Efeitos farmacológicos da suplementação dietética com arginina em ratos com tumor sólido de Walker 256

Universidade de Brasília (UnB), Centro Brasileiro de Sequenciamento de Proteínas, Departamento de Biologia Celular. Brasilia, D.F. Brasil

RESUMO.

Os efeitos da suplementação com arginina na dieta de portadores de câncer são controversos. O objetivo deste trabalho é avaliar os efeitos da suplementação dietética com arginina no cresciemnto tumoral, disserninação metastática, metabolismo de aminoácidos, alterações hematológicas, tempo de sobrevida e peso corporal de ratos Wistar com tumor sólido de Walker 256. Foram administradas soluções por via gástrica, contendo arginina nas concentrações de 4%, 6% e dieta padrão (controle).

A suplementação com arginina inibiu a disseminação de células tumorais no modelo experimental, embora o crescimento tumoral não tenha sido afetado significantemente. O tempo de sobrevida dos animais com tumor sólido não foi afetado de forma significativa. Foi observado diminuição significativa do peso corpóreo após a administração da arginina a 6% (p<0.05). O metabolismo dos aminoácidos foi estimulado após ingestão de suplementos com arginina, evidenciado pelos aumentos significativos dos níveis sanguíneos de arginina, ornitina, citrulina, prolina e histidina quando comparados ao grupo controle (p<0.001). O grau de anemia no tumor sólido foi menos severo nos grupos que receberam suplementação com arginina, evidenciado através do hemograma (p<0.001) e da análise citológica. Os resultados sugerem que a suplementação dietética com arginina a 6% apresentou algum efeito benéfico no tumor sólido de Walker 256 que ultrapassa o efeito nutricional.

Palavras-chaves: Suplementação com arginina, tumor de Walker 256, metástase, metabolismo de aminoácidos, tempo de sobrevida.

Pharmacological effects of arginine supplementation in rats with Walker 256 solid tumor. The effects of diet arginine supplementation for those with cancer are controversial. We evaluate the effects of dietetic supplementation with arginine over body weight, growth of tumor, metastatic dissemination, surviving time, amino acid metabolism, haematological changes of the rats with Walker 256 solid tumor. Intragastrical solutions with arginine at 4% and 6%, a standard diet (control) were administered to the animals. The supplementation with arginine was associated with a lower weight gain during the study period (p<0.05). Surviving time of the rats with solid tumor did not vary significantly between the groups. The rate of metastase was lower in animals with Walker 256 solid tumor supplemented with arginine. The amino acid metabolism was estimulate in the animals after arginin supplementation at 4% and 6%, demonstrated by significant increases in blood levels of arginine, ornitine, citruline, proline and histidin when compared to the control group. Anaemia was less severe in the rats with Walker 256 solid tumor that received arginine supplementation. The results suggest that arginine 6% supplementation may have pharmacologic effect in rats with Walker 256 solid beyon the nutritional one.

Recibido: 17-08-1999 Aceptado:26-06- 2000

A influência da arginina sobre o crescimento tumoral e nutrição do hospedeiro tem sido investigada por mais de 60 anos (1-4).

A proposição para o uso de quantidades suplementares de arginina no suporte nutricional do portador de câncer tem sido avaliada como aporte de substrato nitrogenado e por seus efeitos farmacológicos, que possivelmente, ampliam os mecanismos de defesa imunológicos envolvidos e, consequentemente, possibilitam a melhora do prognóstico do paciente.

Este aminoácido tem apresentado múltiplas ações fisiológicas e farmacológicas. É precursor metabólico da creatina, da creatinina, de poliaminas e do óxido nítrico, e tem impar tan te participação no ciclo da uréia. É descrito também como estimulador do hormônio de crescimento hipofisário, e tem sido relacionado ao aumento da atividade das células killer e T-helper. ao estímulo da produção das citocinas interleucina 1 (IL-l), interleucina-2 (IL-2), receptor para IL-2, interleucina 6 (IL-6) e ao fator alfa de necrose do tumor (TNF-alfa) que são importantes mediadores na gênese da caquexia (5).

