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<article-title xml:lang="es"><![CDATA[Efectos del efluente de curtiembre sobre ceriodaphnia dubia (crustacea, cladocera) en condiciones experimentales]]></article-title>
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<institution><![CDATA[,Universidad Nacional del Litoral Santa Fe Argentina M Sc en Ciencias Biologicas Mencion Ecologia Universidad de Chile Profesora y Directora Departamento de Ciencias Naturales Facultad de Humanidades y Ciencias]]></institution>
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<abstract abstract-type="short" xml:lang="en"><p><![CDATA[The aim of this study was to assess empirically the effects of several concentrations of tannery waste water with a high content of Cr and sulphide on the life history attributes and population parameters of Ceriodaphnia dubia Richard 1894 (Crustacea, Cladocera) in chronic bioessays. The effluent significantly affected survival, fecundity, number of molts and broods of C. dubia. The time between broods and the age of the first reproduction was delayed by the increase of the effluent concentration, producing no broods in concentrations >1ml·l-1. R0 was <1 in effluent concentrations >0.6ml·l-1, which defined the highest limiting concentration that allows the establishment and development of zooplankton populations in the environment. The importance of the use of species with broad distribution and the use of integrative population parameters in ecotoxicological surveys are pointed out. The importance of the development of bioessays with complex effluents is discussed.]]></p></abstract>
<abstract abstract-type="short" xml:lang="pt"><p><![CDATA[O objetivo de este estudo foi avaliar empiricamente os efeitos de distintas concentrações de efluente de curtiembre com alto conteúdo em Cr e sulfuro sobre os atributos de historia de vida e parâmetros populacionais de Ceriodaphnia dubia Richard 1894 (Crustácea, Cladocera) em bio ensaios crônicos. Encontrou-se que o efluente afetou significativamente a sobrevivência, a fecundidade, número de mudas e de camadas de C. dubia. Incrementou-se o tempo inter mudas e se atrasou a idade da primeira reprodução com o aumento na concentração de efluente, não produzindo crias em concentrações >1ml·l-1. R0 fue <1 em concentrações >0,6ml·l de efluente, o que indica um umbral máximo de concentração para o estabelecimento e manutenção de populações zôo-planctônicas no ambiente. Destaca-se a importância de incrementar o emprego de espécies de ampla distribuição assim como o uso de parâmetros populacionais integradores em estudos eco toxicológicos. Discute-se a importância de desenvolver bio ensaios submetendo aos organismos de prova a ação de efluentes complexos pelo maior realismo que aportam.]]></p></abstract>
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<kwd lng="es"><![CDATA[Bioensayos crónicos]]></kwd>
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</front><body><![CDATA[   <B>    <P align="center"><font face="Times New Roman" size="4">EFECTOS DEL EFLUENTE DE CURTIEMBRE SOBRE Ceriodaphnia dubia (CRUSTACEA, CLADOCERA) EN CONDICIONES EXPERIMENTALES</font></P>  </B>     <P align="center"><font face="Times New Roman" size="3">Natalia Ceresoli y Ana Mar&iacute;a Gagneten&nbsp;</font></P>      <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Natalia Ceresoli. Licenciada en Biodiversidad, Universidad Nacional del Litoral, Argentina. Investigadora, Fundaci&oacute;n Ecosistemas del Chaco Oriental, Formosa, Argentina. e-mail: nceresoli@arnet.com.ar</font></P>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Ana Mar&iacute;a Gagneten. M.Sc. en Ciencias Biol&oacute;gicas, Menci&oacute;n Ecolog&iacute;a, Universidad de Chile. Profesora y Directora, Departamento de Ciencias Naturales, Facultad de Humanidades y Ciencias. Universidad Nacional del Litoral, Santa Fe, Argentina. Direcci&oacute;n: Ciudad Universitaria. Paraje El Pozo. 3000 Santa Fe. Argentina. e-mail: amgagnet@fhuc.unl.edu.ar</font></P>  <B>      <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Resumen</font></P> </B>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">El objetivo de este estudio fue evaluar emp&iacute;ricamente los efectos de distintas concentraciones de efluente de curtiembre con alto contenido en Cr y sulfuro sobre los atributos de historia de vida y par&aacute;metros poblacionales de Ceriodaphnia dubia Richard 1894 (Crustacea, Cladocera) en bioensayos cr&oacute;nicos. Se encontr&oacute; que el efluente afect&oacute; significativamente a la sobrevivencia, la fecundidad, n&uacute;mero de mudas y de camadas de C. dubia. Se increment&oacute; el tiempo intermudas y se retras&oacute; la edad de la primera reproducci&oacute;n con el aumento en la concentraci&oacute;n de efluente, no produciendo cr&iacute;as en concentraciones &gt;1ml·l<sup>-1</sup>. R<sub>0</sub> fue &lt;1 en concentraciones &gt;0,6ml·l de efluente, lo que indica un umbral m&aacute;ximo de concentraci&oacute;n para el establecimiento y mantenimiento de poblaciones zooplanct&oacute;nicas en el ambiente. Se destaca la importancia de incrementar el empleo de especies de muy amplia distribuci&oacute;n as&iacute; como el uso de par&aacute;metros poblacionales integradores en estudios ecotoxicol&oacute;gicos. Se discute la importancia de desarrollar bioensayos sometiendo a los organismos de prueba a la acci&oacute;n de efluentes complejos por el mayor realismo que aportan.</font></P>  <B>    <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Summary</font></P> </B>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">The aim of this study was to assess empirically the effects of several concentrations of tannery waste water with a high content of Cr and sulphide on the life history attributes and population parameters of Ceriodaphnia dubia Richard 1894 (Crustacea, Cladocera) in chronic bioessays. The effluent significantly affected survival, fecundity, number of molts and broods of C. dubia. The time between broods and the age of the first reproduction was delayed by the increase of the effluent concentration, producing no broods in concentrations &gt;1ml·l<sup>-1</sup>. R<sub>0</sub> was &lt;1 in effluent concentrations &gt;0.6ml·l<sup>-1</sup>, which defined the highest limiting concentration that allows the establishment and development of zooplankton populations in the environment. The importance of the use of species with broad distribution and the use of integrative population parameters in ecotoxicological surveys are pointed out. The importance of the development of bioessays with complex effluents is discussed.</font></P>  <B>    <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Resumo</font></P> </B>     ]]></body>
