Investigación Clínica

¿Se complica la lucha contra el dengue ante el surgimiento de un nuevo serotipo viral?

Mutations in the GATA4 gen in patients with non-syndromic congenital heart disease

Las cardiopatías congénitas se definen como toda anomalía estructural del corazón o de los grandes vasos, y son consecuencia de las alteraciones del desarrollo embrionario normal del corazón, aproximadamente entre la tercera y la décima semana de gestación. En Colombia, constituyen la segunda causa de muerte en niños menores de un año, con una prevalencia entre 7,5 y 9,5 por 1.000 nacimientos, sin discriminación entre nacidos vivos y muertos. En este estudio se analizaron mediante bioinformática, 33 muestras de tejido cardíaco cercano al defecto y de sangre de pacientes con cardiopatía congénita no sindrómica, de la Clínica Shaio Bogotá (Colombia). Se analizaron en sentido y antisentido cada uno de los seis exones que conforman el gen GATA4. Se identificaron 17 mutaciones, incluyendo cinco cambios no sinónimos en la secuencia, una variante sinónima, una variación de la secuencia en la región 5’UTR, tres cambios intrónicos y siete deleciones. No se encontraron evidencias de variantes somáticas para el gen GATA4, en ninguna de las muestras de la población de estudio.

Congenital heart diseases are defined as any heart or large vessel structural abnormality resulting from abnormal embryonic development, usually described between the 3rd and 10th week of gestation. They comprise the second cause of death in children under a year of age in Colombia, with a prevalence of 7.5-9.5 per 1,000 births, including live and still births. We analyzed 33 heart tissue samples collected at the Clínica Shaio (Bogotá, Colombia). Blood and tissue samples were collected from patients with non-syndromic congenital heart disease. Tissue was isolated near the defect. Electropherograms obtained from samples were analyzed using bioinformatic tools: ChromasPro and ClustalW. The whole gen covering its six exons was analyzed in forward and reverse orientation. We identified 17 mutations, including five non-synonymous sequence changes, one synonymous variant and one variation in the 5’ UTR, three intronic changes and seven deletions. We found no evidence of gene GATA4 somatic sequence variants in any of the samples analyzed.

Psychological resistance to use insulin in type 2 diabetes mellitus patients from Venezuela

La resistencia psicológica al uso de insulina (RPI) es una condición donde el paciente con diabetes mellitus tipo 2 (DM2) se niega a utilizar insulina. Nuestro objetivo fue determinar la frecuencia de RPI en la población venezolana y sus creencias hacia la insulina y medicación actual. En el primer trimestre del año 2013 se entrevistaron 254 pacientes con DM2, mayores de 18 años de edad, libres de tratamiento con insulina, ubicados en áreas de consulta de varios estados de Venezuela. Se aplicó una encuesta para evaluar la disposición a utilizar insulina si su médico se la indicaba y sus creencias hacia la insulina y la medicación actual. Los pacientes se clasificaron en: no dispuestos (grupo con RPI), ambivalentes y dispuestos al uso de insulina. Las creencias hacia la insulina y medicación actual se agruparon en positivas o negativas. El promedio de edad fue de 56,2 años, con 7,1 años de duración de la DM2. El 58,6% correspondió a población femenina. Un tercio (32,7%) cursó con RPI, el 20,9% fue ambivalente y el 46,4% dispuesto a usar insulina. Los pacientes con RPI tuvieron una menor frecuencia de creencias positivas y mayor frecuencia de creencias negativas hacia la insulina y hacia su tratamiento actual (p< 0,0001). Las creencias negativas hacia la insulina incrementaron 14 veces el riesgo de presentar RPI y el no tener educación universitaria lo incrementó 4 veces, comparado con el grupo dispuesto. En conclusión, se encontró una alta frecuencia de RPI en pacientes con DM2 en Venezuela (32,7%), caracterizados por baja frecuencia de creencias positivas y alta de creencias negativas hacia la insulina. Es necesario mejorar la educación del paciente con DM2 al respecto.

