Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiología

Enfermedad de Chagas en Venezuela

Jesús Witremundo Bastardo González

Frecuencia de antiestreptolisina O y antidesoxirribonucleasa B como indicador de infección estreptocócica en estudiantes de una unidad educativa del estado Aragua

En este estudio se determinó la frecuencia de anticuerpos antiestreptolisina O (ASO) por neutralización y nefelometría y anticuerpos antidesoxirribonucleasa B (antiDNasa B) mediante nefelometría en 177 estudiantes seleccionados de manera aleatoria de una unidad educativa del municipio Francisco Linares Alcántara, estado Aragua. El porcentaje de títulos elevados para ASO por neutralización obtenido en los escolares fue 8,5% y por nefelometría 39,6%, estableciéndose que el método nefelométrico detectó mayor porcentaje de individuos con títulos altos. Con respecto a la antiDNasa B, 28,3% de los estudiantes presentaron títulos por encima del valor normal. Los escolares con edades entre 8 a 10 años exhibieron el mayor porcentaje de títulos elevados. La alta prevalencia de ASO observada revela que la infección por S. pyogenes es importante. Las complicaciones y secuelas no se estudiaron, por lo que las medidas de prevención y control deben dirigirse a prevenir las posibles secuelas. Tomando en cuenta que la mayoría de los estudiantes estaban asintomáticos se hace necesario realizar estudios en los cuales se aísle S. pyogenes, como también estudios en los cuales se establezcan los valores referenciales para las diferentes pruebas realizadas en este estudio.

In this study, the frequency of antistreptolysin O (ASO) antibodies was determined through neutralization and nephelometry and antidesoxiribonuclease B (antiDNase B) antibodies through nephelometry in 177 students from a teaching unit located in the Francisco Linares Alcantara Municipality of Aragua State. The percentage of elevated ASO titers by neutralization obtained in the school children was 8.5% and by nephelometry 39,6%, showing that the nephelometry method detects a higher percentage of individuals with high titers. Regarding antiDNase B, 28.3% of the students showed titers over the normal value. School children with ages between 8 and 10 years showed the greatest percentage of elevated titers. The high ASO prevalence observed reveals that infection by S. pyogenes is important. The complications and sequels were not studied, due to which prevention and control measures should be addressed to prevent possible sequels. Considering that most of the students were asymptomatic, it is necessary to carry out studies to isolate S. pyogene, well as studies to establish the referential values for the various tests done in this study.

Evaluation of ethylenediaminetetraacetic acid and sodium mercaptoacetic acid in the detection of metallo β-lactamases in Pseudomonas aeruginosa by the combined disk technique

Pseudomonas aeruginosa es un bacilo gramnegativo capaz de adquirir genes que codifican para la producción de metalo β-lactamasas (MBLs), las cuales son activas contra carbapenemos e inhibidas por agentes quelantes, como el ácido etilendiaminotetraacético (EDTA). Se determinó la efectividad del EDTA y del ácido mercaptoacético de sodio (SMA) en la detección de MBLs en 25 cepas de P. aeruginosa procedentes de diferentes hospitales y centros de investigación, empleando el método de discos combinados. Se evaluó el efecto de los antibióticos solos y combinados con EDTA, SMA o ambos. Se encontró que, mediante el aumento del diámetro de los halos de inhibición de los carbapenemos combinados con la mezcla EDTA/SMA (0,5 M/300 mg/mL) o sólo con EDTA (0,5 M), se pudieron diferenciar de manera clara y confiable las cepas productoras de MBLs de las no productoras, estableciéndose como punto de corte una diferencia de 5 mm o más entre los halos de inhibición del antibiótico sólo y combinado con el o los agentes quelantes.