<body><![CDATA[<P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">O objetivo de este estudo foi avaliar empiricamente os efeitos de distintas concentra&ccedil;&otilde;es de efluente de curtiembre com alto conte&uacute;do em Cr e sulfuro sobre os atributos de historia de vida e par&acirc;metros populacionais de Ceriodaphnia dubia Richard 1894 (Crust&aacute;cea, Cladocera) em bio ensaios cr&ocirc;nicos. Encontrou-se que o efluente afetou significativamente a sobreviv&ecirc;ncia, a fecundidade, n&uacute;mero de mudas e de camadas de C. dubia. Incrementou-se o tempo inter mudas e se atrasou a idade da primeira reprodu&ccedil;&atilde;o com o aumento na concentra&ccedil;&atilde;o de efluente, n&atilde;o produzindo crias em concentra&ccedil;&otilde;es &gt;1ml·l<sup>-1</sup>. R<sub>0</sub> fue &lt;1 em concentra&ccedil;&otilde;es &gt;0,6ml·l de efluente, o que indica um umbral m&aacute;ximo de concentra&ccedil;&atilde;o para o estabelecimento e manuten&ccedil;&atilde;o de popula&ccedil;&otilde;es z&ocirc;o-planct&ocirc;nicas no ambiente. Destaca-se a import&acirc;ncia de incrementar o emprego de esp&eacute;cies de ampla distribui&ccedil;&atilde;o assim como o uso de par&acirc;metros populacionais integradores em estudos eco toxicol&oacute;gicos. Discute-se a import&acirc;ncia de desenvolver bio ensaios submetendo aos organismos de prova a a&ccedil;&atilde;o de efluentes complexos pelo maior realismo que aportam.</font></P>  <B>    <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">PALABRAS CLAVE /</font> </B><font face="Times New Roman" size="3"> Bioensayos cr&oacute;nicos / <I>Ceriodaphnia dubia</I> / Curtiembre / Efluente de Curtiembre / Ecotoxicolog&iacute;a /</font></P>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Recibido: 10/03/2003. Modificado: 25/07/2003. Aceptado: 29/07/2003</font></P> <B>    <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Introducci&oacute;n</font></P> </B>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">La contaminaci&oacute;n industrial trajo aparejado el deterioro qu&iacute;mico y biol&oacute;gico de r&iacute;os, lagos y embalses. Es com&uacute;n estudiar la contaminaci&oacute;n en t&eacute;rminos puramente qu&iacute;micos, sin considerar sus complejos efectos biol&oacute;gicos. En las dos &uacute;ltimas d&eacute;cadas, sin embargo, esta perspectiva ha cambiado por el incremento en el control de la contaminaci&oacute;n, basado en monitoreos rigurosos para determinar si se alcanzan los est&aacute;ndares prescritos. Sin embargo, en los pa&iacute;ses en v&iacute;as de desarrollo frecuentemente son escasos o no existen datos accesibles y confiables de la cantidad y calidad de los recursos h&iacute;dricos subterr&aacute;neos y superficiales (ENSIC, 1993).</font></P>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Una causa importante de contaminaci&oacute;n es la incorporaci&oacute;n de efluentes altamente t&oacute;xicos provenientes de la industria del procesamiento de las pieles. Estos efluentes est&aacute;n compuestos fundamentalmente por sulfuros (bajo la forma de &aacute;cido sulf&iacute;drico), cromo, cloruros, sulfatos, limo, taninos vegetales y alto contenido de materia org&aacute;nica de origen animal. En sus procesos de producci&oacute;n utilizan como m&iacute;nimo 100l de agua por kg de piel que, con grado variable de purificaci&oacute;n antes de su volcado, tienen como destino los cursos de agua (Freseniusand y Schneider, 1989). En el arroyo Las Prusianas (31º22'S, 61º08'O) que desemboca en el R&iacute;o Salado del Norte (Santa Fe, Argentina), se vuelcan efluentes de curtiembre crudos, sin tratamientos previos.</font></P>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">A pesar de recorrer &aacute;reas densamente pobladas, en este ecosistema hasta el momento s&oacute;lo se han realizado algunos monitoreos de metales pesados, desconoci&eacute;ndose el efecto que los mismos u otros componentes del efluente de curtiembre pudieran tener sobre los organismos acu&aacute;ticos.</font></P>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Debido al rol ecol&oacute;gico de los clad&oacute;ceros como importantes v&iacute;nculos en las tramas tr&oacute;ficas de ecosistemas acu&aacute;ticos, as&iacute; como por su alta vulnerabilidad a sustancias t&oacute;xicas, se han utilizado muchas especies de clad&oacute;ceros como bioindicadoras para determinar la toxicidad de efluentes industriales (Pratt <I>et al</I>., 1989; Niederlehner <I>et al</I>., 1990; Jop <I>et al</I>., 1992) aunque los bioensayos con sustancias t&oacute;xicas aisladas son m&aacute;s frecuentes que con efluentes complejos. Recientemente se ha incrementado el uso de <I>Ceriodaphnia dubia</I> Richard 1894 en bioensayos por presentar un ciclo de vida relativamente corto, cuidado y mantenimiento poco costosos y alta sensibilidad a diferentes t&oacute;xicos. Para realizar los bioensayos se seleccion&oacute; <I>C. dubia</I> porque es una especie frecuente en ecosistemas l&eacute;nticos (DeGraeve <I>et al</I>., 1992; Anderson y Benke, 1994; Ferrari y Ferard, 1996) del tipo de cuerpos de aguas someras y ef&iacute;meros, caracter&iacute;sticos de la llanura de inundaci&oacute;n del r&iacute;o Paran&aacute; (Paggi y Jose de Paggi, 1990). Adem&aacute;s tiene muy amplia distribuci&oacute;n a nivel mundial, habiendo sido caracterizada por Negrea (1983, citado en Ru&iacute;z y Bahamonde, 1989) como especie hol&aacute;rtica, eti&oacute;pica y neotropical. Dado que es necesario disponer de referentes que permitan estimar el grado de deterioro que ha experimentado el ambiente<I>, C. dubi</I>a resulta de inter&eacute;s para realizar estudios comparativos con especies m&aacute;s intensamente estudiadas pero con distribuci&oacute;n m&aacute;s restringida como<I> Daphnia magna</I> Straus. Esto permitir&aacute; incrementar el conocimiento del efecto de la contaminaci&oacute;n industrial en ecosistemas acu&aacute;ticos continentales de pa&iacute;ses en v&iacute;as de desarrollo.</font></P>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">El estudio fue dirigido a evaluar emp&iacute;ricamente el efecto de un gradiente de concentraci&oacute;n de efluente de curtiembre sobre atributos de historia de vida y par&aacute;metros poblacionales d<I>e C. dubia</I> en bioensayos cr&oacute;nicos en microcosmos</font><B><font face="Times New Roman" size="3">.</font></P>      <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Materiales y M&eacute;todos</font></P> </B><I>     ]]></body>