The psychological resistance to use insulin (PIR) is a condition where the patient with type 2 diabetes mellitus (T2DM) refuses to use insulin. Our objective was to determine the frequency of PIR in a Venezuelan population and their beliefs regarding insulin and current medication. In several states of Venezuela, from January to March 2013, 254 patients with T2DM, over 18 years old and naive to insulin treatment were interviewed. We applied an interview to evaluate the disposition of the patients to use insulin if their doctor prescribes it and to determine their beliefs about insulin and their current medication. The patients were categorized in: not willing (PIR group), ambivalent and willing to use insulin. The beliefs about insulin and their current medication were grouped into positive or negative. The mean age was 56.2 years, with 7.1 years of duration of theT2DM; 58.6% were females. One third (32.7%) had PIR, 20.9% were ambivalent and 46.4% were willing to use insulin. PIR patients showed lower frequency of positive beliefs and more frequency of negative beliefs to insulin and to their current treatment (p <0.0001). Negative beliefs to insulin increased 14 times the risk of PIR, and people without university studies had a four times increase in the risk of PIR compared to the willing group. In conclusion, a high frequency of PIR in patients with T2DM (32.7%) was found in Venezuela; they showed low frequency of positive beliefs and high frequency of negative beliefs about insulin use. It is necessary to improve T2DM patient education on this issue.

Trypanosoma cruzi infection decreases malignant melanoma development and increases survival in C57BL/6 mice

Diversos agentes infecciosos interfieren en la progresión del cáncer. En esta investigación se estudió el efecto de la infección o inmunización con Trypanosoma cruzi (Tc) sobre el desarrollo del melanoma maligno. Se utilizaron 258 ratones machos C57BL/6 divididos en 5 grupos melanoma: melanoma control, melanoma Tc inmunizado, melanoma Tc agudo, melanoma Tc crónico y melanoma Tc infectado; 3 grupos controles: control sano, control Tc agudo, control Tc crónico. 100.000 células de melanoma B16-BL6 fueron inoculados vía intramuscular a los grupos melanoma; 3 ó 20 tripomastigotes/g de peso fueron inoculados vía intraperitoneal a los grupos Tc crónicos o Tc agudos previo a la inoculación del melanoma, respectivamente, el grupo melanoma Tc inmunizado fue inoculado con 30.000 epimastigotes fijados en formol y suspendidos en adyuvante completo de Freund, y el grupo melanoma Tc infectado fue inoculado con células de melanoma obtenidas de ratones melanoma Tc agudo. Se evaluó volumen tumoral, supervivencia, parasitemia e histopatología tumoral. Los grupos melanoma Tc: agudo, crónico y melanoma infectado, respectivamente, mostraron una disminución significativa del desarrollo tumoral y de la supervivencia al ser comparados con los grupos melanoma control e inmunizado. Los estudios histopatológicos mostraron áreas de necrosis asociadas con depósitos de melanina, degeneración citopática tumoral y amastigotes intracelulares contenidos en vacuolas parasitofóricas. En conclusión, Tc inhibe el desarrollo tumoral del melanoma maligno y aumenta la supervivencia de ratones C57BL/6, fenómeno que podría estar relacionado con la capacidad invasiva tumoral del parásito y a la respuesta inmune generada.

Some infectious pathogens have the capacity to affect cancer progression. In the present paper we studied the effect of infection or immunization with Trypanosoma cruzi (Tc) against malignant melanoma development. We worked on 258 C57BL/6 male mice divided in five melanoma groups: control melanoma, melanoma Tc acutely infected, melanoma Tc chronically infected, melanoma Tc immunized and infected melanoma; and three control groups: healthy, Tc acutely infected and Tc chronically infected. 100.000 B16-BL6 melanoma cells were inoculated in the thigh of melanoma groups; 3 or 20 trypomastigotes/g were inoculated intraperitoneally in chronic or acute Tc groups, before the melanoma injection, respectively; melanoma Tc immunized were subcutaneously inoculated with 30.000 formaldehide-fixed epimastigotes diluted in complete Freund´s adjuvant and the infected melanoma group was inoculated with melanoma cells obtained from melanoma Tc acutely infected mice. We evaluated survival, parasitemia, tumor volume and tumor histopathology. Results showed that in mice infected with Tc, the tumor development and survival were significantly lower as compared with control melanoma and melanoma Tc immunized. Histopathologically, the tumor displayed necrosis areas with melanin deposits, cytopathic degeneration and amastigotes in parasitophorous vacuoles. In conclusion, Tc inhibits the development of malignant melanoma, increasing C57BL/6 survival, a phenomena that could be related to the parasite tumoral invasive capacity, its ability to produce melanoma cell lysis and to induce a robust immune response.

p16^INK4a/Ki-67 immunocytochemical dual staining for detection of cervical lesions associated to papillomavirus infection

