Gabriel Parra-Henao1,2, Carlos Mario Garcia Pajón2 & José Miguel Cotes Torres2
1 Instituto Colombiano de Medicina Tropical-CES, Medellín.
2 Universidad Nacional de Colombia, Sede Medellín.
*Autor de correspondencia: gparra@ces.edu.co
Se realizaron bioensayos con los extractos etanólicos de las especies vegetales Annona muricata, Mammea americana, Melia azedarach, Ricinus communis y los insecticidas nicotina y deltametrina sobre ninfas y huevos de R. prolixus y R. pallescens. Se determinó la toxicidad, repelencia y actividad ovicida. Los valores mas bajos de CL50 expresados en %p/p obtenidos respectivamente para R. prolixus y R. pallescens fueron: A. muricata 1,02 y 1,74; M. azedarach 1,77 y 1,74. El extracto de M. americana presentó menor actividad insecticida sobre las dos especies de triatominos: CL50 4,33 y 2,61. La repelencia osciló entre 51 y 58% y la eclosión de los huevos fue inhibida entre 10 y 25%. Los resultados de toxicidad se consideran poco promisorios por ser superiores a la concentración máxima de 5.000 ppm recomendada por la GTZ.
Palabras claves: Rhodnius, Enfermedad de Chagas, Insecticidas Botánicos, Colombia
Insecticidal activity of vegetal extracts on Rhodnius prolixus and Rhodnius pallescens (Hemiptera: Reduviidae).
SUMMARY
Extracts from vegetal species Annona muricata, Mammea americana, Melia azedarach, Ricinus communis and the insecticides nicotine and delthametrin were tested for repellent, ovicidal and insecticidal properties against eggs and nymphs of Rhodnius prolixus and R. pallescens. The lowest values of LC50 in %W/W to R. prolixus and R. pallescens was: A. muricata 1.02 - 1.74 and M. azedarach 1.77 - 1.74. The extract of M. americana had a weaker effect on the triatominae species LC50 4.33 and 2.61. Repellency fluctuated between 51- 58% and hatching was inhibited between 10- 25%. Toxicity tests were considered less promising as being above the maximum concentration recommended by GTZ.
]]> Keywords: Rhodnius, Chagas disease, insecticides, botanical, vector control, Colombia.Recibido el 30/08/2006 Aceptado el 25/04/2007
INTRODUCCIÓN
En Colombia las especies Rhodnius prolixus, Stâl 1859 y Rhodnius pallescens, Barber 1932 (Hemiptera: Reduviidae) se consideran entre los principales vectores de la enfermedad de Chagas a nivel silvestre y doméstico (Lent & Wygodzinsky, 1979; Angulo & Sandoval, 2001); estas especies se encuentran distribuidas principalmente en el norte, centro y oriente del país (Guhl et al., 2007).
La enfermedad de Chagas o tripanosomiasis americana es una enfermedad parasitaria crónica causada por el protozoario flagelado Trypanosoma cruzi (Kinetoplastida: Trypanosomatidae), es considerada un problema de salud pública en la zona oriental de Colombia que afecta el 7% de la población y ocasiona altos costos económicos en el tratamiento de la cardiopatía chagásica crónica (Guhl & Nicholls, 2001). Los estudios epidemiológicos realizados por el Ministerio de la Protección Social y la Dirección General de Salud Pública de Colombia estiman entre 700.000 a 1.200.000 personas infectadas y 8.000.000 más en riesgo de adquirir la infección (Padilla, 2005). Desde el punto de vista social y económico, esta enfermedad se considera la más importante del continente americano (World Bank, 1993).
Debido a que los medicamentos solo son efectivos en la fase aguda de la enfermedad y a la ausencia de vacunas para realizar tratamientos a gran escala, se ha considerado como una alternativa viable la interrupción de la transmisión de la enfermedad controlando los vectores mediante insecticidas y mejorando las condiciones físicas de las viviendas rurales para eliminar el hábitat de los triatominos (Schofield, 1985).