<body><![CDATA[<P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Cultivo de </font> </I><font face="Times New Roman" size="3">Ceriodaphnia dubia</font></P>      <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Se gener&oacute; un cultivo stock clonal d<I>e C. dub</I>ia a partir de un solo organismo obtenido de un ambiente no contaminado en la Reserva Ecol&oacute;gica de la Ciudad Universitaria &quot;El Pozo&quot; 31º37'S, 60º41'O, provincia de Santa Fe, Argentina. Si bien el uso de medio sint&eacute;tico tiene ventajas importantes, vinculadas fundamentalmente a la repetici&oacute;n de las condiciones exactas de los bioensayos ISO (1982), se ha registrado disminuci&oacute;n significativa de la reproducci&oacute;n y del crecimiento, alta mortalidad de neonatos, escaso desarrollo de huevos partenogen&eacute;ticos y p&eacute;rdida de partes de las segundas antenas en <I>Daphnia</I>, atribuibles a la deficiencia en oligoelementos que caracteriza a este medio (Elendt y Bias, 1990). Se eligi&oacute; el agua de la Reserva Ecol&oacute;gica como agua de diluci&oacute;n dadas la expectativa que los organismos de experimentaci&oacute;n tuvieran una adecuada sobrevivencia y reproducci&oacute;n en este medio, la facilidad de manipulaci&oacute;n experimental, la ausencia de elementos contaminantes, su similar dureza en relaci&oacute;n con la del ecosistema estudiado (aproximadamente 100mgCaCO<sub>3</sub>·l<sup>-1</sup>) y la recomendaci&oacute;n de APHA (1992) en el sentido de establecer condiciones para las pruebas de toxicidad que se acerquen cuanto sea posible a las condiciones ambientales naturales.</font></P>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">El cultivo fue aclimatado a condiciones de laboratorio durante un mes (4ª generaci&oacute;n de neonatos) y mantenido en un recipiente de vidrio con agua filtrada de la Reserva, alimentado con <I>Selenastrum capricornutum</I> Printz previamente cultivada seg&uacute;n Borowitzka (1988), y colocado en una c&aacute;mara de cultivo a 22 ±1ºC, con fotoper&iacute;odo de 12h de luz fr&iacute;a, blanca, 2300 lux.</font></P>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Del cultivo stock se separ&oacute; un total de 90 individuos para ser utilizados en el control y en ocho concentraciones diferentes de efluente (tratamientos). Se utilizaron diez recipientes (r&eacute;plicas) de 35ml para cada tratamiento y control. En cada frasco se coloc&oacute; un ejemplar de <I>C. dubia.</I> El agua y el alimento se renovaron tres veces por semana para evitar el crecimiento de hongos y bacterias. Se control&oacute; el tiempo de sobrevivencia, el n&uacute;mero de mudas, el tiempo transcurrido entre dos mudas sucesivas (tiempo intermudas), el n&uacute;mero de neonatos por hembra y el n&uacute;mero de camadas. Los controles y tratamientos fueron alimentados con 0,1ml de suspensi&oacute;n de <I>S. capricornutum</I>  (5x10<sup>5</sup>c&eacute;l·ml·l<sup>-1</sup> seg&uacute;n Porter <I>et al</I>., 1982).</font></P>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Seg&uacute;n lo considerado por Walsh <I>et al</I>. (1980), el efluente no fue sometido a autoclave para no alterar la toxicidad de sus componentes. El gradiente de concentraciones de efluente ensayadas fue 0ml·l<sup>-1</sup> (control, agua de la Reserva Ecol&oacute;gica sin efluente); 0,2ml·l<sup>-1</sup>; 0,4ml·l<sup>-1</sup>; 0,8ml·l<sup>-1</sup>; 1,0ml·l<sup>-1</sup>; 1,2ml·l<sup>-1</sup>; 1,4ml·l<sup>-1</sup>; 1,6ml·l<sup>-1</sup> y 1,8ml·l<sup>-1</sup>. Con los datos experimentales se construyeron tablas de vida para los tratamientos y el control, que permitieron obtener par&aacute;metros de sobrevivencia, de fecundidad, edad a la primera reproducci&oacute;n, n&uacute;mero de camadas y tasa reproductiva neta (R<sub>0</sub>) para cada cohorte, seg&uacute;n Pianka (1982):</font></P>      <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">R<sub>0</sub> = <font SIZE="2"><font FACE="Symbol">å</font></font>(lx·mx)</font></P>      <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">donde R<sub>0</sub>: tasa reproductiva neta, lx: sobrevivencia a la edad x, y mx: fecundidad a la edad x.</font></P>      <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">En el efluente puro y en las diluciones se midieron las concentraciones de sulfuro (mg·l<sup>-1</sup>) con la t&eacute;cnica de titulaci&oacute;n por yodometr&iacute;a (Harris, 1992), de materia org&aacute;nica (mgO<sub>2</sub> disuelto·l<sup>-1</sup>) con la t&eacute;cnica de titulaci&oacute;n por permanganometr&iacute;a (Harris, 1992), y las de Cr total (µg·l<sup>-1</sup>) por atomizaci&oacute;n electrot&eacute;rmica en horno de grafito con plataforma de L'vov, seg&uacute;n EPA, 1999. Se utiliz&oacute; un espectrofot&oacute;metro UV-visible Perkin Elmer modelo lambda 40.</font></P>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Para el an&aacute;lisis estad&iacute;stico de sobrevivencia se utiliz&oacute; el an&aacute;lisis de Kaplan-Meier de comparaci&oacute;n entre m&uacute;ltiples muestras. Se compar&oacute; la sobrevivencia entre pares de tratamientos. Se aplic&oacute; ANOVA de medidas repetidas y test a posteriori de Tukey, a un nivel de confianza del 95% (Sokal y Rohlf, 1969) para los an&aacute;lisis de n&uacute;mero de cr&iacute;as por hembra, n&uacute;mero de mudas y n&uacute;mero de camadas, previa transformaci&oacute;n de los datos a ra&iacute;z cuadrada, por el bajo n&uacute;mero de datos de cada tratamiento (N= 10).</font></P>  <B>    <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Resultados</font></P> </B>     ]]></body>