Apesar de serem descritas na literatura muitas ações da arginina, os resultados em portadores de câncer ainda são insuficientes e controversos. In vitro, L-arginina pode inibir estimular linhagens celulares de câncer (7). In vivo, estudos experimentais demonstraram também estimulação (4.6.8) inibição do crescimento tumoral (1,3,9,10).

Neste estudo utilizamos o tumor de Walker 256, sólido, para avaliar os efeitos da suplementação dietética com arginina no crescimento tumoral, disseminação metastática, tempo de sobrevida, peso corporal, metabolismo dos aminoácidos e alterações hematológicas.

A linhagem A do Tumor de Walker 256 (origem: The Christ Hospital Line, National Cancer lnstitute Bank, Cambridge, Mass., USA), foi obtida junto à Universidade Estadual de Campinas (Unicamp) e conservada em nitrogênio líquidoa-160°C. A técnica de inoculação utilizada nos animais foi multifocal e subcutânea na região dorso-lombar, totalizando 4 inoculações por animal, com aproximadamente 4 milhões de células por inoculação (11).

Dieta dos animais e posologia da arginina

A ração utilizada no estudo (Labina, Agribrands Purina do Brasil Ltda), continha em sua composição arginina (1.5%), proteína (23.0%), minerais (8.0%), fibras (9.0%) e vitaminas (traços). A arginina, foi obtida na forma de cloridrato de arginina (Laboratório Ajinomoto do Brasil) e administrada pura, diluída em água destilada, nas concentrações de 4% e 6% das calorias totais estimadas do valor calórico (VCT) de um rato jovem. Um rato jovem consome cerca de 15g/ dia de ração o que corresponde aproximadamente 47.3 kcal/dia. A dieta padrão não continha a suplementação de arginina. Todas as soluções foram introduzidas no animal através de entubação gástrica, iniciadas doze horas após a inoculação das células tumorais, mantendo-se esta periodicidade de administração (12/12 horas).

A alteração no peso corpóreo foi calculada pela subtração entre a média do peso final (animal morto) e o peso inicial. O peso da carcaça dos animais correspondeu ao último peso do animal subtraindo-se o peso dos tumores.

A necrópsia dos animais foi realizada com evisceração total em monoblocos, os quais foram fixados em formaldeído a 10%. O material selecionado foi incluído em parafina, seccionado em micrótomo rotativo com 5 micrômetros de espessura e corado pelo método da hematoxilina-eosina, para análise histopatológica.

A análise dos aminoácidos Coi realizada no analisador Hitachi L-8500, por cromatografia de troca iônica com coluna de alta resolução, seguida da detecção com ninhidrina na fase pós-coluna. O coeficiente de variação do analisador apresentou- se inferior a 0.8%.

Para a determinação da creatinina Coi utilizado o método cinético (LABORLAB, Brasil). Para a determinação de uréia foi utilizado o método cinético UV (urease-GLDH, CELM, Brasil). A determinação da glicose foi realizada pelo método enzimático (LABORLAB, Brasil). Os valores obtidos foram expressos em mg/dl.

Foram colhidos 3ml de sangue venosocom anticoagulante (EDT A a 10%) por punção cardíaca e realizado o hemograma, utilizando-se o Contador diferencial de células (Mod. CDI.)

A análise estatística foi desenvolvida no software SAS (Statistical Analysis System), versão 6.12. Os dados foram analisados utilizando-se os procedimentos de análise de variância (ANOVA) e, posteriormente, os testes de Duncan e Student- Newman-Keuls. A significância estatística aceita foi p<0.05.

A arginina não afetou a incidência nem o período de latência, sendo que os tumores tornaram-se palpáveis entre 3 a 4 días após inoculação.

