Diagnóstico de hepatozoon spp. en perros (Canis familiaris) y sus vectores en áreas rurales de los Estados Lara y Yaracuy-Venezuela
Diagnosis of hepatozoon spp. in dogs (Canis familiaris) and its vectors from rural areas of Lara and Yaracuy States, Venezuela
María D. Forlano*,1 y Roy D. Meléndez*
* Área de Parasitología Veterinaria, Unidad de Investigación en Parasitología Veterinaria, Decanato de Ciencias Veterinarias (DCV). Universidad Centroccidental Lisandro Alvarado (UCLA). Cabudare. Venezuela
Correo-E: dalilaforlano@gmail.com
Resumen
El objetivo de este trabajo fue diagnosticar Hepatozoon spp. en perros de áreas rurales en algunos municipios de los estados Lara y Yaracuy, así como su relación con los potenciales artrópodos vectores involucrados en su transmisión. Babesia canis vogeli, Ehrlichia canis y en menor frecuencia Hepatozoon canis son los agentes parasitarios más importantes en caninos teniendo todos ellos como vector a Rhipicephalus sanguineus. Estos hemotrópicos infectan frecuentemente a los animales sin causarles sintomatología clínica y en otros casos les causan enfermedad de gravedad variable. La asociación de estos agentes es muy común, lo que favorece la gravedad de los síntomas clínicos. Además de R. sanguineus, otros géneros de garrapatas pueden ser encontradas parasitando perros, como Amblyomma e Ixodes. Durante el estudio se realizaron frotis sanguíneos de sangre periférica de la oreja de 300 perros y se colectaron 604 garrapatas por medio de extracción manual. Estos ixódidos fueron identificados taxonómicamente en el Laboratorio de Parasitología con la ayuda de claves dicotómicas y luego fueron sometidas a disección en busca de fases evolutivas de Hepatozoon spp. Los resultados fueron analizados a través de estadísticas no paramétricas indicando la presencia o ausencia de Hepatozoon spp. y la identificación de los vectores involucrados. Se observó Hepatozoon spp. en las muestras de sangre periférica de 11 de los perros estudiados, correspondiendo a tres perros del estado Lara y ocho al estado Yaracuy. En relación a los vectores, se identificaron en el estado Lara, 557 Rhipicephalus sanguineus, 11 Amblyomma ovale y 10 Ixodes spp. y en el estado Yaracuy solamente se diagnosticaron 26 especímenes de Amblyomma ovale. Es importante destacar la presencia de Hepatozoon spp. en áreas rurales donde no se identificó R. sanguineus.
Palabras clave: Hepatozoon, Amblyomma ovale, Ixodes, Rhipicephalus sanguineus, perro, zonas rurales, factores ambientales, Yaracuy, Lara
Abstract
]]> The purpose of this research was to diagnose Hepatozoon spp. in dogs from rural areas in some municipalities of the States of Lara and Yaracuy, Venezuela, and its relationship with potential arthropods vectors involved in its transmission. Babesia canis vogeli, Ehrlichia canis, and less frequently, Hepatozoon canis, are the most important hemoparasites of dogs, all having as a common vector Rhipicephalus sanguineus. These hemoparasites frequently infest both domestic and rural animals without overt clinical symptoms; in other cases, they cause diseases of varied severity. Coinfections by hemoparasites are very common, which favors the severity of clinical symptoms. Besides R. sanguineus, other tick genera like Amblyomma and Ixodes, can be found infesting dogs. To carry out this study, thin blood smears from peripheral ear veins of 300 dogs were performed; and 604 ticks were collected by manual extraction. These ixodids were taxonomically identified at the Parasitology Laboratory, with the help of dichotomous taxonomic keys. Then, they were subjected to dissections looking for evolutionary stages of Hepatozoon spp. Results obtained were analyzed through non-parametric statistics, showing the presence or absence of Hepatozoon spp. and the identification of the involved vectors. Hepatozoon spp. was found in samples of peripheral blood in 11 of the dogs studied, three from the State of Lara and eight from the State of Yaracuy. Regarding vectors, 557 Rhipicephalus sanguineus, 11 Amblyomma ovale and 10 Ixodes spp. were identified in Lara, whereas only 26 specimens of Amblyomma ovale were identified in Yaracuy. It is important to underscore the presence of Hepatozoon spp. in rural areas where R. sanguineus was not identified.Key words: Hepatozoon, Amblyomma ovale, Ixodes, Rhipicephalus sanguineus, dogs, rural areas, ambient conditions, Yaracuy, Lara
Introducción
La población rural canina de Venezuela está pobremente asistida respecto a programas de salud y control de enfermedades, los perros en esas áreas son considerados no solamente como mascotas, conviviendo en contacto con sus dueños, sino también como animales de trabajo, actuando como guardianes y muchas veces ayudando en el pastoreo. Debido al contacto cercano entre los humanos con los perros, tanto en áreas urbanas como rurales, la salud de estos animales debe ser evaluada para que no actúen como reservorios de enfermedades ni de ectoparásitos que puedan transmitir enfermedades a las personas. Por esto, es importante el estudio de las hemoparasitosis en perros y su relación con sus vectores.