Pseudomanas aeruginosa is a gram negative bacillus capable of acquiring genes which code for metallo β-lactamase production (MBLs) which are active against carbapenems and inhibited by chelating agents such as ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA). We determined the effectiveness of EDTA and sodium mercaptoacetic acid (SMA) in the detection of MBLs on 25 P. aeruginosa strains from different hospitals and research centers, using the combined disk technique. We evaluated the effect of the antibiotics alone and combined with EDTA, SMA, or both. We found that through the increase of the diameter of the inhibition halos of the carbapenems combined with an EDTA/SMA mixture (0.5 M/300 mg/mL) o with EDTA alone (0.5 M), we could differentiate in a clear and reliable way the MBLs producing from the non producing strains, establishing as cutoff point a difference of 5 mm or more between the antibiotic alone and the antibiotic combined with the chelating agent(s).

**Standardization of a PRC method for the detection of the Salmonella spp. invA gene in lettuce**

Salmonella spp. es un patógeno bacteriano muy importante causante de diarreas, que es transmitido tanto por la vía fecal-oral, como por alimentos y agua contaminados. En este trabajo se estandarizó una técnica de PCR en lechuga para la detección del gen invA de Salmonella spp.; dicho gen se relaciona con el proceso de invasión al epitelio intestinal. Con la PCR desarrollada en este trabajo se logró estandarizar un método que permite la amplificación del gen invA con una detección de 10² UFC/25 g. Este método acorta los tiempos de respuesta de los resultados presuntivos y brinda información complementaria al cultivo tradicional del patógeno. El estudio del gen invA establece el potencial patógeno del microorganismo presente en la muestra, lo que puede ser de utilidad para la salud pública.

Salmonella spp. is a very important bacterial pathogen that causes diarrhea and which is transmitted both through the fecal-oral pathway, as by contaminated food and water. In this study we standardized a PCR method in lettuce for the detection of the Salmonella spp. invA gene. This gene is related to the invasion of the intestinal epithelium process. With the PCR method developed in this study we were able to standardize a method which permits the amplification of the invA gene with a 10² CFU/25 g detection. This method shortens the response times of the presumptive results and gives complementary information to the traditional culture of the pathogen. The study of the invA gene establishes the pathogenic potential of the microorganism present in the sample, which can be useful for public health purposes.

Microbiological quality of fruits that have edible peels sold at popular markets of the Valencia and San Diego Municipalities, Carabobo State, Venezuela

Las frutas constituyen un grupo de nutrientes indispensables para la salud y bienestar del individuo. Se evaluó la calidad microbiológica en frutas de concha comestible (fresas, guayabas y duraznos) expendidas en mercados populares de Valencia y San Diego, estado Carabobo, Venezuela. Se determinó el número de UFC/g de mesófilos aerobios (MA), coliformes totales y fecales (CT, CF) y Salmonella spp. según Normas COVENIN. La mayoría de los recuentos obtenidos de MA fueron elevados en la mayoría de las frutas. Los niveles de contaminación por estos microorganismos se encontraron entre 1,4x10(5) y 6,6x10(10) UFC/g. Los recuentos encontrados para CT generalmente resultaron inferiores a los obtenidos para los MA, y se encontraron en un rango de 2,6x10³ a 7,2 x 10(10) UFC/g. No se detectó la presencia de CF y de Salmonella spp., en las muestras evaluadas. De las frutas analizadas las fresas fueron las que presentaron el mayor grado de contaminación microbiológica tanto por MA como CT. La ausencia de CF y Salmonella spp. sugiere que las condiciones a las cuales fueron sometidas las frutas durante el período de pre y postcosecha, estuvieron aparentemente dentro los límites permisibles de calidad sanitaria.