A suplementação com arginina a 6% tendeu a reduzir o volume do tumor (3.35±0.56 cm3), quando comparado ao grupo que recebeu a suplementa~ao com arginina a 4% (3.51±0.58 cm3) e ao grupo simplesmente tratado com dieta padrão (3.85±0.32 cm3), não atingindo diferença estatística (p<0.06). O peso do tumor também tendeu a apresentar-se menor após a administração de arginina a 6% (4.85±1.51g), quando comparado às administrações de arginina a 4% (5.01±1.62g) e com dieta padrão (5.20±1.58g), não sendo entretanto esta diferença estatísticamente significativa (p0.06) (Tabela 1).

O tempo de sobrevida dos animais não apresentou diferença significativa entre grupos (P<0.06), (Tabela 1).

Efeito da suplementação dietética com arginina em ratos com tumor sólido de Walker 256

Nos animais inoculados com tumor sólido, as células apresentaram-se como uma neoplasia homogênea e monóto-na, com características poligonais ou irregulares, isoladas ou em pequenos grupos, com limites citoplasmáticos imprecisos. O citoplasma apresentou-se escasso, basofílico; os núcleos volumosos, de tamanhos variados, com nucléolos proeminentes e alto índice mitótico. O tumor infiltrou os feixes musculares e a pele por contiguidade.

No grupo que recebeu simplesmente a dieta padrão, foi observado comprometimento visceral do pulmão e fígado, de intensidade moderada a acentuada, com características histopatológicas semelhantes, em 100% dos animais necropsiados. No pulmão foi observada metástase nodular volumosa peri-brônquica e infiltração nos septos interlobares de intensidade moderada a acentuada, caracterizando provavelmente uma disseminação metastásica de origem linfática. No fígado destes animais, foi encontrada hepatoesplenomegalia com infiltração de células neoplásicas, intra, extra-lobular e sinosoidal, de intensidade moderada.

O comprometimento pulmonar e hepático também foi encontrado no grupo que recebeu a suplementação com arginina a 6%. No pulmão foi observada infiltração neoplásica peri vascular (único nódulo) em 80% dos animais necropsiados, de intensidade discreta. No fígado destes animais, foi encontrada infiltração neoplásica inter e extra-lobulares, em 80% dos animais necropsiados, de intensidade discreta. No rim, foram notadaas as discretas alterações degenerativas das células tubulares renais, descritas anteriormente no grupo que recebeu arginina a 4%.

Todos os ratos machos e jovens inoculados com o tumor sólido de Walker 256, apresentaram ganho ponderal, independente da suplementação dietética, todavia a suplementação com arginina esteve associada a um menor ganho ponderal, durante o período de estudo quando comparado aos animais do grupo que recebeu somente a dieta padrão (Tabela 2).

A análise da alteração no peso dos animais possibilitou verificar que um menor ganho ponderal esteve relacionada à dosagem de arginina a 6%, sendo obtida uma pequena alteração corpórea (3.55±16.69g), quando comparado aos grupos suplementados com a concentração a 4% (8.64±16.50g) e com dieta padrão (15.28±20.50g), sendo esta diferença estatísticamente significativa apenas entre os grupos arg 6% x dieta padrão (p<0.05), (Tabela 2).

O peso médio da carcaça decresceu nos animais que receberam a sup1ementação com arginina a 6% (140.55±20.50g), quando comparado aos animais que receberam a arginina a 4% (145.49 ±19.40g) e a dieta padrão (152.87±22.68g), sendo a diferença estatísticamente significativa apenas entre os grupos que receberam a arginina 6% e a dieta padrão (p<0.05), (Tabela 2).

Alteração ponderal corpórea nos animais inoculados com tumor sólido de Walker 256, após suplementação dietética com arginina

Foi observado um aumento significativo nas concentrações plasmáticas de arginina, citrulina, ornitina, prolina e histidina (arg 6% arg 4% x dieta padrão, p<0.001), (Tabela 3).

