0,05) entre los mestizos Bos taurus y Bos taurus x Bos indicus, con valores de seropositividad de 25,9% y 18,9%, respectivamente. Los animales seropositivos incluyen a 36 de 152 (23,7%) vacas adultas, 8 de 53 (15,1%) novillas y 0 de 8 (0,0%) becerras. No hubo diferencia significativa entre la seropositividad y la edad (P>0,05). No se encontró reactividad cruzada entre los antígenos de N. caninum por la técnica de ELISA y los antígenos de T. gondii usando la técnica inhibición de la hemoaglutinación en los sueros de los bovinos infectados naturalmente.]]>
0.05) by breed effect in Bos taurus (25.9%) and Bos taurus x Bos indicus crosses (18.9%). The seropositivity animals included 36 of 152 (23.7%) adult cows, 8 of 53 (15.1%) heifers, and 0 of 8 (0.0%) calves. The association between seropositivity and age was no significant differences (P>0.05). No crossreactivity was found between N. caninum antigens for the ELISA and T. gondii antigens for the hemaglutination inhibition test in sera of cattle with natural infection.]]>
Diagnóstico serológico de Neosporosis Bovina en fincas de la región de Tucacas, estado Falcón, Venezuela
Serological diagnosis of Bovine Neosporosis in farms from Tucacas, Falcon state, Venezuela
José G. Fernández Fernández
1*y Francisco García 2†1 Instituto Nacional de Investigaciones Agrícolas (INIA), Unidad de Sanidad Animal, Laboratorio de Parasitología. Maracay, Aragua, Venezuela. *Correo electrónico: jgff1969@gmail.com
2 Universidad Central de Venezuela, Facultad de Ciencias Veterinarias, Departamento de Parasitología. Maracay, Aragua, Venezuela.
RESUMEN
Neospora caninum es un protozoario considerado una de las principales causas de abortos bovinos a nivel mundial y un importante agente que induce mortalidad neonatal en bovinos, ovejas, cabras, venados y caballos en muchos países. La presencia de anticuerpos a N. caninum es indicativo de infección y pueden ser detectados en sangre bovina con pruebas serológicas tales como: inmufluorescencia indirecta, prueba de aglutinación y el inmunoensayo enzimático. El presente estudio se realizó para determinar la prevalencia de anticuerpos a N. caninum en ocho fincas de ganadería doble propósito ubicadas en la región de Tucacas, estado Falcón, Venezuela. La prevalencia usando la técnica de ELISA fue de 20,6%. Por tipo racial, no se encontraron diferencias estadísticamente significativas (P>0,05) entre los mestizos Bos taurus y Bos taurus x Bos indicus, con valores de seropositividad de 25,9% y 18,9%, respectivamente. Los animales seropositivos incluyen a 36 de 152 (23,7%) vacas adultas, 8 de 53 (15,1%) novillas y 0 de 8 (0,0%) becerras. No hubo diferencia significativa entre la seropositividad y la edad (P>0,05). No se encontró reactividad cruzada entre los antígenos de N. caninum por la técnica de ELISA y los antígenos de T. gondii usando la técnica inhibición de la hemoaglutinación en los sueros de los bovinos infectados naturalmente.
Palabras claves: Neospora caninum, diagnóstico serológico, Venezuela.
ABSTRACT
]]> Neospora caninum is a protozoan parasite which is a major cause of bovine abortions worldwide and an important agent that induces neonatal mortality in cattle, sheep, goats, deer and horses in many countries. N. caninum antibodies in bovine blood can be demonstrated by serological assays such as the indirect fluorescent antibody test (IFAT), direct agglutination test, or enzyme linked immunosorbent assay. The present study was done to determine the prevalence of antibodies to N. caninum in eight dual purpose cattle farms in Tucacas region, Falcon state, Venezuela. The prevalence of N. caninum in the ELISA was 20.6%. There was no significant differences (P>0.05) by breed effect in Bos taurus (25.9%) and Bos taurus x Bos indicus crosses (18.9%). The seropositivity animals included 36 of 152 (23.7%) adult cows, 8 of 53 (15.1%) heifers, and 0 of 8 (0.0%) calves. The association between seropositivity and age was no significant differences (P>0.05). No crossreactivity was found between N. caninum antigens for the ELISA and T. gondii antigens for the hemaglutination inhibition test in sera of cattle with natural infection.Key words: Neospora caninum, serological diagnosis, Venezuela.