<body><![CDATA[<P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">En el efluente puro, sin diluir, se obtuvo una concentraci&oacute;n de sulfuro= 940,8mg·l<sup>-1</sup> y de Cr= 75µg·l<sup>-1</sup>. Los contenidos de sulfuro y de Cr en cada una de las diluciones de efluente ensayadas se muestran en la <a href="#tabl1"> Tabla I</a>. Las caracter&iacute;sticas qu&iacute;micas del agua utilizada en los bioensayos se muestran en la <a href="#tabl2"> Tabla II</a>. Debido a que no se produjeron cr&iacute;as ni mudas en los tratamientos con las dos concentraciones m&aacute;s altas, en ellos no se consideraron la fecundidad, la edad de la primera reproducci&oacute;n ni el n&uacute;mero de mudas.</font></P>      <P align="justify"><a name="tabl1"></a></P>      <P align="center"><font face="Times New Roman" size="3"><IMG SRC="/img/fbpe/inci/v28n8/Image1035.jpg" WIDTH=578 HEIGHT=150></font></P>      
<P align="center"><a name="tabl2"></a></P>     <P align="center"><font face="Times New Roman" size="3"><IMG SRC="/img/fbpe/inci/v28n8/Image1036.jpg" width=464 height=273></font></P>  <I>    
<P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Sobrevivencia</font></P> </I>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">La sobrevivencia de <I>C. dubia</I> en los distintos tratamientos se muestra en la <a href="#fig1"> Figura 1</a>. En el grupo control la sobrevivencia disminuy&oacute; gradualmente hasta los 44 d&iacute;as. En los lotes tratados con efluente, la sobrevivencia fue inversa a la concentraci&oacute;n empleada. Con valores mayores a 1,4ml·l<sup>-1</sup> la sobrevivencia se redujo a 10 d&iacute;as.</font></P>      <P align="justify"><a name="fig1"></a></P>      <P align="center"><font face="Times New Roman" size="3"><IMG SRC="/img/fbpe/inci/v28n8/Image1037.jpg" width=462 height=335></font></P>      
<P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">La disminuci&oacute;n en la sobrevivencia tuvo un efecto negativo sobre el n&uacute;mero de mudas, de eventos reproductivos y de cr&iacute;as ya que estos par&aacute;metros dependen a su vez de la sobrevivencia.</font></P>     ]]></body>
<body><![CDATA[<P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">El an&aacute;lisis de sobrevivencia de Kaplan-Meier mostr&oacute; diferencias significativas entre los tratamientos (X<sup>2</sup>= 52,215; gl= 9; p&lt;&lt;0,001). La comparaci&oacute;n por pares entre tratamientos se muestra en la <a href="#tabl3"> Tabla III</a>. La sobrevivencia de <I>C. dubia</I> en concentraciones bajas de efluente (0,2 y 0,4ml·l<sup>-1</sup>) no fue significativamente diferente respecto al control. No ocurri&oacute; lo mismo en los dem&aacute;s tratamientos, que mostraron diferencias significativas con respecto al control excepto en 0,8ml·l<sup>-1</sup>. La ausencia de diferencias significativas en este tratamiento pudo deberse a la sobrevivencia de un &uacute;nico individuo durante m&aacute;s tiempo que en el control. Dentro de estos lotes, se diferenciaron tres grupos. El primero, representado por las concentraciones intermedias de efluente (desde 0,6 a 1ml·l<sup>-1</sup>), que presentaron diferencias con el tratamiento m&aacute;s bajo (0,2ml·l<sup>-1</sup>) pero no con los otros tratamientos intermedios. El segundo, formado por la sobrevivencia en 1,2 y 1,4ml·l<sup>-1</sup>, no mostr&oacute; diferencias significativas con todas las otras concentraciones excepto, como ya se se&ntilde;al&oacute;, con el control. En el tercer grupo, formado por los dos tratamientos con mayor concentraci&oacute;n de efluente (1,6 y 1,8ml·l<sup>-1</sup>) la sobrevivencia se separ&oacute; del resto de los tratamientos y present&oacute; diferencias significativas con todos los tratamientos.</font></P>      <P align="justify"><a name="tabl3"></a></P>      <P align="center"><font face="Times New Roman" size="3"><IMG SRC="/img/fbpe/inci/v28n8/Image1038.jpg" WIDTH=578 HEIGHT=276></font></P>  <I>    
<P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Fecundidad</font></P>      <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">N&uacute;mero de cr&iacute;as/hembra</font></I><font face="Times New Roman" size="3">. El n&uacute;mero total promedio de neonatos en las diez r&eacute;plicas, durante toda la experiencia, fue de 103,5 en el control; 64,8 en 0,2ml·l<sup>-1</sup>; 53,1 en 0,4ml·l<sup>-1</sup>; 7,1 en 0,6ml·l<sup>-1</sup>; 5,7 en 0,8ml·l<sup>-1</sup> y 2,9 en 1,0ml·l<sup>-1</sup>.</font></P>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">En el grupo control cada hembra gener&oacute; un promedio de 16,2 neonatos por d&iacute;a (<a href="#tabl4">Tabla IV</a>). Los organismos sometidos al gradiente de efluente en todos los casos produjeron un numero de cr&iacute;as sensiblemente menor. Los valores disminuyeron hasta la inhibici&oacute;n total en la producci&oacute;n de neonatos en concentraciones de efluente mayores a 1,0ml·l<sup>-1</sup>. Al comparar el n&uacute;mero de neonatos producidos en los tratamientos y el control, el an&aacute;lisis de la varianza mostr&oacute; un marcado efecto negativo del efluente (<a href="#fig2">Figura 2</a>; <a href="#tabl5"> Tabla V</a>) con p&lt;&lt;0,001 (ANOVA). En la <a href="#fig2"> Figura 2</a> se diferencian dos grupos de curvas, uno formado por el control y las dos concentraciones m&aacute;s bajas, con una alta producci&oacute;n de neonatos, y el otro formado por las concentraciones 0,6; 0,8 y 1,0ml·l<sup>-1,</sup> con una producci&oacute;n de neonatos mucho menor.</font></P>      <P align="justify"><a name="tabl4"></a></P>      <P align="center"><font face="Times New Roman" size="3"><IMG SRC="/img/fbpe/inci/v28n8/Image1039.jpg" WIDTH=578 HEIGHT=298></font></P>      
<P align="center"><a name="fig2"></a></P>     <P align="center"><font face="Times New Roman" size="3"><IMG SRC="/img/fbpe/inci/v28n8/Image1040.jpg" width=464 height=409></font></P>     
]]></body>
<body><![CDATA[<P align="center"><a name="tabl5"></a></P>     <P align="center"><font face="Times New Roman" size="3"><IMG SRC="/img/fbpe/inci/v28n8/Image1041.jpg" WIDTH=578 HEIGHT=517></font></P>      