Alterações na concentração plasmática dos aminoácidos (AA) plasmáticos após a suplementação com arginina, em ratos con tumor sólido de Walker 256

Concentração de uréia, creatinina e glicose após a suplementação dietética com arginina em ratos com tumor sólido de Walker 256

O grupo de animais que recebeu dieta padrão apresentou menores índices hematimétricos quando comparados aos grupos que receberam arginina (p<0.001). O número de leucócitos não apresentou diferença estatísticamente significativa entre os grupos estudados (P<0.06), (Tabela 5).

Alterações hematológicas após a suplementação con arginina em ratos com tumor sólido de Walker 256

No hemograma do grupo suplementado com arginina a 6% a citomorfologia dos eritrócitos indicou policromasia (52.6%±0.30) e eritroblastose (40.0%±0.44) em quantidade que tendeu a ser superior a observada no grupo suplementado com arginina a 4% (46.0%±0.63 e 34.0%±0.62) e que recebeu somente a dieta padrão (39.0%±0.30 e 31.0%±0.52).

No presente estudo, a arginina não afetou o período de latência (4 a 5 dias) ou a incidencia do tumor (100%) nos grupos estudados, sugerindo que a arginina não previniu a iniciação do tumor após a inoculação das células tumorais. Esta observação apresentou-se semelhante a relatada previamente (3).

A influência da arginina também não foi notada no desenvolvimento inicial do tumor de Walker 256, o qual apresentou um padrão de desenvolvimento idêntico nos grupos. O crescimento tumoral seguiu um padrão de evolução típico, com um período inicial livre de efeitos sistêmicos detectáveis (período subclínico), seguido por um período sintomático (período clínico), caracterizado por uma fase de sintomas moderados e uma fase grave, com diminuição da ingesta de ração, pouca reação ao estímulo externo e ao manuseio, depressão, seguida da morte do animal.

A suplementação com arginina a 6%, possivelmente, prolongou a duração das fases finais de desenvolvimento tumoral, sendo constatado aumento no tempo de sobrevivência médio neste grupo quando comparado aos demais grupos, porém sem significado estatístico (P<0.06). O aumento da sobre vida dos animais com câncer, após a suplementação com arginina, Coi relatado anteriormente (7,13).

No presente estudo, houve uma tendência a diminuição no peso e volume do tumor após utilização da arginina, porém as diferenças nço se apresentaram estatísticamente significativas, quando foram comparados os grupos suplementados com arginina (6% e 4%) e que recebeu simplesmente a dieta padrão.

Embora as ações farmacológicas deste aminoácido não tenham sido ainda totalmente elucidadas, os efeitos observados podem ser explicados por várias hipóteses, entre elas, pelo conceito, que o crescimento tumoral é um processo dinâmico envolvendo uma competição entre células imunocompetentes e células neoplásicas, nas quais o crescimento é a soma da destruição e proliferação celular. Neste modelo, é sugerido que a progressão do tumor depende da capacidade do sistema imune em reconhecer e destruir as células neoplásicas, senda que esta capacidade pode estar relacionada ao grau de imunogenicidade do tumor (9, 14).

Tem sido sugerido também que se o tumor for fracamente imunogênico, a suplementação com L-arginina pode estimular o crescimento tumoral devido à falta de reconhecimento do sistema imune, relatado em certos tumores humanos. Por outro lado, descreveu-se também que se o tumor for fortemente imunogênico, como tumores transplantáveis em animais, após a suplementação com arginina, as defesas do organismo podem predominar, resultando em inibição do crescimento tumoral (9).

Complementando o mecanismo de ação sugerido, a arginina é precursora do óxido nítrico (ON), cujas ações farmacológicas têm sido relacionadas à inibição do crescimento de células tumorais in vitro (5,14,15), citotoxidade dos macrófagos ativados e inibição da agregação dos neutrófilos (5), além de participar em vários fenômenos fisiológicos incluindo a regulação da pressão arterial, neuro-transmissão e imunidade celular (16).