Fruits constitute a group of indispensable nutrients for the health and wellbeing of individuals. We evaluated the microbiological quality of fruits with edible peels (strawberries, guavas and peaches) sold at popular markets in Valencia and San Diego, Carabobo State, Venezuela. We determined the number of CFU/g of mesophilic aerobics (MA), total and fecal coliforms (TC, FC) and Salmonella spp. according to COVENIN guidelines. Most of the MA counts obtained were high in most fruits. The contamination levels by these microorganisms were found to be between 1.4x10(5) and 6.6x10(10) CFU/g. The counts found for TC were generally lower than those for MA, and occurred in amounts of between 2.6x10³ and 7.2x10(10) CFU/g. The presence of FC and Salmonella spp. was not detected in the samples evaluated. Of the fruits studied, strawberries were the ones which showed the highest microbiological contamination degree both by MA and TC. The absence of TC and Salmonella spp. suggests that the conditions to which the fruits were submitted during the pre and post harvest period apparently were within the permissible limits of sanitary quality.

Biodegradation of petroleum and its derivatives by the bacterial community in the soil of the Argentinean Patagonia

El objetivo de este trabajo fue caracterizar una muestra de suelo proveniente de un sistema de biorremediación en actividad y determinar la capacidad de la comunidad bacteriana de biodegradar petróleo y sus destilados, e identificar los principales microorganismos involucrados en el proceso. Para esto se tomó una muestra de suelo por la técnica de lanfarming y se caracterizaron sus propiedades físicas, químicas y microbiológicas; así como el tipo de hidrocarburos que contenía por extracción con Soxhlet y cromatografía en columna de sílica gel. A partir de la muestra se extrajo la comunidad bacteriana, y se determinó su potencial para biodegradar petróleo, sus diferentes fracciones y los destilados comerciales que se obtienen a partir de él. Se utilizaron métodos indirectos de medición del crecimiento bacteriano por conteo de microorganismos y medición de densidad óptica. A partir de estos sistemas se aislaron 41 cepas y se identificaron por FAME. Los principales resultados indicaron que la comunidad bacteriana del suelo posee la capacidad de biodegradar los hidrocarburos existentes en el mismo, principalmente la fracción alifática, así como los destilados gasoil, kerosén y aceite lubricante, siendo la fracción aromática, la polar y el destilado nafta no degradados. Está comunidad está constituida principalmente por Rhodococcus erythropolis, Achromobacter xylosoxidans y Brevundimonas diminuta, mostrando la mayor biodiversidad cuando los hidrocarburos utilizados como fuente de carbono pertenecen al grupo de los alifáticos. Las características físicas, químicas y microbiológicas del suelo indicaron que es factible que se realice una biorremediación eficiente de los hidrocarburos presentes.

The purpose of this study was to characterize a soil sample obtained from an active bioremediation system and determine the capacity of the bacterial community for biodegrading petroleum and its distilled products, and identify the main microorganisms involved in the process. For this object a soil sample was taken with the lanfarming technique and its physical chemical and microbiological characteristics were characterized, as well as the type of hydrocarbons it contained by Soxhlet extraction and silica gel column chromatography. From this sample we also extracted the bacterial community and determined its potential for degrading petroleum, its different fractions and the commercial distilled products obtained from it. We used indirect measurement methods for determining bacterial growth by counting the microorganisms and measuring optical densities. Through these methods we isolated 42 strains and identified them by FAME. The principal results indicated that the soil bacterial community has the capacity for degrading the hydrocarbons in it, mainly the aliphatic fraction as well as the distilled products such as gasoil, kerosene and lubricant oil, while the aromatic and polar fractions and the naphtha distilled product are non degradable. This community is mainly constituted by Rhodococcus erythropolis, Achromobacter xylosoxidans and Brevundimonas diminuta, showing the greatest diversity when the hydrocarbons used as carbon source belong to the aliphatic group. The physical, chemical and microbiological characteristics of the soil indicated that it is possible that an efficient bioremediation of the hydrocarbons present occurs.