<P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Se aplic&oacute; el test de Tukey en tres momentos a lo largo del experimento, cuando ocurrieron diferencias notables en la producci&oacute;n de neonatos entre los distintos tratamientos, en los d&iacute;as 14, 21 y 28. Al d&iacute;a 14 se encontraron diferencias significativas entre el control, el tratamiento 0,2ml·l<sup>-1</sup> y el tratamiento 0,4ml·l<sup>-1</sup> <I>vs</I> 0,6; 0,8 y 1,0ml·l<sup>-1</sup>. Al d&iacute;a 21 se encontraron diferencias significativas s&oacute;lo entre el tratamiento 0,2ml·l<sup>-1</sup> <I>vs</I> 0,6; 0,8 y 1,0ml·l<sup>-1</sup>. En el d&iacute;a 28 los distintos tratamientos no mostraron diferencias significativas debido a la alta tasa de mortalidad generada por la acci&oacute;n t&oacute;xica del efluente de curtiembre en todas las concentraciones.</font></P> <I>    <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Edad de primera reproducci&oacute;n</font></I><font face="Times New Roman" size="3">. La edad de la primera reproducci&oacute;n se increment&oacute; con el aumento de la concentraci&oacute;n de efluente hasta 1ml·l<sup>-1</sup>. <I>C. dubia </I>no produjo cr&iacute;as a concentraciones mayores a &eacute;sta (<a href="#fig4">Tabla IV</a>). Estos resultados permitir&iacute;an inferir que a concentraciones bajas de efluente, <I>C. dubia</I> retrasa la edad de la primera reproducci&oacute;n, mientras que a concentraciones elevadas, s&oacute;lo asigna recursos al mantenimiento y al crecimiento, no a la reproducci&oacute;n. El retraso en la producci&oacute;n de neonatos sumado a la disminuci&oacute;n en la fecundidad, podr&iacute;a tener importantes consecuencias poblacionales.</font></P> <I>    <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">N&uacute;mero de mudas</font></I><font face="Times New Roman" size="3">. A medida que aument&oacute; la concentraci&oacute;n de contaminante disminuy&oacute; significativamente el n&uacute;mero de mudas (<a href="#fig3">Figura 3</a>; <a href="#fig4"> Tabla IV</a>; <a href="#tabl5"> Tabla V</a>) con p&lt;&lt;0,001 (ANOVA). Los altos valores del desv&iacute;o se debieron a que en algunas r&eacute;plicas del mismo tratamiento, en especial en las concentraciones m&aacute;s altas, no se produjeron mudas. En 1,6 y 1,8ml·l<sup>-1</sup> s&oacute;lo se produjeron 3 mudas durante toda la experiencia, y en un solo frasco en ambos casos.</font></P>      <P align="justify"><a name="fig3"></a></P>      <P align="center"><font face="Times New Roman" size="3"><IMG SRC="/img/fbpe/inci/v28n8/Image1042.jpg" width=448 height=292></font></P>      
<P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Se aplic&oacute; test de Tukey en siete momentos a lo largo del experimento, cuando ocurrieron diferencias notables en la producci&oacute;n de mudas, en los d&iacute;as 2, 9, 16, 23, 30, 37 y 44. Los primeros d&iacute;as las diferencias significativas se presentaron entre los cinco primeros tratamientos <I>vs.</I> los cinco &uacute;ltimos. A los d&iacute;as 9 y 16, hubo diferencias significativas entre el control y 0,2ml·l<sup>-1</sup> <I>vs.</I> los restantes tratamientos. A los d&iacute;as 23 y 30 no se presentaron diferencias significativas, al igual que al d&iacute;a 44. Al d&iacute;a 37 el control mostr&oacute; diferencias significativas con todos los grupos sometidos al gradiente de concentraci&oacute;n de efluente.</font></P> <I>    <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Tiempo intermudas</font></I><font face="Times New Roman" size="3">. El tiempo intermudas es un par&aacute;metro que en los clad&oacute;ceros indica el tiempo en alcanzar la madurez. Tambi&eacute;n indica que el organismo en ese lapso de tiempo est&aacute; asignando recursos al crecimiento y al desarrollo. El tiempo intermudas se increment&oacute; con la concentraci&oacute;n de efluente, es decir, mayores concentraciones de efluente se correspondieron con mayores retrasos en el crecimiento (<a href="#tabl4">Tabla IV</a>; en 1,6 y 1,8ml·l<sup>-1</sup> los valores corresponden a un solo individuo sobreviviente). Se observ&oacute; que en el control, <I>C. dubia </I>comenz&oacute; a mudar m&aacute;s tempranamente que en todos los tratamientos con efluente, poniendo en evidencia un crecimiento m&aacute;s r&aacute;pido en ausencia de efluente.</font></P> <I>    <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">N&uacute;mero de camadas</font></I><font face="Times New Roman" size="3">. La cantidad de eventos reproductivos disminuy&oacute; al aumentar la concentraci&oacute;n de efluente (<a href="#tabl4">Tabla IV</a>). La comparaci&oacute;n del n&uacute;mero de camadas mostr&oacute; diferencias altamente significativas (<a href="#fig4">Figura 4</a>; <a href="#tabl5"> Tabla V</a>) con p&lt;&lt;0,001 (ANOVA).</font></P>      ]]></body>
<body><![CDATA[<P align="justify"><a name="fig4"></a></P>      <P align="center"><font face="Times New Roman" size="3"><IMG SRC="/img/fbpe/inci/v28n8/Image1043.jpg" width=444 height=292></font></P>      
<P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Pudieron diferenciarse tres grupos en el n&uacute;mero de camadas producidas en funci&oacute;n de la concentraci&oacute;n de efluente. Un primer grupo constituido por el control, 0,2 y 0,4ml·l<sup>-1</sup> en el que el n&uacute;mero de camadas no mostr&oacute; diferencias importantes. En el segundo grupo (0,6 a 1,0ml·l<sup>-1</sup>) se produjo un menor n&uacute;mero de camadas que en el primero. En el tercero, con concentraciones mayores a 1,0ml·l<sup>-1</sup> no se produjeron camadas, porque todas estas concentraciones resultaron limitantes para la reproducci&oacute;n.</font></P> <I>    <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Tasa reproductiva neta</font></I><font face="Times New Roman" size="3">. R<sub>0</sub> es un par&aacute;metro poblacional que integra variables demogr&aacute;ficas (Stearns, 1993) por lo que resulta un buen indicador del efecto de la adecuaci&oacute;n biol&oacute;gica de una especie expuesta a diferentes condiciones. En concentraciones de efluente mayores a 0,6ml·l<sup>-1</sup>, R<sub>0</sub> fue &lt;1 (<a href="#tabl4">Tabla IV</a>). Esta condici&oacute;n indicar&iacute;a una disminuci&oacute;n poblacional de <I>C. dubia </I>conducente a la extinci&oacute;n. El valor de correlaci&oacute;n entre R<sub>0</sub> y la concentraci&oacute;n de efluente (r= 0,8394) confirm&oacute; su efecto t&oacute;xico.