Muitos mecanismos tentam explicar a ação do ON na inibição do crescimento tumoral in vitro. Entre estes, que o ON interage com proteínas que contêm ferro necessárias a respiração e replicação celulares, incluindo a enzima do ciclo do ácido cítrico: aconitase e a enzima da síntese do DNA: ribonucleotídeo redutase, exercendo efeito inibitório sobre o crescimento tumoral. Além disso, o ON exógeno produzido por macrófagos, como também o endógeno produzido por células tumorais, tem capacidade de induzir a apoptose ou morte celular programada em tumores (5).

Na presente investigação, foi observado que nos animais que receberam a suplementação com arginina a 6% apresentaram comprometimento discreto das vísceras necropsiadas, quando comparado aos grupos que receberam a suplementação a 4% ou a dieta padrão (controles), sugerindo desta forma, que a utilização dietética da arginina apresentou- se benéfica na prevenção de metástases, no tumor sólido de Walker 256, corroborando com dados obtidos anteriormente, (10,18), embora o relato de literatura não seja consensual (5,13).

Na presente investigação, foram observadas alterações degenerativas das células tubulares renais, com ausência de células tumorais, em todos os animais que receberam suplementação com arginina. Este fato poderia estar relacionado, eventualmente, a toxicidade da arginina em grau não estabelecido até o presente.

A literatura não se apresenta concensual quanto aos efeitos benéficos da arginina na variação ponderal dos animais. O efeito catabólico da arginina no portador de câncer tem sido defendido por alguns autores (19, 20) e refutado por outros (12,21).

Foi observado na presente investigação, que todos o animais com tumor sólido de Walker 256 apresentaram ganho ponderal, independentemente da suplementação dietética. Este fato ocorreu possivelmente devido aos animais serem jovens, em fase de crescimento. Foi notado também que a suplementação dietética com arginina na concentração de 6% proporcionou um menor ganho ponderal, quando comparada aos demais grupos.

A explicação dos efeitos observados ainda não foi elucidada, e desta forma especulamos que a arginina esteve associada ao menor desenvolvimento tumoral nos grupos com tumor sólido refletindo menor alteração ponderal, ou ainda, a arginina em altas concentrações, pode ocasionar toxicidade e inibição do crescimento celular dos animais jovens, proporcionando diminuição do ganho ponderal.

Em animais jovens, incluindo roedores, a arginina juntamente a outros nove aminoácidos (leucina, isoleucina, lisina, cistina, treonina, triptofano, tirosina e valina) são considerados essenciais (22). Em muitos casos, é sugerido a suplementação dietética destes aminoácidos para que o animal exiba melhor desempenho no crescimento, embora não tenha sido estabelecido a concentração ideal (22,23). Foi sugerido apenas que a administração de altas concentrações de aminoácidos proporcionou efeitos tóxicos em roedores (24).

Os aminoácidos circulantes servem como substrato para a síntese de proteínas, gluconeogênese, ureagênese e catabolismo oxidativo, os quais constituem processos metabólicos que podem estar significantemente alterados no câncer (25-27). Mudanças no metabolismo dos aminoácidos têm sido descritas nos tumores (28,29), como também no hospedeiro (25,30).

Foi observado na presente investigação que a suplementação dietética com arginina a 6% resultou em uma tendência de aumento na concentração plasmática de todos os aminoácidos, nos animais com tumor sólido de Walker 256. Porém, foram obtidas alterações significativas nos quantitativos da arginina, histidina, prolina ornitina e citrulina (P<0.00l).

Entre os aminoácidos que sofreram alteração, a arginina, histidina e prolina são classificados como glicogênicos, ou seja, são aminoácidos cujo catabolismo origina piruvato ou um dos intermediários do ciclo de Krebs. Estes intermediários são substratos importantes para a gliconeogênese e responsáveis por estimular a formação de glicogênio no fígado e músculo dos animais (23).