La subfamilia Triatominae esta compuesta por 17 géneros, entre los cuales el género Rhodnius contiene especies de importancia epidemiológica como vectores de la enfermedad de Chagas. Rhodnius prolixus es considerado el principal vector en Colombia y Venezuela y R. pallescens en Panamá (Dujardin, Schofield & Panzera, 2002). En el control de las especies domiciliarias se utilizan insecticidas organoclorados, organofosforados, carbamatos y piretroides sintéticos. Actualmente en las campañas gubernamentales se emplean insecticidas piretroides por ser los más efectivos (Oliveira, 1984; Schofield, 1985; Zerba et al., 1987), destacándose los de tercera generación, que están enriquecidos con isómeros de mayor potencial insecticida. En el marco de las iniciativas regionales, la aplicación casi excluyente de estos productos como medio de control químico puede conllevar al riesgo latente de desarrollo de mecanismos de resistencia (Zerba, 1999), y contaminación ambiental (OMS, 2002). Se conocen más de 200 especies de artrópodos de importancia médica que presentan resistencia a muchos de los pesticidas contemporáneos y requieren para su control materiales más potentes, que originan mayores costos económicos y ambientales (Brown, 1986).
En triatominos han sido realizados reportes de resistencia a insecticidas; Picollo et al. (2005), reportan altos niveles de resistencia a la deltametrina, betacipermetrina, betaciflutrina y lambdacihalotrina en la especie Triatoma infestans de la región norte de Argentina; en Colombia se halló menor susceptibilidad de R. prolixus al Malatión, explicada con base a un elevado metabolismo de carboxiesterasas (Sandoval et al., 2000). Para minimizar estos riesgos es necesario desarrollar otras estrategias de manejo y tecnologías que permitan obtener nuevas alternativas químicas o biológicas para el control de triatominos.
Una alternativa viable para el control de estos insectos surge del concepto de manejo integrado de plagas, incluyendo controladores biológicos, manejo ambiental y la utilización de insecticidas de origen biológico que proporcionan modos de acción novedosos y reducen el riesgo de resistencia cruzada (Arnanson et al., 1989). En Brasil y Paraguay se han realizado investigaciones orientadas al estudio de la respuesta de los triatominos y del parásito T. cruzi a algunos productos naturales. García et al. (2000), encontraron que la azadirachtina A obtenida de los frutos de Melia azedarach (Meliaceae) tiene efectos tóxicos sobre R. prolixus, hallando que los componentes mayoritarios de esta especie vegetal no solo afectan los triatomínos sino también el desarrollo del T. cruzi en estos vectores; en forma análoga encontraron que algunas lectinas del tipo de las aglutininas obtenidas de Ricinus communis actúan sobre el ducto gastrointestinal de la especie R. prolixus. Otros grupos de investigación (Schmutterer, 1987) han estudiado la toxicidad de los aceites y extractos vegetales de las semillas de algunas especies de la familia Meliaceae. Leite et al. (1987), reportan efecto insecticida de Ruta graveolens L. (Rutaceae) y Eucaliptus argenteum L. (Myrtaceae) sobre ninfas de Dipetalogaster maximus. Arias & Schmeda- Hirschmann (1988) hallaron efecto repelente del aceite y del extracto etanólico obtenido de frutos de Melia azedarach L. (Meliaceae) sobre ninfas de Triatoma infestans, igualmente observaron que el extracto etanólico de las hojas de Tagetes minuta L. (Asteraceae) posee actividad insecticida sobre las ninfas de Rhodnius neglectus y que los extractos de Tagetes erecta inhiben el proceso de muda de estos insectos (Schmeda-Hirschmann & Arias, 1992).
En las evaluaciones de actividad insecticida realizadas con algunas especies de Asteraceas paraguayas, Schmeda-Hirschman & Arias (1992), encontraron que los extractos obtenidos con hexano de las flores de Achyrocline satureoides producen mortalidades del 45% al aplicar 0,05 μg sobre los tergitos abdominales de T. infestans, y los extractos etanólicos obtenidos de los tallos de Mikania cordifolia y Vernonia brasiliana inhiben el proceso de muda en T. infestans.