</font></P>  <B>    <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Discusi&oacute;n</font></P> </B>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Este estudio mostr&oacute; la alteraci&oacute;n de los patrones de sobrevivencia y fecundidad de <I>C. dubia</I> al aumentar la concentraci&oacute;n del efluente de curtiembre, produci&eacute;ndose disminuci&oacute;n de la sobrevivencia, disminuci&oacute;n del n&uacute;mero de cr&iacute;as/hembra, incremento del tiempo de desarrollo con retraso de la edad de primera reproducci&oacute;n y disminuci&oacute;n del n&uacute;mero de mudas con incremento del tiempo entre eventos reproductivos.</font></P>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Los d&aacute;fnidos son organismos muy sensibles en cuanto a la disponibilidad y calidad del recurso tr&oacute;fico (Barbosa <I>et al</I>., 2000). Las microalgas, como <I>Selenastrum capricornutum</I>, bioacumulan sulfuro (Williams <I>et al</I>., 1994) y adsorben metales pesados (Xue <I>et al</I>., 1995). Como lo se&ntilde;ala Luoma (1996) la bioacumulaci&oacute;n por v&iacute;a tr&oacute;fica ha sido demostrada para Cr, Cd, Ag, Zn y Co en varios grupos de invertebrados. Tanto la incorporaci&oacute;n por v&iacute;a tr&oacute;fica como la acci&oacute;n directa del sulfuro y del Cr por los tejidos del clad&oacute;cero, ser&iacute;an la causa de la alteraci&oacute;n registrada en los atributos de historia de vida de <I>C. dubia</I>.</font></P>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Las dos concentraciones m&aacute;s bajas de efluente (0,2 y 0,4ml·l<sup>-1</sup>) no afectaron significativamente la sobrevivencia, ni el n&uacute;mero de neonatos y de camadas, indicando que el efluente no ser&iacute;a t&oacute;xico en estas diluciones. Las concentraciones intermedias (0,6 y 0,8ml·l<sup>-1</sup>) tuvieron un marcado efecto negativo mientras que las concentraciones m&aacute;s altas (1,0 a 1,8ml·l<sup>-1</sup>) afectaron negativamente a estos par&aacute;metros en forma muy significativa. Hubiera sido imposible predecir los efectos biol&oacute;gicos registrados del efluente a partir de an&aacute;lisis qu&iacute;micos &uacute;nicamente.</font></P>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Los costos de neutralizar una sustancia t&oacute;xica estableciendo compromisos con otros componentes del presupuesto energ&eacute;tico pueden modificar la din&aacute;mica poblacional. Seg&uacute;n Sibly y Calow (1989, citado en Forbes y Calow, 1996) puede establecerse un compromiso entre la capacidad de sobrevivir al t&oacute;xico y la tasa de crecimiento y la fecundidad. En este contexto, en dos concentraciones intermedias de efluente se registr&oacute; un compromiso entre la sobrevivencia y la reproducci&oacute;n. Con 1,0ml·l<sup>-1</sup> la mitad de la poblaci&oacute;n vivi&oacute; un tercio del tiempo que con 1,2ml·l<sup>-1</sup> pero asign&oacute; recursos a la reproducci&oacute;n. Con esta &uacute;ltima concentraci&oacute;n de efluente, contrariamente, <I>C. dubia </I>tuvo mayor sobrevivencia, pero no produjo neonatos.</font></P>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">La primera reproducci&oacute;n se retras&oacute; con el aumento de la concentraci&oacute;n de efluente hasta 1,0ml·l<sup>-1</sup>, concentraci&oacute;n por encima de la cual <I>C. dubia </I>no produjo neonatos. Estos resultados evidenciaron que, si se considera &uacute;nicamente la fecundidad, el valor de 1,0ml·l<sup>-1</sup> impedir&iacute;a la recuperaci&oacute;n de la poblaci&oacute;n a partir de estados inmaduros, resultando limitante para el establecimiento y mantenimiento de poblaciones naturales.</font></P>     ]]></body>
<body><![CDATA[<P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">En ausencia del efluente de curtiembre (control), se produjeron m&aacute;s mudas y a una edad m&aacute;s temprana que con el resto de los tratamientos, lo que indica mayor capacidad de crecimiento. Igualmente, <I>C. dubia </I>tambi&eacute;n pudo asignar m&aacute;s recursos energ&eacute;ticos a la reproducci&oacute;n, dadas la edad m&aacute;s temprana de la primera reproducci&oacute;n y la mayor producci&oacute;n de neonatos en el control. A pesar de que es dif&iacute;cil que un organismo asigne energ&iacute;a simult&aacute;neamente a varias funciones en conflicto (Calow y Sibly, 1990; Stearns 1993), el efecto del efluente fue tan negativo que, en la condici&oacute;n del control, <I>C. dubia</I> pareci&oacute; asignar energ&iacute;a al crecimiento y la reproducci&oacute;n.</font></P>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">La comparaci&oacute;n de los distintos valores de R<sub>0</sub> permiti&oacute; conocer el efecto combinado de la disminuci&oacute;n en la longevidad y de la reproducci&oacute;n de <I>C. dubia</I> como una medida de su adecuaci&oacute;n biol&oacute;gica. En las poblaciones experimentales, R<sub>0</sub> fue &lt;1 a concentraciones de efluente &gt;0,6ml·l<sup>-1</sup> indicando un umbral t&oacute;xico de concentraci&oacute;n a&uacute;n menor al se&ntilde;alado anteriormente (1,0ml·l<sup>-1</sup>) para la sobrevivencia, la reproducci&oacute;n y la producci&oacute;n de camadas consideradas en forma aislada. En consecuencia, y al menos para algunas especies de clad&oacute;ceros, concentraciones de efluente &gt;0,6ml·l<sup>-1</sup> no permitir&iacute;an el desarrollo normal de sus poblaciones. Esto indica la importancia de considerar par&aacute;metros poblacionales integradores y no s&oacute;lo algunos habitualmente utilizados tales como la mortalidad. Como ya fuera se&ntilde;alado, entre otros, por Gagneten y Vila (2001), R<sub>0</sub> es un buen indicador de la adecuaci&oacute;n biol&oacute;gica de <I>C. dubia</I> en estudios ecotoxicol&oacute;gicos.