Los perros son afectados por una gama de hemotrópicos y las especies más comúnmente diagnosticadas son: Babesia canis, Ehrlichia canis y Hepatozoon canis (O’Dwyer et al., 1997; Criado-Fornelio et al., 2003). Además de la existencia de una amplia variedad de especies vectoriales como las garrapatas, aumentar la posibilidad de transmisión de agentes patógenos al humano (Guglielmone et al., 1991).
La Hepatozoonosis es una enfermedad causada por el Hepatozoon canis (James, 1905), un protozoario transmitido principalmente por Rhipicephalus sanguineus (Christophers, 1907), posteriormente otros autores han involucrado otros géneros de ixódidos en la transmisión de este coccidio (Wenyon, 1931; Forlano et al., 2005,). En Venezuela, H. canis fue reportado por primera vez en Barquisimeto, estado Lara, como hallazgo histopatológico, cuando se observaron esquizontes en bazo (Bracho, 1984). En el estado Zulia, se reportó una parasitemia que oscilaba entre 1 y 35% en los 17 animales examinados, con alteraciones en la química sanguínea de caninos positivos a Hepatozoonosis (Parra y Arraga, 1996); y en el estado Aragua se reporta por primera vez la presencia de Hepatozoon canis con otros hemotrópicos en un paciente que asistió a una consulta veterinaria (Camacaro et al., 1997). A pesar de diversos estudios sobre este parásito todavía existen divergencias en cuanto a su patogenia (Criado-Fornelio et al., 2003). En los Estados Unidos, la enfermedad clínica es más grave que en otros países; investigadores de ese país (Vicent-Johnson et al., 1997) reportaron el hallazgo de una nueva especie de Hepatozoon, denominada Hepatozoon americanum, parásito que ocasiona cuadros clínicos graves con predominio de alteraciones musculares y óseas. La infección por este agente ya se ha diagnosticados en muchos países de América del Sur como Argentina, Brasil, Colombia, y ha sido caracterizado molecularmente como H. canis (Ardila et al., 2007; Eiras et al., 2007; Forlano et al., 2007).
El diagnóstico convencional de Hepatozoonosis en Venezuela es mediante la observación directa del parásito dentro de los neutrófilos o monocitos. Adicionalmente, existen métodos de biología molecular, como por ejemplo la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) que son considerablemente más sensibles para detectar infecciones causadas por H. canis, en las que la parasitemia es tan baja que no es visualizada mediante extendidos sanguíneos, como la reacción en cadena de la polimerasa o PCR (Inokuma et al., 2002, Criado-Fornelio et al., 2003, Forlano et al., 2007, Rey-Valeiron et al., 2012). En el estado Falcón, se caracterizó molecularmente este patógeno y se señala que el Hepatozoon canis es la especie que está presente en esa región (Criado-Fornelio et al., 2007, Rey-Valeiron et al., 2012).
Las enfermedades transmitidas por las garrapatas son una causa importante de morbilidad y mortalidad en perros en todo el mundo, siendo la garrapata marrón del perro, Rhipicephalus sanguineus, un vector de varios agentes patógenos, incluyendo A. platys, B. canis vogeli, B. gibsoni, E. canis, fiebre maculosa grupo (SFG) Rickettsia spp. y H. canis (Groves et al., 1975; O’Dwyer, 2011; Solano y Baneth, 2011). Estudios realizados en el Caribe han demostrado que la mayoría de los perros que se infectan comúnmente con patógenos transmitidos por garrapatas, no manifiestan signos clínicos o anomalías de laboratorio. Del mismo modo, los animales con evidencia de infecciones específicamente con A. platys y H. canis son en gran parte aparentemente sanos con sólo alteraciones analíticas ocasionales (Kelly et al., 2013).
