Ana Alfieria,b, Luis Guillermo Ramíreza,*, Noemí Arcilaa, Yelitza. Guevaraa
a Escuela de Bioanálisis, Universidad de Carabobo,
* Correspondencia: E-mail:luisguillermolg@starmedia.com
b Laboratorio “Cesar Sánchez Font,” Valencia-Venezuela
Resumen
Chlamydia trachomatis, es una bacteria intracelular obligada, que afecta las células epiteliales y macrófagos, multiplicándose en su interior. Ataca a ambos sexos y puede producir una alteración del tracto reproductor por lo que es un patógeno importante en humanos y animales, sin embargo, los métodos para el diagnóstico de infección por Chlamydia son aun inadecuados. En el presente estudio se identificó mediante el uso de la técnica “InmunoComb Chlamydia bivalente” la presencia de anticuerpos contra Chlamydia trachomatis en 34 muestras de sueros de pacientes sospechosos de infección (23 pacientes femeninos, 11 pacientes masculinos) que asistieron al Servicio de Infertilidad (Embriogen). Del total de muestras estudiadas, 9 pacientes resultaron positivos (26.4%) [8 pacientes femeninos (88.8%) y 1 paciente masculino (11.1%)]. En conclusión, la detección de anticuerpos específicos IgG facilita el diagnóstico de infecciones por Chlamydia, por ser rápido, sensible y específico.
Palabras clave: Infección, Chlamydia, lnmunoComb, Infertilidad, Titulación
Chlamydia trachomatis antibodies determination in patients attended at the Fertility Unit, “Dr. Rafael Guerra Méndez” Medical Center Valencia, Venezuela
Abstract
]]> Chlamydia trachomatis, is an intracellular bacteria that affects macrophages and epithelial cells, multiplying in their interior. It attacks both sexes and it can produce an alteration of the reproductive tract, for what is an important human and animal pathogen. However, the methods for Chlamydia diagnosis are even inadequate. In the present study, antibodies against Chlamydia were identified by "ImmunoComb bivalent Chlamydia" technique, in 34 serum samples of infection suspicious patients' (23 female patients, 11 male patients), that attended at the Infertility Service (Embriogen). 9 patients were positive (26.4%) [8 feminine patients (88.8%) and 1 masculine patient (11.1%)] of the studied samples. In conclusion, the detection of specific Ig G antibodies facilitates the diagnosis of Chlamydia infections, because is fast, sensitive and specific.Keywords: Infection, Chlamydia, InmunoComb
Recibido 26 julio de 2005
Aceptado 13 de septiembre de 2005
Introducción
Chlamydia trachomatis es una bacteria intracelular obligada que afecta las células epiteliales y macrófagos y se multiplica en su interior. Las infecciones genitales producidas por C. trachomatis son la causa más común de enfermedades de transmisión sexual (ETS) en muchos países industrializados [1]. Los tipos más frecuentes de ETS producidos por C. trachomatis son infecciones urogenitales, en particular uretritis no gonocóccica (UNG), epididimitis en hombres y enfermedad pélvica inflamatoria en mujeres. Aunque usualmente es asintomática, la infección no diagnosticada en mujeres puede conducir a salpingitis aguda, con un alto riesgo de embarazo ectópico o infertilidad tubal [2,3].
La prevalencia de infección por C. trachomatis, se asocia a una elevada actividad sexual de las mujeres, y el padecimiento tiende a presentarse más frecuentemente en aquellas de bajo nivel socioeconómico [4,5,6].
El diagnóstico de laboratorio tradicional para infecciones por C. trachomatis es el aislamiento en cultivos celulares. Este requiere unas condiciones estrictas de recolección y transporte como también de personas expertas y equipos costosos [7,8]. Se ha demostrado el aislamiento de C. trachomatis en el cultivo celular por Inclusiones Clamidiales (IC) revelados por coloración de lugol y por inmunofluorescencia indirecta (IFI) con anticuerpos monoclonales. Sin embargo, estos ensayos son aún inadecuados por la falta de una muestra apropiada, lo cual afecta el desempeño de la prueba, principalmente la sensibilidad [9].
La detección serológica de anticuerpos anti-clamidia representa un ensayo acertado al diagnóstico de infecciones por Chlamydia [10].
Este trabajo aporta datos epidemiológicos importantes, ya que permite conocer la frecuencia de la infección por C. trachomatis en dicho centro donde no se han realizado investigaciones referentes a las infecciones producidas por este microorganismo, logrando así su diagnóstico rápido, sensible, específico mediante técnicas inmunológicas, para de esta manera combatir y erradicar la infección.
]]> Materiales y métodosSe obtuvieron muestras de suero de 34 pacientes de ambos sexos, 11 sexo masculino y 23 sexo femenino, mayores de 20 años, que asistieron al servicio de infertilidad (Embriogen), del Centro Médico Dr. Rafael Guerra Méndez, durante el período 2003.
Se procedió a la determinación cuantitativa y diferencial de anticuerpos IgG contra Clhamydia tracomatis empleando el kit Inmunocomb Chlamydia Bivalente IgG [11].