]]> Cabral et al. (2000), evaluaron el efecto inhibidor de la ecdisis y la alteración del balance hídrico producido por seis lignanos y neolignanos en ninfas de cuarto instar de R. prolixus al aplicar los tratamientos por vía oral, tópica y contacto continuo, observaron que los lignanos burchellin, pinoresinol, sesamina, lacarin A y ácido nordihydroguaiaretico no causan inhibición de la alimentación al aplicarlos en una concentración de 100 μg/mL; y el lignano podofilotoxina no presenta efecto antialimentario, causando inhibición del proceso de muda y toxicidad significativa al aplicarlo por vía oral o tópica. El efecto mas significativo de inhibición de la ecdisis se presenta con el pinoresinol y el ácido nordihydroguaiaretico con valores que alcanzan el 58 y 50% respectivamente al ser aplicados por vía oral; a la misma concentración de 100 μg/mL la burchelina inhibe en un 30% el proceso de muda. Mediante tratamiento tópico ninguno de los compuestos presenta influencia en el ciclo de la muda y la podofilotoxina y la burchelina reducen significativamente la excreción de los insectos en 24 horas.El uso de insecticidas botánicos es una alternativa de control accesible y de bajo costo para los campesinos y comunidades indígenas que habitan las zonas infestadas por triatominos, debido a que varias especies vegetales que poseen actividad insecticida reconocida crecen con facilidad o son nativas de estas áreas geográficas y la obtención de los extractos activos no requiere de metodologías complejas, además los insecticidas de origen vegetal tienen la ventaja de ser biodegradables, de disponibilidad inmediata, bajo costo y pueden ser preparados artesanalmente mediante tratamientos caseros y ser aplicados de forma inmediata sin requerir de la utilización de aspersores o implementos costosos.
En Colombia no se han realizado investigaciones orientadas a la evaluación del potencial insecticida de especies vegetales sobre triatominos; sin embargo, se conoce que a nivel etnobotánico y de tradición los indígenas que habitan en algunas comunidades de la vertiente norte de la Sierra Nevada de Santa Marta utilizan los extractos acuosos de los frutos de higuerillo (Ricinus communis) aplicados en las paredes de las chozas y obtienen buenos resultados en el control de insectos domiciliarios, incluyendo entre ellos a los triatominos vectores de la enfermedad de Chagas (Parra, 2005). Con el objetivo de hacer una aproximación bioracional al control de los vectores de la enfermedad de Chagas, hemos evaluado los extractos provenientes de cuatro especies vegetales sobre las especies R. prolixus y R. pallescens. En esta investigación se presentan y analizan los resultados de las evaluaciones realizadas bajo condiciones de laboratorio con los extractos etanólicos obtenidos de las semillas de Annona muricata (Annonaceae) y Mammea americana (Clusiaceae); de los frutos maduros de Melia azedarach (Meliaceae) y Ricinus communis (Euphorbiaceae). La potencialidad insecticida se determinó con base en las evaluaciones de toxicidad y repelencia sobre ninfas de cuarto instar de R. prolixus y R. pallescens y la actividad ovicida sobre las posturas recientes de ambas especies. Como nivel de referencia se evaluó la actividad del insecticida piretroide deltametrina y del insecticida natural nicotina al 98% (grado analítico).
MATERIALES Y METODOS
1. Material vegetal
Las semillas de M. americana y A. muricata se obtuvieron de frutos comerciales y los frutos completos de R. communis y M. azedarach se recolectaron en los predios de la Universidad Nacional de Colombia Sede Medellín procedentes de árboles sanos. Los cuatro materiales vegetales se secaron a 45 ºC por 72 horas, posteriormente se trituraron y se realizó la extracción de 500 gramos de material mediante percolación con tres litros de etanol al 95% a temperatura ambiente. El extracto obtenido se filtró y se destiló a presión reducida en un rotaevaporador a una temperatura controlada de 40º C. Se empleó solvente grado analítico, redestilado antes de ser utilizado.