En Venezuela, R. sanguineus se presenta con mayor frecuencia en perros de zonas urbanas, mientras que la especie A. ovale, se ha observado en mayor intensidad en perros de zonas rurales (Forlano et al., 2008), sugiriendo que estas especies pueden ser potenciales vectores de hepatozoonosis, ya que esta garrapata ha sido involucrada como vector en Brasil (Forlano et al., 2005). Otra forma de transmisión de este coccidio es vía transplacentaria (Murata et al., 1993, Criado-Fornelio et al., 2003). En Brasil, Forlano et al., (2007) diagnosticaron por primera vez infección transplacentaria en perros nacidos de padres experimentalmente infectados.
El conocimiento de la fauna ixodológica de perros en una determinada región es importante para adoptar medidas de control, tanto de las infestaciones como de las enfermedades transmitidas por ellas (Guglielmone et al., 2004; Debárbora et al., 2011). En Venezuela, varias especies de garrapatas se han encontrado parasitando animales silvestres y domésticos (Jones et al., 1972; Guerrero, 1996). La especie más asociada a los perros domésticos, principalmente en áreas urbanas y peri-urbanas, es la garrapata R. sanguineus (Flechtmann, 1990); mientras que perros criados en áreas rurales presentan preponderadamente las especies de Amblyomma, así como infestaciones mixtas (Manzanilla et al., 2002; Moissant et al., 2002; Forlano et al., 2005; 2008; Debárbora et al., 2011). Las garrapatas del género Amblyomma pueden transmitir
diversos agentes patógenos a perros y seres humanos. El objetivo del presente trabajo fue diagnosticar la presencia de Hepatozoon spp. en sangre periférica de perros y en sus vectores colectados en las áreas rurales estudiadas de los estados Lara y Yaracuy, Venezuela. ]]> Materiales y MétodosÁrea de estudio
Se seleccionaron varios municipios con características urbanas y rurales como: Palavecino LN 10° 1’59’’, LW 69° 15’48’’; Iribarren LN 10° 01.329, LW 69° 15.733, Andrés Eloy Blanco LN 9° 44’49’’, LW 69° 39’27’’, del estado Lara; y el municipio de Nirgua LN 10° 9’6.24’’, LW 68° 33’58.92’’, del estado Yaracuy. Regiones donde se presentan precipitaciones promedio anuales de 450 mm a 800 mm, humedad relativa que varía en promedio de 65% a 80% y temperatura media anual que fluctúa entre 19 y 29°C con variaciones mínimas durante el año. En estas localidades se realizaron visitas mensuales y se realizó un muestreo aleatorio de la población canina de cada región.
Toma de muestras de sangre
Se seleccionó una muestra aleatoria, (Tashakkori y Teddlie, 1998), la cual estuvo constituida por 300 perros, de los cuales 230 eran del estado Lara y 70 del estado Yaracuy. La mayoría fueron perros adultos, mestizos de ambos sexos. De cada animal seleccionado se realizó la extracción de sangre periférica de un pequeño vaso capilar del pabellón auricular, con la finalidad de confeccionar frotis de capa fina. Estos frotis se secaron al aire y fueron fijados en metanol por 3 min, para ser transportados al Laboratorio de Parasitología Veterinaria del Decanato de Ciencias Veterinarias, ubicado en la Universidad Centroccidental “Lisandro Alvarado” (UCLA), estado Lara Venezuela, donde se realizó la coloración de cada frotis y posterior diagnóstico de cada uno de ellos con la ayuda de microscopio óptico (Olympus 31X) y con objetivo de 100x. En este estudio no se consideró la raza ni sexo de los animales debido a que estas variables no son relevantes en la presentación de la enfermedad (O’Dwyer et al., 2011).
Colecta e Identificación de Garrapatas
A todos los perros se les realizó un examen clínico y palpación en todo su cuerpo con especial atención en la región de las orejas, el cuello y las patas, para la detección de garrapatas, ya que son las zonas de preferencia de estos vectores. Las especies encontradas fueron extraídas y colocadas en envases plásticos debidamente identificadas con el nombre de cada animal, llevadas al laboratorio donde se lavaron y se secaron. Posteriormente, los especímenes colectados fueron clasificadas según las claves taxonómicas (Aragão y Fonseca, 1961; Guerrero, 1996), esta identificación se realizó con la ayuda de la lupa estereoscópica para la observación de características morfológicas de cada ejemplar.