Este consiste en un peine de plástico sensibilizado con antígenos clamidiales, además de la bandeja de desarrollo, la cual está constituida por: fila A diluyente, fila B solución de lavado, fila C anticuerpos de cabra IgG anti-humanos marcados con fosfatasa alcalina, fila D y E solución de lavado, fila F solución de sustrato cromógeno. Se incubó la bandeja de desarrollo por 20 minutos a 37 ºC para equilibrar los reactivos. Se tomaron las muestras prediluidas (310 μL de diluyente + 10 μL de suero) y los controles no diluidos y se colocó en la fila A de la bandeja de desarrollo. Se insertó el peine en esta fila y se incubó por 60 minutos. Con un papel absorbente, se eliminó el exceso de líquido en los dientes del peine y se insertó en la fila B para el primer lavado, luego se incubó por 2 minutos, se eliminó el exceso y se insertó de la misma forma en las filas C, D, E y F. Se evidenció la presencia o no de color y se procedió a reportar el resultado.
Las muestras fueron analizadas por duplicado. Obteniendo los mismo resultados para C. trachomatis.
Resultados
De los 34 pacientes estudiados 9 (26,4%) resultaron positivos para Chlamydia trachomatis y 25 fueron negativos (73,6%). De estos se observó una mayor prevalencia en pacientes con edades comprendidas entre 30-34 años con un 44,4% (4/9). Así como entre 25-29 años, con un 33,3% (3/9) Tabla 1.
Tabla 1. Frecuencia de Chlamydia trachomatis en pacientes distribuidos según la edad.
| ]]> Edad | Frecuencia | Porcentaje |
| 20 – 24 | 0 | 0 |
| 25 – 29 | 3 | 33,3 |
| 30 – 34 | ]]> 4 | 44,4 |
| 35 – 39 | 1 | 11,1 |
| 40 – 44 | 1 | 11,1 |
| TOTAL | 9 | ]]> 100 |
Fuente: datos obtenidos en esta investigación.
De los 34 pacientes estudiados, 8 (23,5%) del sexo femenino, fueron positivos para C. trachomatis y 1 (2,9%) para el sexo masculino con resultado positivo, obteniendo 10 pacientes sexo masculino negativos (29,4%) y 15 pacientes sexo femenino negativos (44,1%) (Tabla 2). No se detectó asociación estadísticamente significativa entre ambas variables (prueba exacta de Fisher: p> 0,05).
De un total de 9 pacientes positivos para C. trachomatis se obtuvo mayor frecuencia en el sexo femenino, donde se observó un 88,8% (8 pacientes) contra un 11,1% (1 paciente) positivo del sexo masculino para C. trachomatis.
Tabla 2. Pacientes distribuidos según resultados de la técnica Inmuno Comb Chlamydia trachomatis.
| Resultado InmunoComb Chlamydia Trachomatics | Frecuencia (%) Masculino Femenino | ]]> TOTAL |
| Positivo | 1(2,9%) 8(23,5%) | 9 (26,4%) |
| Negativo | 10(29,4%) 15(44,1%) | 25 (73,6%) |
| TOTAL | 11 23 | 34 |
Los títulos observados en estos 9 pacientes que resultaron positivos fueron: 4 presentaron títulos de 1/16, lo que representa un 44,4%, un paciente con título de 1/32 (11,1%) y 4 pacientes con título de 1/64, lo que representa el 44,4%.
Discusión
A pesar de la importancia clínica notable de infecciones por clamidia, existen aún pruebas de laboratorio no muy satisfactorias para el diagnóstico de la misma. Ya que se debe confiar en métodos que (i) no están bien estandarizados y no se adaptan con facilidad a todos los laboratorios (pruebas de amplificación basadas en ácidos nucleicos), (ii) son inadecuados por la falta de una muestra apropiada (ensayos inmunoenzimáticos y de fluorescencia directa), (iii) requieren de tiempo y demandan técnicas que implican un riesgo de infección del manipulador (cultivos). La detección serológica de anticuerpos anti-clamidia es una aproximación acertada al diagnóstico de esta infeccion [12]. El desempeño de la prueba en relación al ensayo de microinmunofluorescencia demuestra que posee una alta sensibilidad y especificidad [13].
La distribución según la edad de los pacientes estudiados, permite enfatizar que las uretritis no gonocóccicas deben ser prevenidas a cualquier edad, mediante el ejercicio responsable de la sexualidad, controles ginecológicos periódicos, tratamiento de la pareja en caso de afectación clínica de la mujer, puesto que en el hombre generalmente es asintomático. Además existe mayor frecuencia de infección por C. trachomatis para los pacientes de sexo femenino, resultados estos que se relacionan con el estudio realizado por la Dra. Marta Zapata, donde se demostró el aislamiento de C. trachomatis en un 75% en mujeres a razón de 15% en hombres [14].
La importancia de la semicuantificación para títulos de anticuerpo contra C. trachomatis radica en que títulos de 1/64 o superiores, indican por lo general un diagnóstico de linfogranuloma venéreo o de psitacosis [15].