Calibrated metallic loops for microbiologists: A nationally manufactured alternative

Las asas calibradas para la cuantificación de unidades formadoras de colonias bacterianas transfieren un volumen de muestra exactamente conocido y han sido herramientas de gran importancia para laboratorios de control de calidad, investigación y clínico. Las asas que se comercializan en el país son importadas y mayoritariamente de aleaciones de níquel-cromo. Es por ello que surge la necesidad de buscar internamente alternativas de bajo costo. En este trabajo se propuso la fabricación de asas con alambres comerciales de níquel-cromo equivalentes a las asas de platino y níquel-cromo comerciales, a un costo inferior. Las asas fueron comparadas según su desempeño y apariencia. Todas las asas fueron calibradas empleando dos métodos (gravimétrico y colorimétrico) con ángulos de carga de 45º y 90°. Se empleó un diseño experimental con arreglo factorial de tratamiento 2³ (método de calibración-tipo de asa-ángulo de carga, con 4 repeticiones). Se realizaron análisis de varianza de 672 datos, comparación de medias (prueba de Tukey) y se calcularon los intervalos de confianza de Bonferroni de las desviaciones estándar. Se demostró que las asas artesanales emulan a las comerciales, representando una alternativa nacional de bajo costo para la obtención de estos instrumentos.

Calibrated metallic loops for the quantification of bacterial colony forming units transfer an exactly known sample volume and have been extremely important tools for quality control, research and clinical laboratories. The loops marketed in our country are imported and mostly made of nickel-chrome alloy. This has created the need for searching for low cost national alternatives. In this work we propose the manufacture of these loops with commercial nickel-chrome wire equivalent to the commercial platinum and nickel-chrome loops, at lower costs. The loops were comparable in performance and appearance. All the loops were calibrated using two methods (gravimetric and colorimetric) with 45º and 90º charge angles. An experimental design with factorial treatment arrangement 2³ (calibration method-loop type-charge angle with 4 repetitions) was used. A 672 data variance analysis and comparison of means (Tukeys test) were carried out, and Bonferronis confidence intervals of the standard deviations were calculated. It was demonstrated that the artisan loops emulated the commercial ones, representing a low cost national alternative for obtaining these instruments.

**Alternatives for postharvest fungi control of valencia oranges (Citrus sinensis)**

La finalidad de este estudio fue conocer la efectividad del hongo Trichoderma harzianum, el quitosano y el bicarbonato de sodio en el control de hongos postcosecha en naranjas valencia. Se utilizaron 120 naranjas valencia, usando 24 naranjas por grupo. Cada uno de estos grupos fue sumergido en uno de los siguientes tratamientos: cultivo del hongo T. harzianum (1x10(9) esporas/mL.), quitosano (2%), bicarbonato de sodio (1%) y agua común (testigo); las 24 naranjas restantes no recibieron tratamiento y fueron consideradas como grupo control. Las naranjas fueron posteriormente almacenadas en envases de plástico con papel absorbente durante 14 días, a 27ºC, para determinar el crecimiento de hongos u otra alteración. Se desarrollaron 4 especies de hongos en el grupo control: Penicillium digitatum (80%), Penicillium italicum (10%), Colletotrichum gloeosporioides (5%) y Cladosporium herbarum (5%), con diferencias significativas entre hongos (p<0,05). En el testigo, sólo se encontró P. digitatum en un 29,1% y en los tratamientos con quitosano y bicarbonato de sodio sólo se presentaron pudriciones no fúngicas en un 20,8% y 41,6% respectivamente. Las tratadas con T. harzianum no presentaron hongos, ni ninguna alteración en 14 días de tratamiento, existiendo diferencias significativas (p<0,05) en cuanto a la presencia de hongo o alteración por tratamiento. Esto sugiere que es posible controlar hongos postcosecha de las naranjas con el hongo T. harzianum.