2. Insectos
Las colonias de triatominos (R. prolixus y R. pallescens) se obtuvieron del Laboratorios de Entomología del ICMT-CES y del Grupo de Chagas de la Universidad de Antioquia. Ambas especies se mantuvieron y reprodujeron en condiciones controladas de humedad relativa del 80% y temperatura de 27ºC. Las ninfas y los adultos se alimentaron semanalmente sobre gallinas (Gallus gallus).
3. Bioensayos
3.1. Estudio de la actividad insecticida de los extractos
]]> Mediante un diseño completamente al azar se establecieron bioensayos para evaluar toxicidad, repelencia y actividad ovicida de los extractos. La toxicidad se evaluó siguiendo el protocolo de Schmeda-Hirschman & Arias (1992), la repelencia se evaluó siguiendo el protocolo de Arias & Schmeda- Hirschman, (1988) y la actividad ovicida se evaluó siguiendo el protocolo de Valladares et al. (1999).En todos los bioensayos las ninfas se seleccionaron de la misma edad (ninfas IV de 10 días en el estadio), peso (130±30 mg) y tiempo de ayuno (seis horas).
3.2. Evaluación de toxicidad
Para la realización de los bioensayos de toxicidad se uso un microaplicador “Microliter Syringe Hamilton”, cada extracto se aplicó a un volumen de 10 μL en los tergos abdominales de 10 ninfas por dosis o concentración que fluctuaron en el rango de 5% y 70% (p/p), se realizaron como mínimo tres réplicas de cada experimento y se evaluaron entre 4 y 5 dosis que registraron por lo menos 4 puntos entre el 10 - 80% de mortalidad. Se pretendió encontrar bajo este diseño la mínima concentración a la cual cada extracto presenta actividad estadísticamente significativa.
En los bioensayos de toxicidad se usaron ninfas de 4º estadío de R. prolixus y R. pallescens, la mortalidad de las ninfas se registró a las 72 horas, se consideraba muerta cada ninfa que colocada sobre un papel de filtro no presentaba actividad locomotora propia o estimulada. En todos los bioensayos las mediciones se hicieron por triplicado, confrontando la actividad de los extractos con los respectivos controles y blancos absolutos.
El insecticida deltametrina fue aplicado a un volumen de 0,5 μL sobre los tergos abdominales de las ninfas de 4º estadio de R. prolixus y R. pallescens por triplicado y a las concentraciones de 0.01, 0.025, 0.050, 0.075 y 0.1 % p/p; el insecticida nicotina se aplicó a un volumen de 0,5 μL sobre los tergos abdominales de las ninfas de 4° estadio de R. prolixus y R. pallescens por triplicado a las concentraciones de 0.1, 0.15, 0.25, 0.40 y 0.60 % p/p.
3.3 Evaluación de repelencia
En el bioensayo de repelencia, se realizaron cinco repeticiones, estando conformada la unidad experimental por 18 ninfas de cada especie que se liberaban al interior de un sistema que se construyo siguiendo la metodología de Arias & Schmeda- Hirschmann (1988) (Fig. 1), en el cual se construyeron 6 refugios con viales de plástico de 25 ml recubiertos en su interior con papel de filtro (las tiras de papel previamente pesadas e impregnadas se dejaron evaporando a temperatura de 30 ºC durante 24 horas antes de ponerlas en el interior de los viales. La concentración se expresó en miligramos de extracto por kilogramo de papel mg/kg) cada análisis se realizo con 3 viales tratados con el solvente (etanol al 95 %) y tres con extracto. Se evaluaron las concentraciones de 5.000, 10.000 y 15.000 mg/kg para cada extracto. La variable evaluada fue el número de insectos que ingresaron en los refugios tratados con el extracto a cada concentración durante dos horas de exposición para cada repetición.
Fig. 1. Sistema para evaluación de repelencia en ninfas de R. prolixus y R. pallescens.
4. Análisis estadístico
Los datos fueron analizados mediante el paquete estadístico SAS System v 8.2. Los bioensayos de toxicidad se analizaron mediante el procedimiento PROBIT para la determinación de la concentración letal 50 de los extractos e insecticidas evaluados.