Recibido: 19/09/13 Aprobado: 10/09/14
INTRODUCCIÓN
La neosporosis bovina es una enfermedad parasitaria causada por un protozoario Apicomplexa, de la subclase Coccidia denominado Neospora caninum. Hasta 1988, la enfermedad fue confundida con toxoplasmosis, debido a la estrecha relación que existe entre Toxoplasma gondii y N. caninum, desde el punto de vista morfológico y biológico (Dubey y Lindsay, 1996; Dubey et al., 2007). Dubey et al. (1998) se pudo completar el ciclo de vida del parásito, identificando al perro (Canis familiaris) como su hospedador definitivo, reportándose por Gondim et al. (2004) que los zorros (Canis latrans) también son hospedadores definitivos del parásito. Como hospedadores intermediarios se han señalado a bovinos, ovinos, caprinos, equinos, venados, el mismo perro, otros mamíferos e inclusive las aves de corral (Costa et al., 2008).
N. caninum es reconocido como una importante causa de abortos en vacas lecheras alrededor del mundo, ocurriendo estos desde los tres meses de gestación hasta el final de la misma, siendo la mayor incidencia entre los cinco y seis meses. El impacto económico de esta parasitosis en la industria láctea es sustancial y va a depender de los costos indirectos, tales como: la ayuda profesional y costos asociados con el establecimiento del diagnóstico, la recría, incremento en el tiempo de lactación, posibles pérdidas en la producción de leche y el costo del reemplazo si las vacas que abortan son eliminadas, así como el valor de los fetos perdidos (Thurmond y Hietala, 1996; Jenkins et al., 2000; Dubey et al., 2006; Dubey et al., 2007).
La neosporosis ha sido reportada en Australia, Canadá, Dinamarca, Reino Unido, Irlanda, Israel, Japón, México, Los Países Bajos, Nueva Zelanda, Sur África, Suecia, Estados Unidos, Argentina, Bélgica, Alemania, Hungría, Italia, España y Zimbabwe (Dubey y Lindsay, 1996). Los estudios seroepidemiológicos sobre esta parasitosis realizados a nivel mundial han indicado resultados muy variables (Dubey y Lindsay, 1996; Gondim et al., 1999; Suteeraparp et al., 1999; Atkinson et al., 2000; Sanderson et al., 2000; Corbellini et al., 2002; Moore et al., 2003).
En nuestro país son pocos los estudios seroepidemiológicos realizados sobre esta parasitosis, pudiéndose señalar para el momento de esta investigación, los reportes de García et al., 2003; Lista, 2004; León et al., 2007. Es por esto y debido al impacto económico de la enfermedad en la ganadería bovina y para lograr establecer pautas en la aplicación de estrategias de control adecuadas para evitar la infección y/o transmisión de N. caninum en los rebaños bovinos en nuestro país, es que se justifica la realización de esta investigación, en una zona ganadera del estado Falcón y de esta forma aportar más datos sobre la seropositividad de la neosporosis bovina en Venezuela.