Procesamiento de Muestras
Los frotis sanguíneos fueron coloreados con Hemacolor® que es una coloración rápida. Posteriormente, cada lámina fue examinada al microscopio óptico utilizando objetivo de inmersión (100x), principalmente en la región de la franja del frotis, área donde se concentran las células parasitadas.
Las garrapatas colectadas durante el estudio se identificaron taxonómicamente y posteriormente se les realizó la disección con la ayuda de un microscopio estereoscópico, utilizando tijera oftálmica curva de punta fina y pinzas entomológicas.
]]> Después de la disección, cada garrapata fue colocada en una lámina con solución salina a 0,75% y la incisión inicial se realizó en el surco marginal, contornando totalmente el idiosoma. El tegumento dorsal fue separado exponiendo la cavidad general del ixodido, la cual fue hidratada con solución fisiológica fría (± 6 °C), con la finalidad de aumentar la consistencia de los órganos y facilitar la búsqueda de ooquistes, que son las formas evolutivas de Hepatozoon canis que están presentes en la cavidad celomática. Posterior a la disección, cada ejemplar se examinó al microscopio de contraste de fase, para la identificación de posibles formas evolutivas de este coccidio.Análisis de los Datos
El análisis de los resultados de la observación directa con microscopía óptica (MO) de los hemoparásitos encontrados fue mediante una estadística descriptiva no paramétrica (Petrie y Watson, 2006).
Resultados y Discusión
De los 300 perros examinados por frotis sanguíneos se observaron gamontes de Hepatozoon spp. en células polimorfonucleares en 3,67% de las muestras analizadas (11/300), de los cuales tres fueron diagnosticados en perros en el estado Lara y ochos en el estado Yaracuy, observándose que es bajo la presencia de este coccidio en estas áreas, situación que puede estar influenciada por el método diagnóstico utilizado, el cual es poco sensible; como lo observado en otros estados de Venezuela donde se han reportado datos similares que oscilan de 4,84 a 5,92% (Rey-Valeirón, 2008, Rey-Valeirón et al., 2012.). En Brasil, en el estado de Río de Janeiro y Sao Paulo se han reportado porcentajes similares a los reportados en este estudio en áreas rurales (O’Dwyer et al., 2001, Forlano et al., 2005; De Sa et al., 2007).
En este estudio se observó en el área rural del estado Yaracuy, la ausencia del principal vector de Hepatozoon, la garrapata marrón del perro (R. sanguineus) y el mayor porcentaje de perros positivos a este coccidio (11,4%). En el estado Lara, se encontró 1,30% de prevalencia de Hepatozoon spp. en perros que presentaban una infestación mixta de garrapatas (R. sanguineus y A. ovale). Algunos estudios coinciden con estos resultados, en los cuales han reportado la presencia de este parásito en otros géneros de ixódidos como por ejemplo: A. ovale y R. (Boophilus) microplus (Forlano et al., 2005, Lima et al., 2011), lo que permite inferir que en estas áreas rurales donde no se observa R. sanguineus, el vector que puede estar involucrado en la transmisión pudiera ser otro género, como ya se ha reportado en otros países (Forlano et al., 2005).
En relación a los vectores encontrados que parasitan naturalmente a los caninos muestreados en el estado Lara, se diagnosticaron 557 Rhipicephalus sanguineus, 11 Amblyomma ovale, y 10 ejemplares de Ixodes sp. En el estado Yaracuy se encontraron únicamente, 26 especímenes de A. ovale, lo que representa un total de 604 garrapatas identificadas, distribuidas de la siguiente forma: R. sanguineus 92,21%; A. ovale 6,13% y del género Ixodes de 1,66%, demostrando que no sólo R. sanguineus es la garrapata que infesta naturalmente los perros domésticos en las áreas estudiadas (Tabla 1).