Este estudio se llevó a cabo para examinar el patrón de inmunoexpresión simultánea de p16INK4a/Ki-67y establecer su posible utilidad clínica para la detección precoz del cáncer de cuello uterino. Las muestras celulares de cuello uterino fueron seleccionadas de la pesquisa de rutina de cáncer cervical. La detección inmunocitoquímica de p16INK4a/Ki-67se realizó con el kit de trabajo CINtec® Plus. Todos los casos tenían una prueba de virus papiloma humano (VPH). Ciento quince muestras citológicas fueron incluidas: 11(9,6%) fueron negativas para lesión intraepitelial o malignidad (NILM), 32(27,8%) presentaron células escamosas con atipias de significado indeterminado (ASC-US), 62(53,9%) mostraron lesión intraepitelial escamosa de bajo grado (LSIL) y 10(8,7%) lesión intraepitelial escamosa de alto grado (HSIL). La prevalencia general de infección por VPH fue de 81,7% (94/115). En 42 casos (45,0%) se identificaron los siguientes genotipos específicos de VPH: VPH16 (26,2%), VPH51 (21,4%), VPH52 (14,3%) y el genotipo VPH66 (7,1%). De 115 muestras celulares, 42(36,5%) fueron positivas para la tinción dual de p16INK4a/Ki-67, siendo ésta muy frecuente en las muestras citológicas con HSIL (70,0%), disminuyendo en las LSIL (44,0%) y existiendo inmunopositividad en una minoría de ASC-US (25,0%). Ningún caso NILM mostró inmunopositividad para p1(6INK4a)/Ki-67 (p<0,001). En 40/115 casos (34,8%) hubo positividad tanto para infección por VPH oncogénico como para la tinción dual p16INK4a/Ki-67, incluyendo 6/32 (18,8%) con ASC-US, 26/62 (42,0%) con LSIL and 8/10 (80,0%) con HSIL. Esta metodología podría ser utilizada para detectar lesiones en cuello uterino que aún no han sido diagnosticadas o han pasado inadvertidas.

We aimed to explore the expression pattern of p16INK4a/Ki-67 immunocytochemical dual-staining and to establish the potential clinical utility for early detection of cervical lesions. Liquid-based cytologies of cervical specimens of cervical cancer screening were processed for p16INK4a/Ki-67 immunocytochemical dual-staining using the CINtec® Plus Kit. HPV testing was performed with the INNO-LiPA HPV genotyping Extra Reverse Hybridization Line Probe Assay kit. One hundred and fifteen cervical cytologies were analyzed with the following results: 11(9.6%) were negative for intraepithelial lesions or malignancy (NILM); 32(27.8%) presented atypical squamous cells of undetermined significance (ASC-US); 62(53.9%) exhibited low grade squamous intraepithelial lesions (LSIL) and 10(8.7%) showed high grade squamous intraepithelial lesions (HSIL). No cases of cervical cancer were detected. The overall prevalence of DNA HPV detection was 81.7% (94/115). The following specific HPV genotypes were identified in 42 (45.0%) cases: HPV16 (26.2%), HPV51 (21.4%), HPV52 (14.3%) and HPV66 (7.1%). Viral sequences of an unknown single HPV were detected in 23.8%of the cases. A total of 42/115 (36.5%) were p16INK4a/Ki-67 dual-staining-positive, being more frequent in HSIL (70.0%), decreasing in LSIL (44.0%), detected in a minority of ASC-US (25.0%) and negative in NILM cases (p<0.001). 40/115 cases (34.8%) were positive for both oncogenic HPV and p16INK4a/Ki-67 dual-staining, including 6/32 (18.8%) ASC-US, 26/62 (42.0%) LSIL and 8/10 (80.0%) HSIL, which represent a strong association between positivity for HPV, p16INK4a/Ki-67 staining and severe cytological abnormalities (p<0.001). This methodology could be used to detect unnoticed cervical lesions.