MATERIALES Y MÉTODOS
Área de estudio
]]> Para determinar la presencia de anticuerpos anti-N. caninum, se realizó un muestreo en ocho fincas de la región de Tucacas, sector Las Lapas, municipio José Laurencio Silva, ubicado geográficamente a 68°, 00´ - 68°, 30´ longitud oeste y 10°, 30´ - 11°, 00´ latitud norte y el mismo está delimitado al norte por el Golfo Triste; al noroeste con el municipio Monseñor Iturriza; al suroeste con el municipio Palma Sola, al sur con el estado Yaracuy y al este con el Mar Caribe. En cuanto a la región de Tucacas, ésta se encuentra a 10°, 45´ latitud norte y 69°, 26´ longitud oeste, donde predomina el bosque seco tropical, con un periodo de lluvia desde abril hasta diciembre, y otro de sequía desde enero hasta marzo (García, 2000). Una de las actividades económicas predominante en esta región es la ganadería vacuna, desarrollada en unidades de producción de tamaños variables. La producción de leche se realiza, principalmente, en fincas doble propósito no tecnificadas, conformadas por rebaños de pequeño tamaño, constituidos principalmente por un tipo de animal mosaico, producto de cruces no específicos entre Bos taurus y Bos indicus (Sandoval et al., 1989).Población muestral
Para determinar el tamaño de la muestra y estimar la seropositividad de neosporosis bovina en las ocho fincas de la región de Tucacas, se siguió la fórmula del muestreo aleatorio simple (OPS, 1979). En base a trabajos previos realizados en Venezuela (Lista, 2004; León et al., 2007) con un promedio de prevalencia de 14%, una precisión absoluta del estimador del 5% a un nivel de confianza del 95%, se obtuvo un tamaño de muestra de 213 animales pertenecientes a hembras de tipo racial entre mestizas B. taurus y B. taurus acebuadas, distribuidas en ocho fincas doble propósito. Los animales fueron estratifi cados por edad conformándose tres grupos: becerras (hasta 5 meses), mautasnovillas (6 a 24 meses) y vacas (mayores de 24 meses), seleccionándose de forma aleatoria simple. Es importante señalar, que la ocurrencia o no de abortos no fue considerado como criterio limitante para la selección de las fincas y/o animales. Para esta investigación se consideró igual proporción de muestras por finca evaluada en función al total de su población.
Obtención de las muestras
La extracción de sangre en los bovinos se realizó mediante punción de la vena yugular, recolectada en tubos al vacío, estériles y sin anticoagulante. Luego de la centrifugación, los sueros obtenidos se alicuotaron y congelaron a -20ºC hasta su análisis. Se aplicó una encuesta a los propietarios de las fincas para obtener los datos relacionados con los animales (tipo racial y edad).
Procesamiento de las muestras
El análisis de las muestras séricas se realizó en el Laboratorio de Diagnóstico de la empresa C.A., Laboratorios Asociados. Se detectó la presencia de anticuerpos anti-Neospora caninum utilizando el estuche comercial de ELISA (HerdChek®: anti-Neospora caninum del Laboratorio IDEXX), basado en antígenos de taquizoitos sonicados de N. caninum, cepa NC- 1. El procedimiento se llevó a cabo siguiendo las instrucciones del fabricante presentes en el manual del kit.
Para demostrar la posible reacción cruzada entre N. caninum y T. gondii, se evaluaron los sueros positivos a anticuerpos anti-Neospora caninum con un estuche comercial que detecta anticuerpos anti T. gondii por la técnica de inhibición de la hemoaglutinación (Toxotest-HAI ®: anti-Toxoplasma gondii de Laboratorios Wiener). El procedimiento se llevó a cabo siguiendo las instrucciones del fabricante presentes en el manual del kit.
Análisis estadístico
El análisis descriptivo se llevó a cabo posterior a la tabulación de los datos, la elaboración de cuadros, gráficos y tablas de contingencia para determinar la seropositividad general, por tipo racial y por edad.
]]> En el análisis inferencial, la seropositividad de la infección se correlacionó con la edad de los animales y tipos raciales, analizándose la significancia estadística de sus asociaciones o independencias por la prueba de jicuadrado (c2) con un 95% de confianza. Para el análisis de los datos, se utilizó el paquete estadístico Statistix 7 para Windows, versión 7.0 del año 2000.RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Existen un gran número de patologías reproductivas o alteraciones de varios orígenes que interrumpen la preñez en la hembra bovina, lo cual se traduce en pérdidas económicas anuales relevantes para la finca. Las causas infecciosas constituyen una de las más importantes y dentro de ellas podemos citar a los agentes virales, bacteriales, micóticos y parasitarios (Bermúdez, 2001); y dentro de los agentes parasitarios ha emergido en los últimos años el protozoario N. caninum como un importante causal de abortos en grandes rumiantes en muchos países, considerándose actualmente como un significante problema de producción a nivel mundial (Dubey y Lindsay, 1996).