En la mayoría de los pacientes en quienes se conoce la identidad de la serovariedad infectante de C. trachomatis existe una respuesta de anticuerpos específica de tipo con un título de 1/8 o mayor. Las excepciones incluyen a los pacientes con linfogranuloma venéreo, en quienes el anticuerpo con frecuencia es reactivo para más de una serovariedad, lo que lleva a títulos elevados [16].
Conclusiones
· El método serológico empleado, resultó ser confiable, fidedigno, seguro y de fácil ejecución.
· Se puede aplicar en gran número de muestras, exige un entrenamiento y equipamiento mínimo y proporciona resultados cuantitativos objetivos.
]]> · Este método muestra una alta correlación entre la detección serológica de anticuerpos IgG contra Chlamydia trachomatis en suero y la presencia de antígeno clamidial.· Los títulos de positividad de 1/64 indican por lo general un diagnóstico de linfogranuloma venéreo o de psitacosis, por lo que se debe tratar con los antimicrobianos de elección, además de realizar un seguimiento escrupuloso al paciente para controlar las reinfecciones.
· Se necesitan nuevas estrategias para la identificación y tratamiento de estas infecciones que permitan limitar la enfermedad y reducir complicaciones posteriores.
Referencias
[1] Gerbase AL, Rowley TR, Mertens EM. Global epidemiology of sexually transmitted diseases. Lancet 1998; 351(Suppl):24. [ Links ]
[2] Patton DL, Moore DE, Spadoni LR, Soules MR, Halbert SA, Wang SP. A comparison of the fallopian tube's response to overt and silent salpingitis. Obstet Gynecol 1989; 73:622 30. [ Links ]
[3] Sellors JW, Mahony JB, Chernesky MA, Rath DJ. Tubal factor infertility: an association with prior chlamydial infection and asymptomatic salpingitis. Fertil Steril 1988; 49:451 7. [ Links ]
[4] Mosure DJ, Berman S, Fine D, DeLisle S, Cates W Jr, Boring JR. Genital chlamydia infections in sexually active adolescents: do we really need to screen everyone? J Adolesc Health 1997; 20:6 13. [ Links ]
[5] Smith J, Muñoz N, Herrero R, Eluf-Neto J, Ngelangel C, Franceschi S, Bosch X, Walboomers J, Peeling R. Evidence for Chlamydia trachomatis as a human papillomavirus cofactor in the etiology of invasive cervical cancer in Brazil and the Philippines. J Infect Dis 2002; 85:324-331. [ Links ]
[6] Hook EW, Smith K, Mullen C, y col. Diagnosis of genitourinary Chlamydia trachomatis infections by using the ligase chain reaction on patient-obtained vaginal swabs. J Clin Microbiol 1997; 35:2133 5. [ Links ]
[7] Amann R, Ludwig W, Schleifer K. Phylogenetic identification and in situ detection of individual microbial cells without cultivation. Microbiol Rev 1995; 59:143-169. [ Links ]
[8] Daims H, Schleifer K, Wagner M. Probe EUB338 is insufficient for the detection of all Bacteria: development and evaluation of a more comprehensive probe set. Syst Appl Microbiol 1999; 22:438-448. [ Links ]
[9] Zhang W, Cohenford M, Lentrichia B, Isenberg H, Simson E, Li H, Yi J, Zhang D. Detection of Chlamydia trachomatis by Isothermal Ramification Amplification Method: a Feasibility Study. J Clin Microbio 2002;128-132,Vol.40, No. 1. [ Links ]
[10] Persson K. The role of serology, antibiotic susceptibility testing and serovar determination in genital chlamidial infections. Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol 2002; 16(6):801-814. [ Links ]
[11] DIMA 14030. Catalogo N°MICHMD30 CAFFETTE. ORGAL Israel. [ Links ]
[12] Bernstein RC, Yalcinkaya TM. Utilizing Chlamydia trachomatis IgG serology with HSG to diagnose tuboperioneal-factor infertility. W V Med J 2003; 99(3):105-107. [ Links ]
[13] Clad A, Freidank H, Plünnecke J, Jumg B, Petersen EE. Chlamydia trachomatis species specific serology: ImmunoComb Chlamydia Bivalent versus Microimmunofluorescence (MIF), Infection 1994; 22:165-173. [ Links ]
[14] Zapata M, 2001. Aislamiento de Chlamydia trachomatis en pacientes de ambos sexos. En: http://www.medicinabuenosaires.com/vo157_97/1/Chíamydia trachomatis.htm. Acceso 24 de septiembre 2003). [ Links ]
[15] Andersen B, Olesen F, Møller J, Østergaard L. Population-based strategies for outreach screening of urogenital Chlamydia trachomatis infections: A randomized, controlled trial J Infec Dis 2002; 185:252-258. [ Links ]
[16] Morré A, Murillo L, Bruggeman C, Salvador A. The role that the functional Asp299Gly polymorphism in the toll-like receptor-4 gene plays in susceptibility to Chlamydia trachomatis-associated tubal infertility servaas.J Infec Dis 2003;187:341-342. [ Links ] ]]>