El bioensayo de repelencia se analizó utilizando el procedimiento FREQ, se calculó la tasa de repelencia y se aplicó una prueba de c2 para evaluar el efecto de la repelencia. Para el bioensayo de actividad ovicida se realizó un Análisis de Varianza (ANOVA), mediante el procedimiento GLM.
RESULTADOS
La relación entre el peso de material fresco y material seco expresado como porcentaje obtenido para las especies vegetales fue de: 56% para A. muricata, 44% para M. azedarach, 60% para M.americana y 40% para R. communis. El rendimiento de la extracción expresado en %p/p fue de 28% para A. muricata, 10% para M. americana, 48,58% para M. azedarach y 70,84% para R. communis.
Potencial insecticida de las especies vegetales estudiadas
Toxicidad de los extractos vegetales y de los insecticidas nicotina y deltametrina sobre R. prolixus y R. pallescens
En el Tabla I y en las Fig. 2 y Fig. 3 se presentan los valores de toxicidad media CL50 obtenidas con las cuatro especies vegetales sobre R. pallescens y R. prolixus; similarmente en el Tabla I y la Fig. 4 se presentan los valores de CL50 obtenidos con los insecticidas deltametrina y nicotina. Se observó una mortalidad significativa de las dos especies de triatominos con los cuatro extractos evaluados a las 72 horas. Los extractos de A. muricata y M. azedarach presentaron la mayor actividad sobre las dos especies de triatominos con concentraciones letales medias sobre R. prolixus de 1,02 % p/p (IC95%: 0,39-1,59) y 1,77 % p/p (IC95%: 0,59-2,45) respectivamente y sobre R. pallescens con concentraciones letales medias de 1.74 % p/p (IC95%: 0,015-3,16) y 1,74 % p/p (IC95%: 0,44-2,6). Se observó una diferencia ínterespecífica en la respuesta de las dos especies de triatominos al extracto de A. muricata, lo que sugiere que los metabolitos de esta especie vegetal son más activos sobre la especie R. prolixus. Esta diferencia en la respuesta es muy notoria con el extracto de R. communis para la cual se obtuvieron valores de concentración letal media de 1,87 % p/p para R. prolixus y 3,77 % p/p para R. pallescens. El extracto menos activo fue el de M. americana con valores de mortalidad media de 4,33 % p/p (IC95%: 3,48-5,81) para R. prolixus y 2,61% p/p (IC95%: 1,33-3,42) en R. pallescens.
Tabla I. Concentración letal media (CL50) obtenida para cada especie vegetal sobre las ninfas de IV estadio de R. prolixus y R. pallescens.
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Fig. 2. Mortalidad de R. pallescens en las evaluaciones de actividad biológica realizadas con los extractos de M. americana, A. muricata, R. communis y M. azedarach.
Fig. 3. Mortalidad de R. prolixus en las evaluaciones de actividad biológica realizadas con los extractos de M. americana, A. muricata, R. communis y M. azedarach.
Fig. 4. Mortalidad de R. prolixus y R. pallescens con los insecticidas nicotina y deltametrina.
Respecto a los insecticidas nicotina y deltametriana se observó que la concentración letal media obtenida para R. pallescens con deltametrina es 6,6 veces más baja que la obtenida con nicotina. Un comportamiento similar se observó con la especie R. prolixus que requiere una concentración de deltametrina 5,3 veces más baja para alcanzar la concentración letal media con relación a la nicotina.
Las diferencias de actividad observadas entre los dos insecticidas de referencia sugieren que la especie R. pallescens es mas susceptible a los insecticidas que R. prolixus. El extracto de A. muricata presentó la actividad mas alta y requirió una concentración 231 veces mayor que deltametrina y 48 veces mayor que nicotina para alcanzar la CL50 sobre la especie R. prolixus. No se observó mortalidad en los controles.
Repelencia de los extractos vegetales sobre ninfas de 4º estadio de R. prolixus y R. pallescens.