Relationship between serum levels of C-reactive protein and α1-antitrypsin and insulin resistance in obese women

El tejido adiposo produce citocinas implicadas en la resistencia a la insulina (RI) tales como IL-6, IL-8, TNF-α y moléculas proinflamatorias como la proteína C reactiva (PCR). La α1-antitripsina es una proteína plasmática sensible a la inflamación. El objetivo de este estudio fue determinar la correlación existente entre los niveles séricos de PCR ultrasensible (PCRus) y de α1-antitripsina con los índices de RI en mujeres venezolanas obesas. La población del estudio estuvo conformada por 15 mujeres normopeso (IMC 21,8 ± 1,9 kg/m²) y 15 mujeres con obesidad (IMC 35,3 ± 5,3 kg/m²). Se realizó a los grupos la prueba de tolerancia oral a la glucosa (carga de 75g, 2h) y se calcularon los siguientes índices: Modelo de Determinación de la Homeostasis de la resistencia a la insulina (HOMA-IR), Modelo de Determinación de la Homeostasis de la función de la célula-β (HOMA-β), Índice Matsuda e Índice Insulinogénico. Se determinó la relación entre los niveles séricos de PCRus y α1-antitripsina y estos índices. Las mujeres con obesidad presentaron mayores niveles de PCRus (p = 0,001) en comparación con las mujeres normopeso. Los niveles séricos de PCRus se correlacionaron positivamente con HOMA-IR (r= 0,73, p=0,0021), HOMA-β (r= 0,53, p=0,031) y negativamente con el Índice Matsuda (r= -0,60, p=0,017), en las mujeres con obesidad. No se observó ninguna correlación entre los niveles séricos de α1-antitripsina y los índices de RI en el grupo obeso ni en el grupo normopeso. Se encontró una relación entre los niveles séricos de PCRus y la RI, sugiriendo un rol de la inflamación subclínica en la RI.

Adipose tissue produces cytokines involved in insulin resistance (IR) such as IL-6, IL-8, TNF-α and proinflammatory molecules such as C reactive protein (CRP). α1-antitrypsin is an inflammation-sensitive plasma protein. The objective of this study is to determine the correlation between serum CRP high-sensitivity (CRPhs) and α1-antitrypsin levels with IR indices in obese Venezuelan women. The study population consisted of 15 normal weight women (BMI 21.8 ± 1.9 kg/m²) and 15 obese women (BMI 35.3 ± 5.3 kg/m²). Obese and lean women underwent a 2 h-75g oral glucose tolerance test and the following indices were calculated: homeostatic model assessment of insulin resistance (HOMA-IR), homeostatic model assessment of β cell function (HOMA-β), Matsuda Index and Insulinogenic Index. The relationship between serum CRPhs and α1-antitrypsin levels and these indices were determined. Obese women had higher CRPhs levels (p = 0.001) compared with normal weight women. In obese women, serum CRPhs levels were positively correlated with HOMA-IR (r=0.73, p=0.0021), HOMA-β (r=0.53, p=0.031) and negatively correlated with the Matsuda Index (r= -0.60, p=0.017). No correlation between serum levels of α1-antitrypsin and IR indices in the obese group and the lean group was observed. There was a relation between serum CRPhs levels and insulin resistance, suggesting a role of subclinical inflammation in IR.

Smith-Lemli-Opitz syndrome and hypothyroidism: the first Venezuelan case

El síndrome de Smith-Lemli-Opitz (SSLO) es un desorden metabólico autosómico recesivo debido a la síntesis anormal de colesterol y fue descrito por primera vez por Smith, Lemli y Opitz en 1964. Muchos casos de SSLO han sido descritos desde entonces, siendo reconocido como un síndrome malformativo relativamente común. Los individuos afectados tienen dismorfismo, microcefalia, múltiples malformaciones congénitas, retraso mental, agresividad e hiperactividad. La severidad de los defectos físicos se correlaciona con la severidad de la deficiencia de colesterol, la cual es causada por la baja actividad de la 7-dehidrocolesterol reductasa, enzima responsable de la conversión de 7-dehidrocolesterol a colesterol. La ocurrencia de hipotiroidismo en asociación con SSLO es muy inusual. Este constituye el primer caso venezolano en el que se asocian ambas patologías.

The Smith-Lemli-Opitz syndrome (SLOS) is an autosomal recessive metabolic disorder due to an abnormal cholesterol synthesis. It was first described by Smith, Lemli and Opitz in 1964. Many cases of SLOS have been described since then, leading to the recognition as a relatively common malformation syndrome. Affected individuals have dysmorphism, microcephaly, multiple congenital malformations, mental retardation, aggressiveness and hyperactivity. The severity of physical defects correlates with the severity of the cholesterol deficiency, which is caused by an abnormally low activity of 7-dehydrocholesterol reductase, the enzyme responsible for conversion of 7-dehydrocholesterol to cholesterol. The occurrence of hypothyroidism in association with SLOS is very unusual. We describe the first Venezuelan case in which both anomalies are associated.