En nuestro país, hasta un 5% de las preñeces bovinas pueden terminar anualmente en abortos. Para algunos hatos, la tasa puede alcanzar valores de 10% y la consideran aceptable debido al hecho de que en la finca coexisten varias enfermedades enzoóticas como son la leptospirosis, brucelosis, virus de la rinotraqueitis infecciosa bovina (IBR), virus de la diarrea viral bovina (BVD) y algunos hematozoarios (Bermúdez, 2001), por lo cual deben realizarse los respectivos diagnósticos.
Con respecto a la neosporosis y a pesar de su diseminación global, existe limitada información disponible concerniente a la distribución y modo de transmisión de esta parasitosis en Centro y Sudamérica. La prevalencia en diversas razas bovinas depende del país, región y tipo de prueba serológica utilizada, llegándose a determinar en algunos rebaños de vacas lecheras sobre el 87% de seropositividad (Dubey y Lindsay, 1996; Dubey, 1999; Dubey, 2003).
En este trabajo, la seropositividad general de neosporosis bovina fue de 20,66%, detectándose animales seropositivos en todas las fincas (Figura). Datos similares se han reportado en cinco estados al noroeste de los Estados Unidos, donde de un total de 2.585 vacas provenientes de 55 rebaños se obtuvo un 23% de seropositividad, aplicando la técnica de ELISA competitiva (Sanderson et al., 2000). Gondim et al. (1999), en el estado de Bahia, Brasil reportaron un 14,09% de animales seropositivos, provenientes de 447 bovinos de 14 fincas lecheras, usando la técnica de IFI. Igualmente, en Río Grande del Sur, Brasil, Corbellini et al. (2002) reportaron una prevalencia de 23,3% en vacas Holstein con antecedentes de abortos y un 8,3% en aquellas sin historia de abortos.
En Paraguay, Osawa et al. (2002), reportaron un 29,8% de bovinos seropositivos a N. caninum por la técnica de ELISA, observándose que la mayor proporción de animales positivos fueron aquellos que habían abortado. En Argentina, Moore et al. (2003), obtuvieron valores de prevalencia de neosporosis en ganadería de carne y leche por IFI, cuyos animales tenían o no antecedentes de enfermedad reproductiva. Los valores obtenidos por estos autores fueron de 16,6% y 4,7%, correspondiente a animales asintomáticos de fincas lecheras y de carne respectivamente, mientras que en animales con antecedentes de abortos fue de 43,1% y 18,9% en el mismo orden. Así mismo, en un trabajo realizado en vacas lecheras que abortaron, se estableció por la técnica de IFI una positividad de 64,5%.
En México, García-Vázquez et al. (2005), reportaron valores de seroprevalencia de 59% por la técnica de ELISA. De igual forma, Morales et al. (2001) determinaron una seroprevalencia de 72% en vacas pertenecientes a hatos con tasa anuales de abortos entre 13% y 30% (abortos epizoóticos) y 36% en vacas pertenecientes a hatos con tasas de aborto hasta de 12% anual (aborto enzoótico). En el sur de California, en un rebaño de 240 vacas productoras de leche se determinó a través de ELISA, un 80% de seroprevalencia, de los cuales 40% abortaron desde el cuarto mes de gestación (Jenkins et al., 2000).
En Centroamérica, específicamente en Costa Rica, un estudio realizado por Romero y Frankena (2003) en 20 fincas lecheras con antecedentes epidemiológicos de seropositividad a N. caninum, la seroprevalencia intra-rebaño osciló entre 25% y 70,5%.
]]> Entre los estudios seroepidemiológicos de neosporosis bovina hechos en nuestro país destaca el realizado por Suárez y Maldonado (2012), donde reportan una seropositividad general de 17,23% de 2.542 bovinos doble propósito estudiados, ubicados en cinco municipios del estado Lara; de igual forma señalaron que, no existían diferencias significativas entre grupos etarios ni sexo de los animales; al mismo tiempo sugieren, que la transmisión de N. caninum en los rebaños analizados son predominantemente por vía transplacentaria. Obando et al. (2010), realizaron un trabajo en un rebaño bovino en el que reportaban abortos endémicos de un 11% en vacas y 20% en novillas, con 4,5 meses de edad de gestación en promedio, analizando en total 169 vacas, de las cuales 87 tenían registros de abortos, y 82 no presentaban tal signo.En el primer grupo se encontró que el 54% presentaban anticuerpos específicos contra el protozoario, mientras que el otro grupo reveló un 34% de infección. Ellos concluyeron que había una asociación importante entre la condición de infección y la ocurrencia de los abortos. El mismo año, Escalona et al. (2010), evaluaron 408 vacas y 142 novillas de 51 fi ncas ubicadas en el municipio Bolívar del estado Yaracuy y obtuvieron un 17,09% de seropositividad por animal y una frecuencia de infección por fincas de 74,51%; concluyeron igual que el grupo de Suárez y Maldonado (2012), que la transmisión vertical del parásito predomina en la región estudiada, y que por otra parte, la prevalencia del microorganismo está influenciada por el sistema de producción.