</font></P>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Este estudio indic&oacute; que el efluente de curtiembre fue altamente t&oacute;xico para los clad&oacute;ceros y que deber&iacute;an extremarse las medidas de recuperaci&oacute;n de sus componentes t&oacute;xicos previo a su volcado al ambiente. Un patr&oacute;n que emerge de los antecedentes presentados es que el grado de diluci&oacute;n del efluente es cr&iacute;tico en este sentido. En el gradiente de efluente la concentraci&oacute;n de Cr total fue inferior a los niveles gu&iacute;a, de 2µg·l<sup>-1</sup> para protecci&oacute;n de fito y zooplancton y 20µg·l<sup>-1</sup> para protecci&oacute;n de peces seg&uacute;n CEPA. Ocurri&oacute; lo mismo con el sulfuro en las cinco concentraciones m&aacute;s bajas de efluente ensayadas (0,2 a 1,0ml·l<sup>-1</sup>) siendo el nivel gu&iacute;a para sulfuro de &lt;1mg·l<sup>-1</sup>. La concentraci&oacute;n en el efluente puro fue 37,5 veces superior a los niveles gu&iacute;a en el contenido de Cr y 940 veces superior en el contenido de sulfuro. Si se considera la poca diluci&oacute;n que experimenta el efluente luego de su volcado por el escaso caudal del arroyo Las Prusianas (aproximadamente 0,584m<sup>3</sup>·s<sup>-1</sup>), ser&iacute;a posible concluir que en el curso de agua receptor, seg&uacute;n la din&aacute;mica de volcado del efluente, podr&iacute;an generarse condiciones similares o a&uacute;n peores a las ensayadas en las experiencias de laboratorio, a pesar de las limitaciones vinculadas a la extrapolaci&oacute;n de los resultados obtenidos en bioensayos a las condiciones de campo (Balseiro <I>et al</I>. 1992; Gonz&aacute;lez y Frost, 1996).</font></P>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">El efecto t&oacute;xico del Cr sobre la estructura de un ensamble zooplanct&oacute;nico del r&iacute;o Paran&aacute; Medio a escala de mesocosmos fue registrado por Gagneten (2002). En ese estudio se encontr&oacute; que la densidad, riqueza y diversidad de especies disminuyeron significativamente con el incremento en la concentraci&oacute;n de Cr (0,1; 0,4; 0,7 y 1,0mg·l<sup>-1</sup> K<sub>2</sub>Cr<sub>2</sub>0<sub>7</sub>). En el mismo Arroyo Las Prusianas, Ceresoli y Gagneten (datos no publicados) encontraron que la riqueza y diversidad de especies zooplanct&oacute;nicas disminuyeron en los puntos de muestreo m&aacute;s cercanos al punto de volcado del efluente. Es decir, la acci&oacute;n t&oacute;xica del Cr considerado aisladamente o como parte del efluente de curtiembre siempre ocurre, independientemente de la escala del estudio realizado.</font></P>     <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">A pesar de la escasa concentraci&oacute;n de Cr y sulfuro en el gradiente ensayado, los atributos de historia de vida y los par&aacute;metros poblacionales de <I>C. dubia </I> mostraron una disminuci&oacute;n muy significativa con respecto al control. Esto permitir&iacute;a suponer el efecto de interacci&oacute;n o de sinergismo entre la toxicidad atribuible al Cr y a otros t&oacute;xicos del efluente, en especial al sulfuro que es un componente habitual del efluente de curtiembre. El efecto de interacci&oacute;n entre los componentes de efluentes industriales ha sido registrado por numerosos autores (Walsh <I>et al</I>., (1980). Los tests ecotoxicol&oacute;gicos habitualmente se realizan con t&oacute;xicos aislados. Sin embargo, en la composici&oacute;n de los efluentes industriales interviene m&aacute;s de una sustancia t&oacute;xica. En este sentido, cabe destacar la importancia de incrementar el desarrollo de bioensayos sometiendo a los organismos de prueba a la acci&oacute;n de efluentes complejos por el mayor grado de realismo que aportan.</font></P>  <B>    <P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">Referencias</font></P> </B>     <!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">1. Anderson DH, Benke A (1994) Growth and reproduction of the cladoceran <I>Ceriodaphnia dubia</I> from a forested floodplain swamp. <I>Limnol. Oceanogr. 39</I>: 1517-1527.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970954&pid=S0378-1844200300080000700001&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">2. APHA (1992) M&eacute;todos de prueba de toxicidad para organismos acu&aacute;ticos<I>.</I> En <I>M&eacute;todos Normalizados para el An&aacute;lisis de aguas potables y residuales</I>. Cap. 8. APHA/AWWA/WPCF. D&iacute;az de Santos. Madrid, Espa&ntilde;a.</font> &nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970955&pid=S0378-1844200300080000700002&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">3. Balseiro EG, Modenutti BE, Queimali&ntilde;os CP (1992) The coexistance of <I>Bosmina </I> and <I>Ceriodaphnia</I> in a south Andes lake: an analysis of demographic responses<I>. Freshwater Biol. 28</I>: 93-101.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970956&pid=S0378-1844200300080000700003&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">4. Barbosa RM, Povinelli J, Rocha O, Esp&iacute;ndola ELG (2000) A toxicidade de efluentes (lodo) de esta&ccedil;oes de tratamento de &aacute;gua a dafn&iacute;deos (<I>Daphnia similis</I>), quironom&iacute;deos (<I>Chironomus xanthus</I>) e peixes (<I>Hyphessobrycon egues</I>). En <I>Ecotoxicologia: Perspectivas para o s&eacute;culo XXI</I>. pp. 379-394.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970957&pid=S0378-1844200300080000700004&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">5. Borowitzka MA (1988) Algal growth media and sources of algal cultures. En Borowitzka MA, Borowitzka LJ (Eds.) <I>Microalgal Biotechnology</I>. Cambridge University Press. Cambridge, Reino Unido. pp. 456-465.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970958&pid=S0378-1844200300080000700005&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">6. Calow P, Sibly RA (1990) A physiological basis of population processes: ecological implications. <I>Funct. Ecol. 4</I>: 283-288.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970959&pid=S0378-1844200300080000700006&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">7. DeGraeve GM, Cooney JD, Marsh BH, Pollock T, Reichenbach N (1992) Variability in the performance of the 7-d <I>Ceriodaphnia dubia</I> survival and reproduction rates in two southeastern black-water rivers. <I>Limnol. Oceanogr. 32</I>: 221-234.