Os aumentos na concentração dos aminoácidos citrulina, ornitina e arginina devem-se, provavelmente, às relações metabólicas que estes aminoácidos possuem entre si no organismo dos animais. A arginina além de ser derivada da dieta, é também formada através da citrulina como resultado de várias reações inter-órgaos (20). A citrulina sintetizada no fígado dos animais é parcialmente convertida em ornitina, a qual é transformada em arginina e uréia, através da enzima ornitina carbamoiltransferase. A citrulina excedente é absorvida pelo rim. O rim converte a citrulina em arginina. Parte da arginina é utilizada na síntese de proteína e parte é distribuída a outros tecidos do organismo. Na literatura, o aumento destes aminoácidos tem sido relacionado ao aumento na atividade das enzimas ornitina carbamoiltransferase e arginina sintetase no rim de ratos submetidos a altas dietas protéicas (22).

A anemia é uma complicação comumente observada em pacientes oncológicos (33-35). Os mecanismos responsáveis pela anemia no portador de câncer são normalmente extrínsicos ao tumor e devidos a vários mecanismos. No paciente caquético com câncer é observada uma ineficiência na utilização dos nutrientes pelo organismo, além de alterações na ingestão, digestão e absorção dos alimentos, podendo também contribuir no estado anemico dos animais (34).

No presente estudo, foi notado que todos os animais com tumor sólido de Walker 256, em estágio avançado, apresentaram ao exame palidez acentuada das mucosas e orelhas, pelos opacos e sem brilho, movimentos lentos ao toque ou aproximação, diminuição na ingestão da ração e eliminação das fezes.

O número de eritrócitos, a quantidade de hemoglobina, o hematócrito e os números absolutos de leucócitos, neutrófilos e linfócitos, aumentaram com a suplementação com arginina a 6% quando comparado ao grupo que recebeu apenas a dieta padrão, sendo este aumento dose-dependente (p<0.001).

A citologia demonstrou no grupo suplementado com arginina a 6% que cerca de 39.0% dos ratos apresentaram policromasia e aproximadamente 31.0% dos animais apresentaram eritroblastose, indicando possivelmente efeito da arginina na regeneração das células do sistema hematopoético. A leucocito se, com a presença de células mais jovens da linhagem neutrofílica (mielócitos, metamielócitos e neutrófilos bastonetes) foi observada em todos os grupos.

Os resultados indicam que a arginina ocasionou alterações hematol6gicas nos animais, senda que o efeito apresentou-se dose-dependente quando comparado aos grupos de estudo (p<0.001).

Os autores agradecem o apoio financeiro da Fundação de Apoio a Pesquisa do Distrito Federal e do Programa de Apoio ao Desenvolvimento Tecnológico do Brasil para a realização desse trabalho.

1. Beard H.H. The effect of parenteral injection of synthetic amino acids upon the appearence, growth and disappearance of emge sarcoma in rats. Arch Biochem., 1943; 1:177-186.         [ Links ]

2. Weisburger JH, Yamamoto RS & Glass RM. Prevention by Arginine Glutamate of the carcinogenicity of acetamide in rats. Toxicol Appl Pharmacol, 1969; 14:163.        [ Links ]

3. Takeda Y, Tominaga T, Tei N, Kitamura M & Taga S. Inhibitory effect of L-arginine on growth of rat mammary tumors induced By 7,12-Dimethylbenz (a) Anthracene. Cancer Res, 1975; 35:2390-2393.         [ Links ]

4. Novaes MRCG. Efeitos da suplementação nutricional com L- Arginina no tumor de Walker 256. Tese de Doutorado. Universidade De Brasília, 1999.        [ Links ]

5. Senkal M, Kemen M, Homann HH, Eickhoff U, Baier J & Zumtobel V. Modulation of postoperative immune response by enteral nutrition with a diet enriched with arginine, RNA, And Omega-3 Fatty Acids in patients with upper gastrointestinal cancer. Eur J Surg, 1995; 161:115-122.         [ Links ]