The purpose of this study was to establish the effectiveness of the fungus Trichoderma harzianum, chitosane and sodium bicarbonate for postharvest fungus control of valencia oranges. We used 120 valencia oranges using 24 oranges per group. Each of the groups was immersed in one of the following treatments: T. harzianum cultures (1x10(9) spores/mL), chitosane (2%), sodium bicarbonate (1%) and running water (witness); the remaining 24 oranges did not receive any treatment, and were considered as the control group. The oranges were later stored in plastic containers with absorbent paper during 14 days at 27ºC to determine fungus growth or any other alteration. Four fungi species developed in the control group: Penicillium digitatum (80%), Penicillium italicum (10%), Colletotrichum gloeosporioides (5%) and Cladosporium herbarum (5%) with significant differences among fungi (p<0.05). In the witness group there was only P. digitatum (29.1%), and in the groups treated with chitosane and sodium bicarbonate there was only non-fungal rotting in 20.8% and 41.6%, respectively. The oranges treated with T. harzianum did not present fungi or any other alteration during the 14 treatment days, and there were significant differences (p<0.05) as to presence of fungi or alterations during treatment. This suggests that it is possible to perform a post harvest control of oranges with the T. harzianum fungus.

**Atividade antimicrobiana de espécies de Penicillium mantidas sob duas condições de preservação**

Neste trabalho foi investigada a viabilidade e atividade antimicrobiana de 60 Penicillium spp. preservados sob óleo mineral e água destilada esterilizada. Os fungos foram reativados em meios de cultura seletivos e autenticados conforme as características macro e micromorfológicas. A atividade antimicrobiana foi determinada pela técnica do bloco de gelose e bioautografia contra bactérias Gram positivas, bactérias Gram negativas, leveduras e Mycobacterium smegmatis. A viabilidade das culturas correspondeu a 46,7% para os preservados em água destilada e 43,3% para os preservados sob óleo mineral. Os testes de atividade antimicrobiana em meio sólido revelaram que Staphylococcus aureus e Candida albicans foram os mais susceptíveis aos compostos bioativos enquanto que Escherichia coli e Mycobacterium smegmatis, os mais inativos. Por bioautografia está demonstrando a atividade antimicrobiana dos constituintes químicos das espécies de Penicillium, resultado que abre novas possibilidades para identificação de compostos com potencial antifúngico e antibacteriano.

En este trabajo se investigó la viabilidad y la actividad antimicrobiana de 60 Penicillium spp. conservados en aceite mineral y en agua destilada estéril. Los hongos fueron reactivados en medios de cultivos selectivos y verificados conforme a sus características macro y micromorfológicas. La actividad antimicrobiana fue determinada por las técnicas del bloque de agar y bioautografia contra bacterias grampositivas, bacterias gramnegativas, levaduras y Mycobacterium smegmatis. La viabilidad de los cultivos correspondió a 46,7% para aquellos conservados en agua destilada y a 43,3% para los conservados en aceite mineral. Las pruebas de actividad antimicrobiana en medio solido revelaron que Staphylococcus aureus y Candida albicans fueron los más susceptibles a los compuestos bioactivos mientras que Escherichia coli y Mycobacterium smegmatis, los más inactivos. Se demostró por bioautografía la actividad antimicrobiana de los componentes químicos de las especies de Penicillium, resultado que abre nuevas posibilidades para la identificación de compuestos con potencial antifúngico y antibacteriano.

In this study, we investigated the viability and antimicrobial activity of 60 Penicillium spp. conserved under mineral oil and sterile distilled water. The fungi were reactivated in specific culture media and verified according to their macro and micromorphologic characteristics. Their antimicrobial activity against Gram-positive bacteria, Gram-negative bacteria, yeasts, and Mycobacterium smegmatis was determined by the agar block and bioautography techniques. Viability of cultures corresponded to 46.7% for those conserved in distilled water and 43.3% for those conserved in mineral oil. The antimicrobial activity in solid media revealed that Staphylococcus aureus and Candida albicans were the most susceptible to the bioactive components, while Escherichia coli and Mycobacterium smegmatis the most inactive. The antimicrobial activity of the chemical components of the Penicillium species was demonstrated through bioautography; these results open new possibilities for the identification of components with antifungal and antibacterial potential.