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970960&pid=S0378-1844200300080000700007&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">8. Elendt BP, Bias WR (1990) Trace nutrient deficiency in <I>Daphnia magna </I>cultured in standard medium for toxicity testing. Effects of the optimization of culture conditions on life history parameters of <I>D. magna</I>. <I>Wat. 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U.S. Environmental Protection Agency. Cincinatti, Ohio. EEUU. pp. 97-99.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970963&pid=S0378-1844200300080000700010&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">11. Ferrari B, Ferard J (1996) Effects of nutritional renewal frequency on survival and reproduction of <I>Ceriodaphnia dubia</I>. <I>Environ. Toxicol. 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Origin, collection, treatment and analysis of waste water</I>. Neuhof Verlag. Berlin-Heidelberg, Alemania. 1136 pp.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970966&pid=S0378-1844200300080000700013&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">14. Gagneten AM (2002) Respuesta de una comunidad zooplanct&oacute;nica de agua dulce a la aplicaci&oacute;n de cromo en clausuras experimentales. <I>Interciencia 27</I>: 563-570.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970967&pid=S0378-1844200300080000700014&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">15. Gagneten AM, Vila I (2001) Effects of Cu2 and pH on the fitness of <I>Ceriodaphnia dubia </I>(Richard 1894) (Crustacea, Cladocera) in microcosms experiments. <I>Environ. 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Harris D (1992) <I>An&aacute;lisis qu&iacute;mico cuantitativo</I>. Iberoamericana. Buenos Aires, Argentina. 880 pp.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970970&pid=S0378-1844200300080000700017&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">18. ISO (1982) <I>Water quality. Determination of the inhibition of the mobility of Daphnia</I> <I>magna </I>Straus<I> (Cladocera, Crustacea).</I> ISO 6341. Suiza. 11 pp.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970971&pid=S0378-1844200300080000700018&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">19. Jop KM, Askew AM, Terrio KF, Simoes AT (1992) Application of the short-term chronic test with <I>Ceriodaphnia dubia </I>in identifying sources of toxicity in industrial wastewaters. <I>Bull.</I> <I>Environ. Contam. 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Nueva York, EEUU. pp. 609-959.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970973&pid=S0378-1844200300080000700020&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">21. Niedelehner BR, Pontsch KW, Pratt JR, Cairns JJr (1990) Field evaluation of predictions of environmental effects from a multispecies-microcosms toxicity test. <I>Arch. Environ. Contam. Toxicol. 19</I>: 62-71.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970974&pid=S0378-1844200300080000700021&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">22. Paggi JC, Jose de Paggi S (1990) Zooplancton de ambientes l&oacute;ticos e l&eacute;nticos do r&iacute;o Paran&aacute; M&eacute;dio. <I>Acta Limnol. Brasil. 3</I>: 685-719.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970975&pid=S0378-1844200300080000700022&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">23. Pianka E (1982) <I>Ecolog&iacute;a Evolutiva</I>. Omega. Barcelona, Espa&ntilde;a. 365 pp.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970976&pid=S0378-1844200300080000700023&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">24. Porter KG, Gerritsen J, Orcutt J (1982) The effect of food concentration on swimming patterns, feeding behavior, ingestion, assimilation, and respiration by <I>Daphnia</I>. <I>Limnol. Oceanogr. 27</I>: 935-949.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970977&pid=S0378-1844200300080000700024&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">25. Pratt JR, Mitchell J, Ayers R, Cairns JJr (1989) Comparison of estimates of effects of a complex effluent at different levels of biological organization. En <I>Aquatic Toxicology. </I>Vol 11<I>.</I> American Society for Testing and Materials. Philadelphia, EEUU. pp. 174-188.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970978&pid=S0378-1844200300080000700025&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">26. Ru&iacute;z R, Bahamonde N (1989) <I>Clad&oacute;ceros y cop&eacute;podos l&iacute;mnicos en Chile y su distribuci&oacute;n geogr&aacute;fica. Lista sistem&aacute;tica. </I>Publicaci&oacute;n Nº45. Museo Nacional de Historia Natural. Santiago, Chile. 48 pp.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970979&pid=S0378-1844200300080000700026&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">27. Sibly RM, Calow P (1986) <I>Physiological Ecology of Animals.</I> Blackwell. Oxford, Reino Unido. 179 pp.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970980&pid=S0378-1844200300080000700027&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">28. Sokal RR, Rohlf FJ (1969) <I>Biometr&iacute;a</I>. Blume. Madrid., Espa&ntilde;a. 832 pp.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970981&pid=S0378-1844200300080000700028&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">29. Stearns S (1993) <I>The Evolution of Life Histories</I>. Oxford University Press. Reino Unido. 249 pp.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970982&pid=S0378-1844200300080000700029&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">30. Walsh GE, Bahner LH, Horning WB (1980) Toxicity of textile mill effluents to freshwater and estuarine algae, crustaceans and fishes. <I>Environ. Pollut (</I>Ser A<I>) 21</I>: 169-179.</font>&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;&nbsp;[&#160;<a href="javascript:void(0);" onclick="javascript: window.open('/scielo.php?script=sci_nlinks&ref=970983&pid=S0378-1844200300080000700030&lng=','','width=640,height=500,resizable=yes,scrollbars=1,menubar=yes,');">Links</a>&#160;]<!-- end-ref --><!-- ref --><P align="justify"><font face="Times New Roman" size="3">31. Williams MJ, Ogle RS, Knight AW, Burau RG (1994) Effects of sulfate on selenate uptake and toxicity in the green alga <I>Selenastrum capricornutum. Arch. Environ. Contam. 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