6. Cho-Chung YS, Clair T & Bodwin JS. Arrest of marnmary tumor in vivo by L-arginine: Stimulation of NAD-dependent activation of adenylatecyclase. Biochem Biophy Res Commun., 1980; 95:1306-1310.         [ Links ]

7. Park KGM, Hayes PD, Garlick PJ, Sewell H & Eremin O. Stimulation of lymphocyte natural cytotoxity by L-arginine. Lancet, 1991; 337:645-646.        [ Links ]

8. Yeatman JT, Risley GL & Brunson ME. Depletion of dietary arginine inhibts growth of metastatic tumor. Arch Surg, 1991; 126:1376-1382.         [ Links ]

9. Tachibana L, Mukai K, Moriguchi S, Takama S & Kishino Y. Evaluation of the effect of arginine-enriched amino acid solution on tumor growth. J Parenter Enteral Nutr, 1985; 9:428-434.         [ Links ]

10. Milner J A & Stepanovich LV. Inhibitor effect of dietary arginine on growth of Ehrlich Ascites Tumor cells in mice. J Nutr, 1979; 109:489-494.         [ Links ]

11. Rettori O, Vieira-Malos AN & Tahin QS. Variability and discontinuity of the pathognomonic systemic effects caused by Walker 256 tumor progression in rats. Turnori, 1995; 81:370- 377.         [ Links ]

12. Reynolds JV, Daly JM, Shou J, Sigal R, Ziegler MM & Naji A. Immunological effects of arginine supplementation in tumor bearing and non tumor bearing hosts. Ann Surg, 1990; 211 :202- 210.         [ Links ]

13. Ye SL, Istafan NW, Drriscoll DF & Bistrian BR. Tumor and host response to arginine and branched chain amino acid enriched total parenteral nutrition. Cancer, 1992; 69:261-270.         [ Links ]

14. Konur A, Krause SW, Reahli M, Kreutz M & Andreesen R. Human monocytes induce a carcinoma cell line to ssecrete high amounts of nitric oxide. J Immunology, 1996; 2110-2115.         [ Links ]

15. Carmo A, Lopes C, Santos M, Proença R, Cunha-Vaz J & Carvalho A. Nitric Oxide Synthase activity and L-arginine metabolism in the retinas from streptozotocin-induced rats. General Pharmacology, 1998; 30:319-324.         [ Links ]

16. Tozer GM, Frise VE & Chaplin DJ. Inhibition of nitric oxide synthase induces a selective in tumor blood flow that is reversible with L-arginine. Cancer Research., 1997; 57:948-955.         [ Links ]

17. Seifter E, Rettura G & Barbul A. Arginine: An essential amino acid for injured rats. Surgery, 1978; 84:224-230.         [ Links ]

18. Kirk SJ & Barbul A. Role of arginine in trauma. sepsis and immunity. J Parenteral Enteral Nut., 1990;14(5):226s-229s.         [ Links ]

19. Milner JA, Wakeling AE & Visek WJ. Effect of arginine deficiency on growth and intermediary metabolism in rats. J Nutrition, 1974; 104(12):1681-1689.         [ Links ]

20. Rogers QR, Freedland RA & Symmons RA. In vivo synthesis and utilization of arginine in the rat. Amer J Physiology, 1972; 223(1):236-240.        [ Links ]

21. Champe P  Harvey  RA. Bioquímica IIustrada.In: Aminoácidos. Ed. Artes Médicas Sul Ltda. 2 Ed., Porto Alegre, 1997,7-15,91 p.        [ Links ]

22. Barbul A. Arginine: Biochemistry, Physiology and therapeutic implications. J Parenter Enteral Nutr, 1986; 10:227-238.         [ Links ]

23. Guaitani A, Recchia M, Carli M, Rocchetti M, Bartosek I & Garattini S. Walker Carcinoma 256: A Model for studies on tumor anorexia and cachexia. Oncology, 1982; 39:173-178.         [ Links ]