**Seroprevalence of Trypanosoma cruzi infection in the rural population of Miraflores, Monagas State, Venezuela: Stability and reactivity differences of fixed epimastigotes**

Se evaluó la seroprevalencia de anticuerpos IgG anti-Trypanosoma cruzi, en la población rural de Miraflores, estado Monagas. En el estudio participaron 106 individuos (edades: 4 a 79 años) de cualquier género. El diagnóstico serológico fue realizado mediante la prueba de ELISA utilizando antígenos fijados de las formas epimastigotes de T. cruzi. Se evaluó la estabilidad del antígeno utilizado y las diferencias en la reactividad de dos cepas distintas de T. cruzi (complejo Tulahuen-Brasil y cepa RG1). La seropositividad de anticuerpos de tipo IgG anti-T. cruzi, con la cepa RG1 y la mezcla de cepas Tulahuen-Brasil, fue 2,8%. Se observó una correlación positiva entre la edad de los pacientes y la densidad óptica de la determinación de anticuerpos tipo IgG anti-T. cruzi presentada por la prueba de ELISA, para las dos cepas. La cepa Tulahuen-Brasil mostró mayor reactividad que aquella obtenida con la cepa RG1. Los antígenos fijados (mezcla de cepas Tulahuen-Brasil) mantuvieron su estabilidad y reactividad por un período de 5 años, lo cual hace de este tipo de antígeno un excelente candidato para las pruebas de diagnóstico. En la zona de estudio estuvieron presentes las variables epidemiológicas de riesgo para la reactivación de la infección en esta región de Venezuela.

The seroprevalence of anti-Trypanosoma cruzi IgG was evaluated in the rural population of Miraflores, Monagas State. The study included 106 individuals (ages: 4 to 79 years) of any sex. The serologic diagnosis was done through the ELISA test using as antigen fixed T. cruzi epimastigote forms. The stability of the antigen used was evaluated, as well as the differences in reactivity of the two different T. cruzi strains used (the Tulahuen-Brasil complex, and the RG1 strains). Seropositivity of anti-T. cruzi IgG type antibodies with the RG1 strains and the mixture of Tulahuen-Brasil strains was 2.8%. There was a positive relationship between the age of patients and the optical density of the anti-T. cruzi IgG type antibody determination shown by the ELISA test for both strains. The Tulahuen-Brasil strains showed greater reactivity than the one seen with the RG1 strain. Fixed antigens (mixture of Tulahuen-Brasil strains) maintained their stability and reactivity during a five-year period, which means that this antigen is an excellent candidate for diagnostic tests. The epidemiological risk variables for the reactivation of this infection were present in this region of Venezuela.

Prevalence of intestinal coccidian in preschool children from San Felix City, Venezuela

Many epidemiological aspects of intestinal coccidiosis in Bolivar State are not known. There are no studies done in apparently health children. The purpose of this study was to determine intestinal coccidian prevalence in preschool children attending the S.E.U. Teresa de la Parra preschool located in San Felix, Bolivar State, Venezuela. The universe included 109 children, and 73 were included in the study. A spontaneous evacuation fecal sample was collected from each child, preserved in 10% formaldehyde, and analyzed by a formaldehyde-ether technique, and Kinyoun stain. Sixty seven percent of the universe was evaluated (73/109). Eighty seven point seven percent of the children were infected by some parasite and/or commensal. Ten enteroparasite species were diagnosed, and Blastocystis hominis (37%) and Giardia lamblia (27.4%) were the most frequent of the protozoa. Among the helminthes, the most common were Ascaris lumbricoides and Trichuris trichiura with 35.6% each. Prevalence of intestinal coccidian was 10.9% and Cryptosporidium spp. was the only one diagnosed in eight cases (10.9%). The infection did not show any age predilection, but there was a gender bias, since 87.5% of those infected were females. Only three of the cases (37.5%) with Cryptosporidum spp. had diarrhea. In conclusion, a relative high rate of intestinal coccidiosis in the preschool children evaluated was determined.