]]> Los porcentajes de repelencia obtenidos con los tres extractos evaluados oscilaron entre 51 y 58%. El extracto de M. azedarach a la concentración de 1,0% p/p produjo el mayor efecto sobre las ninfas de R. prolixus: 58%, mientras que el extracto de R. communis a la concentración del 1,0 % p/p fue el que causó la mayor repelencia sobre R. pallescens con un valor de 57,5% (Tabla II). El extracto de A. muricata actuó como repelente de las dos especies de triatominos a la concentración de 1,5% p/p alcanzando los valores de 55,33 % para R. prolixus, (P= 0,0023) y de 55,33% para R. pallescens, (P= 0,0023). Con el extracto de M. azedarach se observó una respuesta de repelencia diferencial ya que R. prolixus presento repelencia a la concentración de 0,5% p/p (P= 0,047) y un porcentaje de repelencia de 53,69%, mientras que R. pallescens alcanzó este porcentaje de repelencia a la concentración de 1% p/p (P= 0,019). El extracto de R. communis presentó un efecto repelente similar al del extracto de M. azedarach, y en este caso la especie R. pallescens fue mas susceptible alcanzando el valor de 56,08 % a la concentración más baja: 0,5% p/p (P= 0,0072) y R. prolixus requirió una concentración de 1,5% p/p (P= 0,03) para alcanzar un valor de repelencia estadísticamente significativo.Tabla II. Efecto de repelencia de los extractos etanólicos sobre ninfas de IV estadio de R. pallescens y R. prolixus.
| Especies evaluadas (planta / insecto) | Repelencia (%) | Tasa de repelencia | Valor P | ]]>|
| Etanol | Extracto | |||
| A. muricata /R . pallescens | 47,40 | 52,60 | ]]> 1,100,1367 | |
| 46,58 | 53,42 | 1,14 | 0,0856 | |
| 55,33 | 1,23 | 0,0023** | ||
| A. muricata /R. prolixus | 48,34 | 51,6 | ]]> 6 1,060,4178 | |
| 46,58 | 53,42 | 1,14 | 0,0856 | |
| 55,33 | 1,23 | 0,0023** | ||
| M. azedarach /R. pallescens | 48,75 | 51,25 | ]]> 1,050,4776 | |
| 45,00 | 55,00 | 1,22 | 0,190* | |
| 56,67 | 1,30 | <0,0001** | ||
| M. azedarach /R. prolixus | 46,31 | ]]> 53,691,15 | 0,0472* | |
| 42,00 | 58,00 | 1,38 | <0,0001** | ]]>|
| 45,70 | 54,30 | 1,19 | 0,0140* | |
| R. communis /R. pallescens | ]]> 43,9256,08 | 1,27 | 0,0007** | |
| 42,47 | 57,53 | 1,35 | ]]> | |
| 42,95 | 57,05 | 1,33 | <0,0001** | |
| 47,10 | 52,90 | 1,12 | 0,0939 | |
| 48,00 | 52,00 | ]]> 1,080,3174 | ||
| 45,89 | 54,11 | 1,18 | 0,0352 | |
* Nivel de significancia 5% α=0.05 ; ** Nivel de significacia 1% α=0.01.
Actividad ovicida
Los extractos de A. muricata y R. communis inhibieron en 25% la eclosión de los huevos de R. prolixus. El extracto de A. muricata produjo inhibición del 25% de la eclosión en los huevos de R. prolixus a la concentración de 3,0% p/p; mientras que el extracto de R. communis requirió una concentración menor, 2,5% p/p, para alcanzar este mismo porcentaje de inhibición de la eclosión de los huevos de esta especie; el extracto de M. azedarach solo produjo una inhibición del 10% a la concentración de 3,0% p/p (Fig. 5). Se observó que el extracto de M. azedarach fue el que ocasionó el mayor porcentaje de inhibición de la eclosión de los huevos de R. pallescens alcanzando el valor de 25% a la concentración de 3% p/p y los extractos de A. muricata y R. communis inhibieron en un 20% la eclosión de los huevos de esta especie de triatomino a las concentraciones de 3% p/p y 2,5% p/p respectivamente (Fig. 6).