24. Hester JE & Fee WE. Effect of arginine on growth of squamous cell carcinoma in the C3h/Km mouse. Arch Otolaryngol. Head Neck Surg., 1995; 121 (2):193-196.        [ Links ]

25. Clarke EF, Lewis AM & Waterhouse C. Peripheral amino acid levels in patients with cancer. Cancer, 1978; 42:2909-13.         [ Links ]

26. Lundholm K, Edstrom S, Karlberg I, Ekman L & Schersten T. Relationship between food intake, body composition and tumor growth to host metabolism in nongrowing mice with sarcoma. Cancer Res., 1980; 40:2516-2522.         [ Links ]

27. Pisters PW & Pearlstone DB. Protein and amino acid metabolism in cancer cachexia: Investigative techniques and therapeutic interventions. Crit Rev In Clin Lab Sciences., 1993; 30(3):223- 272.         [ Links ]

28. Rivera S, Azcón-Bieto J, López-Soriano FJ, Miralpeix M & Argilés JM. Amino acid metabolism in tumor-bearing mice. Biochem J, 1988; 249:443-449.        [ Links ]

29. Marquez J, Sánchez-Jiménez F, Medina MA, Quesada AR, Nuñez CL. Nitrogen metabolism in tumor bearing mice. Arch Biochem Biophys, 1989; 268:667-675.        [ Links ]

30. Kurzer M, Janiszewski J, Meguid MM. Amino acid profiles in tumor-bearing and pair-fed nontumor-bearing malnourisshed rats. Cancer, 1988; 62:1492-1496.        [ Links ]

31. Tayek JA, Istfan NW, Jones CT, Harmawy KJ, Bistrian BR, Black-Bum GL. Influence of the Walker 256 carcinosarcoma on muscle, tumor, and whole-body protein synthesis andgrowth rate in the cancer-bearing rato Cancer Res, 1986; 46:5649-5654.         [ Links ]

32. Norton JA, Gorschboth CM, Wesley RA, Burt ME, Brennan MF. Fasting plasma amino acid levels in cancer patients. Cancer, 1985; 56:1181-1186.         [ Links ]

33. Theologides A. Pathogenesis of caquexia in cancer: A review and a hypothesis. Cancer, 1972; 20:484-488.         [ Links ]

34. Saba HI. Anemia in cancer patients. Introduction an overviews. Cancer Control, 1998,5:3-5.         [ Links ]

35. Zuckerman KS. Hematopoietic abnormalities in patients with cancer. Cancer Control, 1998; 5:6-11.         [ Links ]

36. Bach JS & Lasnitzki I. Some aspects of the role of arginine and arginase in mouse Carcinoma 63. Enzymology, 1953; 12:198- 205.         [ Links ] ]]> 1 1943 1 177-186. 2 1969 14 163 3 1975 35 2390-2393 4 5 1995 161 115-122 6 1980 95 1306-1310 7 1991 337 645-646 8 1991 126 1376-1382 9 1985 9 428-434 10 1979 109 489-494 11 1995 81 370- 377 12 1990 211 202- 210 13 1992 69 261-270 14 1996 2110-2115 15 1998 30 319-324 16 1997 57 948-955 17 1978 84 224-230 18 1990 14 5 5 226s-229s 19 1974 104 12 12 1681-1689 20 1972 223 1 1 236-240 21 1997 2 7-15, 91 22 1986 10 227-238 23 1982 39 173-178 24 1995 121 2 2 193-196 25 1978 42 2909-13 26 1980 40 2516-2522. 27 1993 30 3 3 223- 272 28 1988 249 443-449 29 1989 268 667-675 30 1988 62 1492-1496 31 1986 46 5649-5654 32 1985 56 1181-1186 33 1972 20 484-488 34 1998 5 3-5 35 1998 5 6-11. 36 1953 12 198- 205.