En el estado Bolívar se desconocen muchos aspectos epidemiológicos de las coccidiosis intestinales. En niños aparentemente sanos no se tiene ningún estudio. El objetivo del trabajo fue determinar la prevalencia de coccidios intestinales en niños matriculados en el pre-escolar U.E.E. Teresa de la Parra de San Félix, estado Bolívar. El universo fue de 109 niños y la muestra estudiada de 73. Se obtuvo una muestra fecal por evacuación espontánea de cada pre-escolar, la cual fue preservada en formol al 10% y analizada mediante la técnica formol-éter y coloración de Kinyoun. Se evaluó el 67% del universo (73/109). El 87,7% de los niños estaba infectado por algún parásito y/o comensal. Se diagnosticaron un total de 10 especies de enteroparásitos, siendo Blastocystis hominis con 37% y Giardia lamblia con 27,4% los más frecuentes, dentro de los protozoarios. Entre los helmintos los más comunes fueron Ascaris lumbricoides y Trichuris trichiura con 35,6% cada uno. La prevalencia de coccidios intestinales fue 10,9%, siendo Cryptosporidium sp. el único diagnosticado con 8 casos (10,9%). La infección no tuvo predilección por la edad pero si con relación al género, siendo el femenino el más afectado (87,5%). Sólo en tres de los casos (37,5%) con Cryptosporidium sp. se presentó diarrea. En conclusión, se determinó una prevalencia relativamente elevada de coccidiosis intestinal en los preescolares evaluados.

Avaliação de métodos de concentração e detecção molecular de adenovírus em águas não tratadas - uma metanálise

Metodologias moleculares baseadas em PCR têm sido utilizadas para detectar adenovírus (AdVs) em amostras ambientais. É consenso entre os pesquisadores que estas metodologias oferecem vantagens sobre os métodos tradicionais de isolamento viral por cultura celular, sendo mais sensíveis, específicas e propiciando menor tempo de diagnóstico; contudo, há divergências em relação ao método de concentração viral a ser utilizado em amostras ambientais. Assim sendo, realizou-se uma metanálise com o intuito de responder aos questionamentos concernentes à eficácia do uso de três metodologias de concentração viral associadas à detecção molecular de AdVs em amostras de águas não tratadas, para a qual foram selecionados 33 estudos. Concluiu-se que: a) PCR não deve ser o método de escolha para detectar AdVs em amostras ambientais, devendo-se priorizar qPCR ou Nested-PCR; b) para detectar AdVs em amostras de rios ou lagos, a metodologia de escolha deve ser a associação entre ultracentrifugação e Nested-PCR; c) é aconselhável utilizar associação entre microfiltração em membrana, ultrafiltração e qPCR para detectar AdVs em amostras de esgotos tratados e não tratados. Estudos adicionais são necessários para avaliar os métodos que foram empregados em um único estudo e/ou com número escasso de amostras.

La detección de adenovirus (AdVs) en muestras ambientales se realiza por medio de metodologías moleculares basadas en PCR. Existe consenso entre los investigadores que estas metodologías ofrecen algunas ventajas en comparación con los métodos tradicionales de aislamiento de virus por medio de cultivos celulares; sin embargo, el método que se debe usar para concentrar los virus en muestras ambientales todavía es controversial. Por consiguiente, realizamos un meta-análisis dirigido a responder las preguntas respecto a la eficacia de tres métodos de concentración de virus asociados a la detección molecular de AdVs en muestras de agua no tratada, seleccionando 33 estudios. Concluimos que: a) el PCR no debe ser el método de elección para la detección de AdVs en muestras ambientales y que en vez debe usarse prioritariamente el método de qPCR o PCR-Anidada; b) para la detección de AdVs en muestras de agua tomadas de ríos o lagos, el método de elección debe ser una asociación de ultracentrifugación y PCR-Anidada; c) es aconsejable usar una asociación de membrana de microfiltración, ultrafiltración y qPCR para la detección de AdVs en muestras de aguas negras tratadas o no tratadas. Se necesitan más estudios para evaluar los métodos que se han usado en un solo estudio y/o con un número escaso de muestras.

