0,05) del tipo de cargado sobre la tasa de recuperación de embriones post vitrificación, ni sobre la tasa de embriones morfológicamente normales y anormales, sin embargo, al vitrificar 4 embriones por pajuela se presentaron numéricamente los mejores resultados.]]>
0.05) of the number of embryos on the rate of embryorecovery after vitrification, or on the rate of normal embryos. However, thebest results were shown when 4 embryos per straw were used.]]>
Pedro Cabrera*, Adriana Fernández*, Thaís Díaz*, Pedro Bastidas*, Magaly Molina**, Angélica Bethencourt*, Isis Vivas*, Yuraima Reyes* y Freddy Sifontes***
* Profesores. Universidad Central de Venezuela. Facultad de Ciencias Veterinarias. Maracay 2101, estado Aragua. Venezuela.
** Investigadora III. Instituto Nacional de Investigaciones Agrícolas (INIA). Centro Nacional de Investigaciones Agropecuarias (CENIAP). Sanidad Animal. Apdo. 70. Av. Las Delicias. Maracay 2101, estado Aragua. Venezuela.
*** Jefe de Bioterio. Instituto Nacional de Higiene “Dr. Rafael Rangel”. Distrito Capital. Venezuela.
RESUMEN
La técnica de criopreservación de embriones por vitrificación ha adquirido gran relevancia a nivel mundial debido a lo fácil de su ejecución, los reducidos costos requeridos en equipos y, además por los altos niveles de viabilidad obtenidos post vitrificación. Con el objeto de determinar la influencia del número de embriones cargados en la pajuela antes de la vitrificación sobre la apariencia morfológica inmediatamente después de la misma, se utilizaron 4 tipos de cargado de la pajuela, 1, 2, 4 ó 6 embriones por pajuela, no evidenciándose influencia significativa (P>0,05) del tipo de cargado sobre la tasa de recuperación de embriones post vitrificación, ni sobre la tasa de embriones morfológicamente normales y anormales, sin embargo, al vitrificar 4 embriones por pajuela se presentaron numéricamente los mejores resultados.
Palabras Clave: Embrión; murinos; vitrificación.
Efect of the number of embryos per straw on the post-vitrification morphological viability of murine embryos obtained in vivo
SUMMARY
]]> The technique of cryopreservation of embryos by vitrification has acquiredgreat relevance world-wide because of the easiness of the process, the low costof the equipment and the high levels of viability of the embryos after vitrification.To determine the effect of the number of embryos per straw on the morphologicalappearance, we used four different numbers of embryos per straw: 1, 2, 4 and6, obtaining no effects (P>0.05) of the number of embryos on the rate of embryorecovery after vitrification, or on the rate of normal embryos. However, thebest results were shown when 4 embryos per straw were used.Key Words: Embryo; murine; vitrification.
RECIBIDO: febrero 20, 2006.
INTRODUCCIÓN
La vitrificación se refiere al proceso físico de solidificación de una solución a bajas temperaturas sin la formación de cristales de hielo. El fenómeno puede ser considerado como un incremento extremo de la viscosidad, que requiere de rápidas tasas de enfriamiento y calentamiento (Vajta, 2000), el procesamiento de un elevado número de embriones por pajuela a través de esta técnica criobiológica reduce considerablemente el tiempo de congelación. El objetivo de este estudio fue determinar la influencia del número de embriones por pajuela sobre la viabilidad morfológica embrionaria post vitrificación.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se escogieron ratones hembra vírgenes de la cepa NIH, los cuales fueron sometidos al protocolo de superovulación y colecta de embriones descrito por Kuleshova et al. (2001), escogiendo de dichas colectas los embriones de calidad excelente siguiendo los parámetros descritos por Lidner y Wright (1983), dividiendo los embriones en 4 grupos, dependiendo del número de embriones alojados en cada pajuela (1, 2, 4 ó 6 embriones por pajuela), los cuales fueron sometidos a la técnica de vitrificación pajuela estirada abierta modificada (mOPS) señalado por López-Béjar y López-Gatius (2002). Finalmente, la apariencia morfológica embrionaria post vitrificación fue evaluada bajo microscopía de luz.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
De 572 embriones murinos vitrificados fueron recuperados 533, no encontrándose diferencia significativa entre los 4 tipos de cargado (P>0,05). Con relación al número de embriones cargados por pajuela y la tasa de embriones morfológicamente normales y anormales tampoco se encontraron diferencias (P>0,05; Cuadro 1), resaltando el tipo de cargado de 4 embriones por pajuela, el cual presentó la mayor tasa de embriones morfológicamente normales (92,0%) y la menor tasa de anormalidades (7,9%). Estos datos difieren de lo señalado por Kong et al. (2000) y Cho et al. (2002), quienes reseñan que el número de embriones cargados por pajuela puede afectar significativamente la viabilidad post calentamiento. En la investigación el número de embriones por pajuela no afectó significativamente la sobrevivencia morfológica en embriones murinos, sin embargo, se sugiere que el tipo de cargado de 4 embriones por pajuela numéricamente es el más eficiente (ver Cuadro).
BIBLIOGRAFÍA
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2. KONG, I., S. LEE, S. CHO. and C. PARK. 2000. Comparison of open pulled straw (OPS) vs. glass micropipette (GMP) vitrification in mouse blastocysts. Theriogenology 53(1):817-1, 826. [ Links ]
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