Teresa Edith Vargas C.*, Maira Oropeza C.* y Eva de García*
* Profesores. Universidad Central de Venezuela. Facultad de Ciencias. Centro de Botánica Tropical. Instituto de Biología Experimental. Laboratorio de Biotecnología Vegetal. E-mail: teoriedu@cantv.net.
RESUMEN
Hippeastrum es un género de la familia Amaryllidaceae cuyas especies son muy apreciadas desde el punto de vista ornamental y medicinal, dada su belleza y producción de alcaloides de utilidad en la industria farmacéutica. Con la finalidad de lograr la propagación y multiplicación in vitro de Hippeastrun sp., los bulbos empleados como explantes se desinfectaron utilizando un protocolo minucioso debido a la presencia de mucílago y bacterias en el interior de los mismos. Bulbos intactos y secciones de bulbos, fueron cultivados en el medio con las sales MS (1962) suplementado con 0,4 mg l-1 tiamina, 100 mg l-1 de mio-inositol, 30 mg l-1 de sacarosa, solidificado con 8 g l-1 de agar e incubadas bajo condiciones de luz fluorescente continua (50 µmol m-2 s-1) a temperatura de 23±1 ºC. Se probaron los siguientes tratamientos: Bencilaminopurina (BA) sola a 0,5, 1, 2, 3 mg l-1 y combinada con Ácido Naftalenoacético (ANA) 0,1 mg l-1 y un medio sin sustancias de crecimiento. En el caso de secciones de bulbos, 0,5 y 1 mg l-1 de BA y el medio control resultaron ser los mejores tratamientos hacia la formación de brotes, mientras que para los bulbos intactos los tratamientos más adecuados fueron 2 y 3 mg l-1 de BA.
Palabras Clave: Micropropagación; cultivo in vitro; Hippeastrum.
Micropropagation of hippeastrum sp.
SUMMARY
Hippeastrum is a genus of the Amaryllidaceae family, whose species are highly appreciated for their ornamental and medicinal value due to their beauty and production of alkaloids of utility in the pharmaceutical industry. The goal of this work was to propagate Hippeastrum plants in vitro and massively. For explant disinfection a meticulous protocol was used because of the presence of mucilage and bacteria. Intact and sectioned bulbs were incubated on MS (1962) salts supplemented with thiamine (0,4 mg l-1), sucrose (30 g l-1), solidified with agar (8 g l-1) and incubated under continuous fluorescent light conditions at a temperature of 23 ± 1 °C. Treatments assayed were Benzylaminopurine (BA, 0,5, 1, 2, 3 mg l-1) only, combined with Naphtalenacetic acid (ANA, 0,1 mg l-1) and a control medium without hormonal substances. For sectioned bulbs, BA (0,5, 1 mg l-1) and the control medium proved to be the best treatments that favored shoot formation, while for intact bulbs the best treatments were BA (2, 3 mg l-1).
Key Words: Micropropagation; in vitro culture; Hippeastrum.