Molecular methodologies based on PCR have been used for the detection of adenovirus (AdVs) in environmental samples. It is a consensus among researchers that these methodologies offer some advantages compared with traditional methods for the isolation of virus by cell culture, since they are more sensitive and specific and also require less processing time; however, the method to be used for virus concentration in environmental samples is still controversial. Consequently, we carried out a meta-analysis, aiming at responding the questions concerning the efficacy of three methods for virus concentration associated to the molecular detection of AdVs in untreated water samples, by selecting 33 studies. We concluded that: a) PCR should not be the method of choice for the detection of AdVs in environmental samples, and instead the use of qPCR or Nested-PCR should be prioritized; b) for the detection of AdVs in water samples collected in rivers or lakes, the method of choice should be an association of ultracentrifugation and Nested-PCR; c) it is advisable to use an association of microfiltration membrane, ultrafiltration, and qPCR for the detection of AdVs in treated and untreated sewage samples. Further studies are needed to evaluate the methods that have been used in only one study and/or with a limited number of samples.

Performance of commercial kits for serologic diagnosis of viral hepatitis B and C in yanomami and piaroa populations from Amazonas State

Los virus de hepatitis son una causa importante de morbilidad y mortalidad en la cuenca amazónica. El objetivo de este estudio fue evaluar el desempeño de estuches serológicos para la determinación de marcadores de VHB y VHC en población indígena. Se determinó la presencia de anti-HBc, agsHB, anti-VHC y de genomas virales en sueros de individuos piaroa y yanomami. Más de 50% de las muestras reactivas por un inmunoensayo comercial no resultaron positivas al usar otros estuches. El marcador serológico para el cual se observó una mayor concordancia entre los estuches comerciales fue el anti-HBc, posiblemente porque se trata de un ensayo de inhibición. La concordancia entre los ensayos para agsHB con la positividad de la PCR fue de pobre a moderada, coincidiendo sólo dos de los ensayos con los resultados de la PCR. No existió concordancia entre los distintos ensayos inmunoezimáticos, ni con la presencia del ARN viral para VHC. Las discrepancias inesperadas entre distintos estuches comerciales pudieran deberse a características inherentes a estas poblaciones, tales como múltiples coinfecciones, en especial parasitarias. Estos factores pudiesen estar afectando la especificidad de los estuches diagnósticos, situación observada con menor frecuencia en otras poblaciones venezolanas. Estos estudios refuerzan la importancia de la validación de pruebas serológicas en estas poblaciones, con ensayos confirmatorios y moleculares.

Hepatitis viruses are an important morbility and mortality cause in the Amazon basin. The goal of this study was to evaluate the performance of commercial serologic kits for determination of HVB and HVC markers in indigenous populations. Presence of anti-HBc, HBags, anti-HVC and viral genomes was determined in sera from piaroa and yanomami individuals. Over 50% of the samples reactive with one of the commercial kits were not positive when using other kits. The serologic marker which showed the highest concordance among the commercial kits was anti-HBc, possibly because it is an inhibition assay. Concordance among assays for HBags and PCR positivity varied between poor and moderate; only two of the tests coincided with the PCR results. There was no concordance among the various immunoenzymatic assays, nor in viral RNA presence for HVC. The unexpected discrepancies among the various commercial kits could be due to inherent characteristics of these populations such as multiple co-infections, especially parasitic. These factors could be affecting the specificity of the diagnostic kits, situation less frequently observed in other Venezuelan populations. This study emphasizes the importance of validating serologic tests in these populations, through confirmation and molecular assays.