Fig. 5. Inhibición de la eclosión en huevos de R. prolixus.
Fig. 6. Inhibición de la eclosión en huevos de R. pallescens.
DISCUSIÓN
En las especies más activas (A. muricata y M. azedarach) se observó que el rendimiento de la extracción fue de 28% para A. muricata y de 48.5% para M. azedarach, esto se debe a que los rendimientos obtenidos desde semillas y frutos son muy diferentes para una misma planta y difieren de planta a planta. De las cuatro especies vegetales evaluadas se observó que el extracto de A. muricata fue el de mayor toxicidad sobre las ninfas de R. prolixus y R. pallescens; en la literatura no hay publicaciones previas de la toxicidad de esta especie vegetal sobre triatominos, sin embargo no es sorprendente la actividad insecticida observada debido a que el género Annona posee acetogeninas bistetrahidrofuránicas y monotetrahidrofuránicas que presentan actividad biológica (Rupprecht et al., 1990). Feras et al. (1999), reportan la toxicidad sobre cucarachas (Blatella germanica) resistentes a insecticidas tradicionales de las acetogeninas obtenidas de algunas especies de anonáceas y Morales et al. (2004) encontraron que las larvas de Aedes aegypti y Anopheles albimanus son muy susceptibles a los extractos polares, no polares y a las mezclas de acetogeninas de A. muricata, en los estudios realizados obtuvieron valores de CL50 de 74,7; 236,2 y 20,3 ppm respectivamente. Ohsawa et al. (1990), publicaron la actividad de los extractos de Annona glabra, A. montana, A. muricata, A. squamosa, A. chirimolia y A. reticulata sobre Callosobrochus chinensis (Coleoptera: Bruchidae) y observaron porcentajes de mortalidad variables, los cuales fueron inferiores a los hallados en esta investigación debido posiblemente a que los coleopteros se caracterizan por una mayor tolerancia a los tóxicos. La toxicidad de A. muricata contrasta con el efecto de repelencia observada, la cual fue más baja que la de los otros extractos evaluados, lo que indica que los metabolitos activos pueden ser efectivos contra triatominos solo por contacto directo.
]]> El extracto de los frutos de M. azedarach mostró actividad tóxica sobre las ninfas de R. prolixus con una CL50: 1,77 % p/p; IC95%: 0,59-2,45 y sobre las ninfas de R. pallescens con una CL50: 1,74% p/p; IC:95%: 0,44-2,6; los resultados obtenidos contrastan con los hallados por Schmeda-Hirschmann & Arias, (1992), debido a que el extracto obtenido con éter de petróleo a partir de los frutos de M. azedarach colectados en Paraguay y evaluados sobre la especie R. neglectus mostraron una mortalidad muy baja siendo considerados no promisorios para el control de triatominos, sin embargo en este mismo estudio la evaluación del extracto obtenido con éter de petróleo de las hojas de M. azedarach fue activo alcanzando mortalidades del 32,5% con la misma especie de triatomino. Estos resultados confirman las observaciones hechas por Schmeda-Hirschmann & Arias (1992), en las cuales detectaron diferencias en la actividad de los extractos de M. azedarach obtenidos de plantas colectadas en diferentes sitios.La actividad ovicida de los extractos
evaluados se considera baja, pues no supero en ninguno de los bioensayos el 25% de inhibición de la eclosión de los huevos, valor que está muy cercano a los porcentajes de eclosión natural de los huevos de R. prolixus, que en condiciones de laboratorio a 21ºC y 90% de humedad relativa han sido reportados del 85% (Picollo & Zerba, 1997); en los controles evaluados en este estudio la eclosión de los huevos de ambas especies de triatominos fue del 100% a 80% HR y 27ºC; en otros estudios de evaluación de la actividad de extractos vegetales sobre huevos de T. infestans (Valladares et al., 1999), al evaluar los extractos etanólicos de las hojas y frutos de M. azedarach sobre T. infestans hallaron que los huevos tratados con concentraciones de 5,5 y 11,1 % p/v presentaban porcentajes de eclosión superiores al 80%. En este mismo estudio los autores observaron efecto repelente del extracto de M. azedarach con valores de repelencia que fluctuaron entre el 50 y el 100%.