Tabla 1. Especies de garrapatas encontradas infestando naturalmente a caninos y su distribución geográfica
| Localidad (municipio) | ]]> R. sanguineus | A. ovale | Ixodes | Total |
| Terepaima (Palavecinos) | 72 | 0 | 0 | 172 |
| Sarare (Andrés Eloy Blanco) | ]]> 78 | 11 | 0 | 89 |
| Rio Claro (Iribarren) | 307 | 0 | 10 | 317 |
| Nirgua (Nirgua) | ]]> 0 | 26 | 0 | 26 |
| Total | 557 | 37 | 10 | 604 |
Se observó un mayor porcentaje de la garrapata marrón del perro (R. sanguineus), en los municipios del estado Lara, en localidades con características semi-urbanas ideales para su desarrollo. Esta garrapata presenta el hábito de desarrollar su ciclo de vida en viviendas o edificios habitados por perros, lo que resulta en una colonización de casi toda la región (Guglielmone et al., 2003). En Venezuela, se ha identificado morfológicamente a la garrapata marrón del perro como R. sanguineus; sin embargo, existen diferencias morfológicas y genéticas encontradas entre poblaciones de este especie en Argentina y Brasil, lo que sugiere que en Sudamérica estarían presentes al menos dos especies de Rhipicephalus (Moraes-Filho et al., 2011).
]]> Estos resultados demuestran que A. ovale, presenta una distribución en zonas geográficas con baja temperatura y un sistema montañoso de selva tropical (Nirgua y Sanare); zonas con características eco-biogeográficas que favorecen el desarrollo de esta especie de garrapata, ya que necesita de ambiente húmedo y bajas temperaturas. La A. ovale fue la segunda especie mas frecuente encontrada parasitando naturalmente los perros en este estudio ,demostrando que su presencia facilita la invasión de este artrópodo al interior de las casas, y se convierte en un potencial vector de algunas zoonosis, una vez que esta especie se ha encontrado parasitando los seres humanos (Guglielmone et al., 2006).Estos resultados coinciden con los reportados en zonas rurales en Brasil donde en algunas áreas no se encontró R. sanguineus parasitando perros sino A. ovale y los animales fueron diagnosticados positivos a Hepatozoon canis (Forlano et al., 2005). Con este estudio se presume que también en Venezuela, en áreas rurales, donde no se reportó la presencia de R. sanguineus, puede estar involucrado un nuevo vector para Hepatozoon spp.
En cuanto a la presencia de Ixodes spp. en perros domésticos, es el primer reporte de esta especie en Venezuela, lo que demuestra la importancia del estudio de estos Ixodidos, una vez que este género está involucrado en la transmisión de enfermedades rickettsiales (Bermúdez et al., 2009). En estudios anteriores realizados en el país, se ha reportado esta especie parasitando únicamente animales silvestres y aves (Jones et al., 1972; Guerrero, 1996). Estos resultados se asemejan a los reportados en Argentina, donde se encontró en perros de áreas rurales la mayor frecuencia de R. sanguineus y en menor grado A. ovale, confirmando que son potenciales vectores de microorganismos patógenos para los perros y humanos, debido a la alta prevalencia registrada. Con esto, se evidencia la relevancia de aplicar métodos efectivos para su control (Debárbora et al., 2011).
En este estudio se demuestra que los perros domésticos de las áreas rurales en Venezuela están infestados naturalmente con más de una especie de ixódidos, situación que genera una alerta epidemiológica por el papel de estos artrópodos en la transmisión de enfermedades zoonótica.
Los ixódidos colectados que parasitan a los perros fueron ejemplares adultos machos y hembras, localizados a nivel de: cabeza, orejas y dorso. Estos resultados coincide con lo señalado en otros estudios donde la distribución en el hospedador es básicamente en las mismas regiones del cuerpo (Manzanilla et al., 2002; Moissant et al., 2002; Forlano et al., 2008), situación que se debe tomar en cuenta al momento de aplicar baños garrapaticidas, es decir, hacer énfasis en estas zonas para el control de estos ectoparásitos en las mascotas.
En relación al diagnóstico de Hepatozoon spp. en los vectores, no se observaron formas evolutivas de este coccidio.
Conclusiones
Se diagnosticó la presencia de Hepatozoon spp. en 3,66 % de los perros de áreas rurales. En relación a los vectores se identificaron R. sanguineus, A. ovale e Ixodes spp. en los estados Lara y Yaracuy y se identificó garrapatas adultas de A. ovale. En este estudio se reporta el primer hallazgo de Ixodes spp. infestando naturalmente perros domésticos de áreas rurales en Venezuela.
Agradecimientos
Al Consejo de Desarrollo Científico, Humanístico y Tecnológico (CDCHT) de la Universidad Centroccidental “Lisandro Alvarado” (UCLA) por el apoyo financiero para el desarrollo de esta investigación, según proyecto Nº 009-VE-2007.
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