León et al. (2007), reportaron una prevalencia de 13% en el municipio San José de Guaribe del estado Guárico y 17% en el Sur de Aragua, trabajando con animales doble propósito; si bien, se detectaron animales seropositivos a N. caninum en ambas regiones, los productores de estas fincas no reportaron problemas reproductivos, ni historia de abortos. Lista (2004), reportó una seropositividad general de 11,32% en 15 fincas, ubicadas en ocho estados del país. Otro estudio hecho por García et al. (2003), evidenció uno de los primeros hallazgos serológicos en Venezuela, reportando que cinco de diez vacas con antecedentes de abortos resultaron seropositivas al parásito, dichos animales se encontraban ubicados en una finca del municipio Morán del estado Lara.
Con relación a la edad, la seropositividad aumentó proporcionalmente con la longevidad del animal, no existiendo diferencias estadísticamente signifi cativas (P>0,05) entre esta variable y la presencia de anticuerpos (Cuadro 1); estos datos coinciden por los presentados por Locatelli- Dittrich et al. (2001), los cuales señalan que un 37% de vacas adultas, 25,5% de novillas y dos muestras precalostrales fueron seropositivas al parásito. Otro resultado similar presentó Kashiwazaki et al. (2004), reportando mayor seropositividad en vacas (60%) que en becerros (20%).
De igual forma, Bartels et al., (2006), encontraron que el riesgo de ser seropositivo incrementa con la edad. Esto puede deberse a la exposición postnatal de los bovinos con fuentes contaminadas con ooquistes esporulados del parásito. En cuanto a la raza del animal, los grupos B. taurus y B. taurus acebuado presentaron valores de seropositividad de 25,93% y 18,87% respectivamente, no encontrando diferencias estadísticamente signifi cativas (P>0,05) entre esta variable y la infección por N.caninum (Cuadro 1).
Este resultado coincide con el de Osawa et al. (2002) en Paraguay, quienes trabajaron con ganadería de carne y leche encontrando que la infección está presente en animales de ambos propósitos. Así mismo, Moore et al. (2003), encontraron una distribución similar entre los seroreaccionantes del grupo B. taurus y B. indicus, en la provincia de Corrientes, Argentina. Por último, del total de los 44 animales seropositivos a N.caninum, se obtuvo un 100% de seronegatividad a T.gondii, por la técnica de inhibición de la hemoaglutinación; estos datos se correlacionan con los de Dubey et al. (1998), quienes reportan que de 63 sueros positivos a N.caninum, solo tres reaccionaron a T. gondii; y en Tailandia, Suteeraparp et al. (1999), no encontraron reacción cruzada entre los antígenos de ambos parásitos en sueros de bovinos con infección natural a Neospora (Cuadro 2).
CONCLUSIONES
El valor de seropositividad general de anticuerpos anti-Neospora caninum en las ocho fincas doble propósito examinadas en la región de Tucacas, estado Falcón correspondió a 20,66% en animales de rebaños semiestabulados con distintos grados de cruce B. taurus y B. taurus acebuados, con valores en ambos grupos de 25,93% y 18,87% respectivamente. En cuanto a la variable edad, la seropositividad fue aumentando proporcionalmente con la longevidad del animal. Con relación a la reactividad cruzada entre los antígenos de N. caninum y T.gondii, se determinó que ninguno de los animales seropositivos al primero, reaccionaron específicamente con los determinantes antigénicos del segundo. Se detectaron animales seropositivos a N.caninum en todas las fincas que se muestrearon.
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