En las evaluaciones de repelencia efectuadas en este estudio se obtuvieron porcentajes que oscilaron entre el 51 y el 58%, estos valores de repelencia se pueden considerar representativos. Los estudios fitoquímicos realizados por Valladares et al. (1999), sobre la especie M. azedarach dieron pruebas positivas para la presencia de flavonoides, limonoides y lignanos, y negativas para alcaloides y azadiractina, la cual posee actividad insecticida reconocida y es considerada como una de las moléculas mas activas presente en algunas especies de la familia Meliaceae.
La actividad tóxica observada en este estudio con los extractos etanólicos obtenidos de los frutos de M. azedarach coincide con el efecto de repelencia diferencial obtenida para las dos especies de triatominos evaluadas que alcanza los mismos índices a las concentraciones 0,5% p/p para R. prolixus y 1% p/p para R. pallescens.
Se observó que la especie R. pallescens es menos susceptible que R. prolixus al efecto tóxico del extracto etanólico obtenido de los frutos de R. comunis y las semillas de A. muricata ya que es necesaria una concentración mayor que alcanza casi el doble para obtener la CL50. La susceptibilidad de la especie R. prolixus a los metabolitos presentes en los dos extractos citados puede ser debida a factores genéticos o a factores de adaptación frente al contacto con insecticidas de origen natural o sintéticos.
El extracto etanólico obtenido de los frutos de R. communis presentó toxicidad sobre las dos especies de triatominos con valores de concentración letal media de 3,77 % p/p para R. pallescens y 1,87% p/p para R. prolixus. Estos resultados sugieren que este extracto es poco promisorio para el control de estos insectos. En los frutos de R. communis se ha hallado la presencia del alcaloide ricinina y de la toxoalbúmina ricina, los cuales presentan una toxicidad muy alta para humanos, mamíferos e insectos (Farias & Tokarnia, 1996), sin embargo no se observó actividad tóxica significativa contra los triatominos lo cual puede indicar que estos materiales no están presentes en el extracto etanólico o lo están en cantidades muy pequeñas debido a la alta polaridad de estas dos sustancias. En las evaluaciones realizadas con los extractos acuosos obtenidos a partir de las hojas de R. communis, Upasani et al. (2003), encontraron una actividad insecticida muy alta al aplicarlos sobre C. chinensis L. (Coleoptera: Bruchidae), de este extracto aislaron varios flavonoides que mostraron potencial insecticida, ovicida y disuasor de la oviposición en C. chinensis.
En las evaluaciones de toxicidad de los extractos evaluados se observa que no se incrementa significativamente la pendiente de las curvas aún cuando se aumentan las dosis de los extractos, esto puede deberse a dosis subletales por no realizar las evaluaciones con ingredientes activos que se obtendrían luego de varias extracciones con solventes polares y no polares. Por lo tanto, los resultados de toxicidad obtenidos con los extractos de las cuatro especies vegetales evaluadas se pueden considerar poco promisorios atendiendo las recomendaciones de la Agencia de Cooperación Técnica Alemana (GTZ) debido a que los valores de CL50 obtenidos en esta evaluación se encuentran por encima de la concentración máxima (5.000 ppm: 0,5% p/p) recomendada para condiciones de laboratorio (Hellpap, 1993); sin embargo, por tratarse de extractos totales, en éstos los metabolitos que presentan actividad biológica pueden hallarse en concentraciones muy bajas, por lo tanto el posterior fraccionamiento y análisis de dichas fracciones podría llevar a la detección de actividad a concentraciones mas bajas de cada extracto.
AGRADECIMIENTOS
A los doctores Nicolás Jaramillo y Omar Triana del Grupo de Chagas de la Universidad de Antioquia por suministrar ninfas de R. prolixus y R. pallescens. A la estudiante Dignora Rentaría por su colaboración en los bioensayos. El estudio fue financiado por el Instituto Colombiano de Medicina Tropical-CES
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