]]> RECIBIDO: febrero 20, 2006.INTRODUCCIÓN
Las especies del género Hippeastrum perteneciente a la familia Amaryllidaceae, son ornamentales muy apreciadas que se caracterizan por tener flores grandes de llamativos colores, por lo que tienen un lugar muy importante dentro de la floricultura comercial para la venta como flores de corte o flores de maceta. Además, por el alto contenido de alcaloides algunas especies de este género son usadas en la industria farmacéutica. La propagación convencional de las especies bulbosas se realiza por semillas o por bulbos, sin embargo las técnicas de cultivo de tejidos vegetales in vitro favorecen el crecimiento de estas especies, debido a que disminuyen el tiempo requerido para el ciclo vegetativo, ya que el bulbo alcanza en menor tiempo el tamaño mínimo para iniciar el ciclo reproductivo (Murashige, 1974; Chen et al., 2005). Este trabajo tiene como objetivo la propagación in vitro de plantas de Hippeastrum sp.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se emplearon como explantes bulbos provenientes de plantaciones cultivadas. Los explantes se lavaron con agua y jabón comercial, se trataron por tres horas con el fungicida VITAVAX (Carboxim 17% y Thiram17%) y se enjuagaron dos veces con agua destilada. Se colocaron en cloro comercial al 50% + 2 gotas de Tween 20 (30 minutos), se enjuagaron 2 veces con agua destilada. Un grupo de bulbos se seccionó en dos y otro grupo se mantuvo intacto, ambos grupos se colocaron en el antibiótico Cefatoxima 0,1 mg ml-1 (1hora), sin enjuagar. Los explantes fueron cultivados en el medio con las sales MS (1962) suplementado con 0,4 mg l-1 tiamina, 100 mg l-1 mio-inositol, 30 g l-1sacarosa y solidificado con 8 g l-1 agar. Se probaron los siguientes tratamientos: Benciladenina (BA) sola a 0,5, 1, 2, 3 mg l-1 y combinada con Ácido Naftalenoacético (ANA) 0,1 mg l-1 y un medio sin sustancias de crecimiento. Se emplearon 20 explantes por tratamiento. Las condiciones de cultivo fueron: luz fluorescente (50 µmol m-2 s-1) y temperatura de 23± 1 ºC.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
El método empleado para la desinfección de los explantes fue adecuado, observándose 20% de explantes contaminados por bacterias. Muchas especies bulbosas presentan en el interior de sus bulbos, mucílago y bacterias que dificultan el establecimiento de un cultivo in vitro en condiciones asépticas (Hol y Linde, 1992; Chang et al., 2003; Sochacki y Orlikowska, 2004).
A los 45 días de cultivo se observó que el 95% de los bulbos intactos habían desarrollado un promedio de 2 brotes en los medios con 2 y 3 mg l-1 de BA, ver Cuadro (Figura A y B). En el caso de los bulbos seccionados, se aprecio 87% de explantes desarrollando un promedio de 4 brotes, en el medio sin sustancias de crecimiento y en los tratamientos con las concentraciones más bajas de citocinina (0,5 y 1 mg l-1 BA) como se muestra en las Figuras C y D y Cuadro.
CUADRO. Efecto de la Benciladenina (BA) en la formación de brotes en bulbos intactos y seccionados de Hippeastrum sp. a los 45 días de cultivo.
| Tipo de explante | BA(mg l-1) | ||||
|---|---|---|---|---|---|
| 0 | 0,5 | 1 | 2 | 3 | |
| % de explantes intactos con brotes | 10 | 20 | 50 | 95 | 95 |
| % de explantes seccionados con brotes | 80 | 85 | 70 | 30 | 10 |
| Promedio de brotes por explante intactos | 0,1 | 0,2 | 0,7 | 1,9 | 1,75 |
| Promedio de brotes por explante seccionado | 3,5 | 3,75 | 3,65 | 0,65 | 0,1 |
Seabrook y Cumming (1977), Slabbert et al. (1993), trabajando con micropropagación de las Amarillidáceas Hippeastrum spp. Hybrids y Crinum macowani encontraron la mayor producción de brotes en bulbos seccionados cultivados en medios sin citocininas. Cuando se utilizó 0,1 mg l-1 de ANA sólo y combinado con 0,5 mg l-1 de BA se apreció la formación de raíces y no hubo aumento en la formación de brotes en ninguno de los casos.
En esta investigación se observaron diferencias en las respuestas de ambos explantes con los tratamientos empleados. Los bulbos intactos requirieron de concentraciones más altas de Benciladenina para que se desarrollaran los brotes, mientras que los bulbos seccionados formaron brotes en medios con bajas concentraciones o en ausencia de está hormona vegetal, así mismo se observó que el promedio de brotes por explante fue mayor en el caso de los bulbos seccionados.
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