en los mosquitos susceptibilidad al  malatión. 

Los  insecticidas  organofosforados han  sido  utilizados  para  el  control  de  Ae.  aegypti durante  los  últimos  15  a  20  años  en  varios  países de  América.  Particularmente  el  departamento  del Atlántico en Colombia inició su uso a partir de los 70, durante más de tres décadas el uso de insecticidas químicos  ha  sido  la  principal  medida  de  control para  la  fiebre  dengue;  estudios  de  susceptibilidad de Ae. aegypti a insecticidas en dicho departamento reportan  susceptibilidad  al  malation  a  una  dosis referencial de 100ug/mL en poblaciones de Baranoa, Puerto Colombia, Malambo; Soledad-Villa Katanga, Soledad-Floresta y Barranquilla, en correspondencia a la dosis evaluada y susceptibilidad encontrada en las  cepas  de  Ae.  aegypti  venezolanas,  estudiadas en  el  presente  trabajo.  Rodríguez  et  al.  (1999), determinaron bajos niveles de resistencia a fentión,malatión y deltametrina en una cepa de Ae. aegypti de Santiago de Cuba. También, hay países como la India que a pesar del uso intensivo de insecticidas, tanto en Ae. aegypti como Ae. albopictus mostraron completa susceptibilidad a los organofosforados más utilizados por  el  Programa  de  Control  de  enfermedades transmitidas  por  vectores,  como  fueron  el  temefos, fention,  malation  y  fenitrotion  (Mukhopadhyay  et al., 2006). Existen trabajos que demuestran que Ae.aegypti presenta aún susceptibilidad a malation, como ha sido en la India y en Tailandia en cepas de cuatro lugares Mae Sot, Nakhon Ratehaslina, Sarat Thani y Phatthalung a pesar de que han resultado resistentes al organofosforado temefos y al piretroide permetrina (Ponlawat  et  al.,  2005).  Estudios  realizados  por Fonseca (2008), sobre susceptibilidad a insecticidas en doce poblaciones provenientes de siete municipios localizados en los departamentos de Antioquia, Chocó y Putumayo de Colombia, utilizando bioensayos de la OMS y del CDC, reportaron todas las poblaciones de adultos y de larvas fueron susceptibles al efecto tóxico del malatión, situación generalizada en América pese al uso masivo de este organofosforado.

Por  otro  lado,  se  consideró  importante ampliar este estudio determinando los mecanismos de resistencia expresados en estas poblaciones mediante pruebas  bioquímicas  que  permitirían  conocer  el perfil  de  estas  cepas  de  Ae.  aegypti  que  resultaron susceptibles al malation. Se encontró que mecanismos de  resistencia  mediados  por  las  enzimas  esterasas específicas no están asociados como mecanismos de resistencia al malation en las cepas Amazonas, Lara y Zulia, lo cual confirma la susceptibilidad expresada por esas  cepas  al  insecticida.  Características  intrínsecas de  las  cepas  Aragua,  Bolívar  y  Mérida  pudieran explicar las diferencias encontradas con Rock, que no se relaciona con la susceptibilidad encontrada en los bioensayos. Así  también  los  mecanismos  mediados por Ache Normal e Achei Inhibida no se encontraron asociados  como  mecanismos  de  resistencia  al malatión en las cepas Bolívar y Zulia, probablemente características intrínsecas de las cepas Aragua, Lara y Mérida pudieran explicar las diferencias encontradas con Rock, que no se relaciona con la susceptibilidad encontrada  en  los  bioensayos.  Flores  et  al.  (2006), reportaron  de  mucha  importancia  los  mecanismos de  resistencia  a  insecticidas  que  fueron  estudiados utilizando  análisis  bioquímicos  en  Ae.  aegypti colectados en 5 municipios que representaban la parte del norte de Quintana Roo: Benito Juárez, Cozumel, Isla  Mujeres,  Lázaro  Cárdenas,  y  Solidaridad  en Méjico.  Las  actividades  de  las  esterasas  alfa  (α) y  beta  (ß),  oxidasas  de  funciones  mixtas  (MFO), glutathion-S-transferasa  (GST),  acetilcolinesterasa y  acetilcolinesterasa  inhibida  (iAChE)  fueron evaluadas  en  microplacas  con  la  cepa  susceptible de New Orleans de Ae. aegypti. Se ha sugerido que las  esterasas  elevadas  actúan  como    mecanismos potenciales  de  la  resistencia  a  insecticidas organofosforados, carbamatos, y algunos insecticidas piretroides. Los niveles levemente elevados de MFOs aparecieron  en  las  hembras  de  Lázaro  Cárdenas  y en  los  machos  de  Cozumel,  de  Isla  Mujeres,  y  de Solidaridad.  Los  mecanismos  que  implicaban  el iAChE o GST no se evidenciaron. En Brasil, Montella et al. (2007), detectaron en cepas de Ae. aegypti de varios  municipios  resistencia  a  organofosforados específicamente  al  temefos,  utilizado  desde  1967.

En consecuencia se realizó un cambio de estrategias de control y los organofosforados fueron sustituidos por  los  piretroides  contra  los  adultos  y  en  algunas localidades,  por  Bacillus  thuringiensis  israelensis (Bti) contra las larvas. Sin embargo, altos coeficientes de resistencia a temefos todavía detectado entre 2001 y 2004 con una ligera reducción de la esterasa (EST) y la actividad de EST junto con un aumento gradual de  p-nitrofenil  acetato  (PNPA)-EST.  Glutatión-S-transferasa, la alteración se encontró sólo en la región noreste, extendiendo a todo el país a partir de entonces.

En general, los datos fueron analizados en el contexto de  la  aplicación  histórica  de  los  insecticidas  en  el Brasil.  Nuestro  estudio  sugiere  que  el  monitoreo  de la  susceptibilidad  en  forma  continua  y  sistemática  a los insecticidas incorporados en Programas de control vectorial,  debe  ser  conducido  en  escala  local  en los diferentes estados de Venezuela, en red, a fin de identificar la eficacia de compuestos para el control del dengue y asi facilitar la selección de los compuestos con  la  mayor  seguridad  para  detener  o  minimizar las  infecciones  de  dengue.  Sensibilización  de  la comunidad, la cooperación con la campaña de salud pública para reducir criaderos de larvas de Aedes y la rotación bien administrada de los insecticidas eficaces, son estrategias recomendadas para el control del vector del dengue (Ponlawat et al., 2005).

AGRADECIMIENTOS

  Al  personal  del  Centro  de  Estudios  de Enfermedades  Endémicas  y  Salud  Ambiental (CEEESA) y a las Direcciones de Salud de las regiones
de estudio. La investigación fue financiada por el S.A. Instituto  de Altos  Estudios  “Dr. Arnoldo  Gabaldon” (IAE-MPPS).

REFERENCIAS

1.Abbott  W.  S.  (1925).  A  method  of  computing  the effectiveness of an insecticide. J. Econ. Entomol.  18: 265-267.
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