Macrophage migration inhibitory factor and its relationship with obesity and diabetes

En diversos estudios se ha identificado que la obesidad y principalmente el aumento de adiposidad en la región abdominal, se asocia con inflamación de grado bajo, resistencia a la insulina (RI), homeostasis alterada de la glucosa y con sus comorbilidades tales como la diabetes mellitus tipo 2 (DMT2), la hipertensión, las dislipidemias y las enfermedades cardiovasculares. El factor inhibidor de la migración de macrófagos (MIF) es una citocina proinflamatoria involucrada en enfermedades autoinmunes e inflamatorias. Sin embargo, actualmente, se sugiere que el MIF está involucrado en el proceso inflamatorio que acompaña a la obesidad, así como en el control metabólico de las complicaciones asociadas a la obesidad. Los diferentes estudios muestran de manera consistente, el aumento en los niveles séricos del MIF en personas con obesidad, diabetes tipo 2 y en los diabéticos que presentan complicaciones microvasculares (la nefropatía, la retinopatía y el síndrome de pie diabético). La relación del MIF con la regulación del metabolismo de la glucosa y la apoptosis de las células β pancreáticas, así como la asociación de algunos polimorfismos funcionales en el promotor del gen del MIF con la obesidad y la diabetes. Esta revisión resume conocimientos basados en estudios clínicos y epidemiológicos sobre el papel del MIF en la obesidad y la diabetes tipo 2.

Several studies have found that obesity and increased adiposity mainly in the abdominal region, are associated with low-grade inflammation, insulin resistance (IR), impaired glucose homeostasis and comorbidities such as type 2 diabetes mellitus (T2D) and cardiovascular disease. The macrophage migration inhibitory factor (MIF), is a proinflammatory cytokine involved in autoimmune and inflammatory diseases. However, currently it is suggested that MIF is involved in the inflammatory process associated with obesity and the metabolic control of the complications associated with obesity. Different studies show consistently, increased serum levels of MIF in subjects with obesity, type 2 diabetes and diabetics with microvascular complications (nephropathy, retinopathy and diabetic foot syndrome). The relationship of the MIF to the regulation of glucose metabolism and apoptosis of pancreatic β cells, and the association of some functional polymorphisms in the promoter of the MIF gene with obesity and diabetes.This review summarizes, the knowledge based on clinical and epidemiological studies on the role of MIF in obesity and type 2 diabetes.

Relevance of hyperglycemia on the course and outcome of aneurysmal subarachnoid hemorrhage: evidence and mechanisms

La hemorragia subaracnoidea aneurismática (HSAa) puede tener un desenlace mortal en unas pocas semanas debido por las complicaciones que presenta, como el vasoespasmo y el edema cerebrales junto con la hiperglucemia. La hiperglucemia podría estar relacionada con el desarrollo del vasoespasmo y el edema cerebrales. Es posible que el control de la glucemia juegue un papel central en la evolución y el desenlace de la HSAa. Se han descrito los mecanismos por los cuales puede darse esta relación, que incluyen el equilibrio de iones, la liberación de aminoácidos excitadores, la estimulación de moléculas vasoconstrictoras y la disminución en la síntesis de vasorrelajantes. Sin embargo, existen estudios que no apoyan la hipótesis sobre la participación de la hiperglucemia en esta enfermedad. En conjunto, estas evidencias sugieren que el control de los niveles de glucosa podría modificar el desenlace de los grupos de pacientes con HSAa dependiendo de las complicaciones que presenten.

Aneurysmal subarachnoid hemorrhage (aSAH) may have a fatal outcome after a few weeks from ictus, due to its complications, like cerebral vasospasm and edema along with hyperglycemia. Hyperglycemia may be involved in the development of brain vasospasm and edema. It is possible that hyperglycemia plays a central role in the outcome of aSAH. Several mechanisms may explain this relationship; they include ion balance, excitatory amino acid release, stimulation of vasoconstrictor molecules and reduced synthesis of vasorelaxants. However, some studies do not support this hypothesis regarding the role of hyperglycemia in aSAH. Taken together, the evidence suggests that the control of glucose levels may influence the aSAH outcome depending on the complications that may develop.

Aumentan las dificultades para la publicación científica en Venezuela