Investigación Clínica

Las enfermedades parasitarias intestinales como un problema de salud global

Análisis de las eficiencias de amplificación por PCR en tiempo real de tres regiones genómicas del virus dengue

Early diagnosis of dengue virus (DENV) infection represents a key factor in preventing clinical complications attributed to the disease. The aim of this study was to evaluate the amplification efficiencies of an in-house quantitative real time-PCR (qPCR) assay of DENV, using the non-structural conserved genomic region protein-5 (NS5) versus two genomic regions usually employed for virus detection, the capsid/pre-membrane region (C-prM) and the 3-noncoding region (3NC). One-hundred sixty seven acute phase serum samples from febrile patients were used for validation purposes. Results showed that the three genomic regions had similar amplification profiles and correlation coefficients (0.987-0.999). When isolated viruses were used, the NS5 region had the highest qPCR efficiencies for the four serotypes (98-100%). Amplification from acute serum samples showed that 41.1% (67/167) were positive for the universal assay by at least two of the selected genomic regions. The agreement rates between NS5/C-prM and NS5/3NC regions were 56.7% and 97%, respectively. Amplification concordance values between C-prM/NS5 and NS5/3NC regions showed a weak (k= 0.109; CI 95%) and a moderate (k= 0.489; CI 95%) efficiencies in amplification, respectively. Serotyping assay using a singleplex NS5-TaqMan® format was much more sensitive than the C-prM/SYBR Green® I protocol (76%). External evaluation showed a high sensitivity (100%), specificity (78%) and high agreement between the assays. According to the results, the NS5 genomic region provides the best genomic region for optimal detection and typification of DENV in clinical samples.

El diagnóstico precoz de la infección por el virus dengue (DENV) constituye un elemento clave para la prevención de las complicaciones clínicas propias de la enfermedad. El objetivo del estudio fue evaluar la detección de DENV mediante un ensayo cuantitativo de PCR-tiempo real (qPCR), desarrollado localmente, utilizando la región no-estructural-5 (NS5), versus dos regiones tradicionalmente empleadas para la detección del virus, la región cápside/pre-membrana (C-prM), y la región noncodificante-3 (3NC). Se recolectaron 167 muestras de suero de pacientes en fase aguda de la enfermedad. Las tres regiones génicas tuvieron perfiles de amplificación/coeficientes de correlación similares (0,987-0,999). Sin embargo, la región NS5 tuvo la eficiencia de amplificación más elevada para los cuatro serotipos (98-100%). Durante el proceso de validación, 41,1% (67/167) de las muestras de suero resultaron positivas para DENV al menos por dos de las regiones genómicas empleadas. Los valores de concordancia entre las regiones NS5/C-prM y NS5/3NC fueron de 56,7% y 97%, respectivamente. La concordancia fue débil entre las regiones NS5/C-prM (k= 0,109; CI 95%), sin embargo, fue moderada entre las regiones NS5/3NC (k= 0,489; CI 95%). El ensayo de tipificación uniplex en formato NS5/TaqMan® mostró alta sensibilidad (100%) que el protocolo C-prM/SYBRGreen®-I (76%). La validación externa del ensayo mostró una alta sensibilidad (100%), especificidad (78%) y acuerdo alto entre los ensayos utilizados. De acuerdo a los resultados obtenidos, la región NS5 ofrece la mayor opción para la detección y serotipificación del DENV en muestras clínicas.

Conocimientos y actitudes como predictores en la pesquisa del cuello uterino en mujeres en un área urbana venezolana

The purpose of this research was to investigate how the knowledge and attitudes have influence in Cervical Cancer (CC) screening among Venezuelan women, by realizing a cross-sectional descriptive study based on a structured non disguised questionnaire with closed ended questions: yes/no questions and multiple choices. The survey was performed on 691 volunteers, of which 595 were analyzed. Each patient was asked to fill in the questionnaire. Four hundred ninety three of 522 (94.4%) answered that they knew that Pap smear is for screening CC. Knowledge of Pap smear was statistically significant when it was compared to high educational level (p<0.0001) although 185 (76%) of 244 low educational level interviewees answered that they had the knowledge that the Pap smear is used for screening of CC. Four hundred four of 504 (84.7%; p<0.001) mentioned that they had a Pap smear at least once. One hundred ninety two (38.1%) of 504 women were adherent to an annual Pap smear test and more than half of the women (n=337, 67%) had the last Pap smear in the last 1-3 years. Women with a high educational level showed higher adherence to the annual Pap smear screening (68.2%). Two hundred fifty seven (87.4%) of 294 said that they remembered when they got the information about Pap smear. The conclusions of this investigation were that our women were aware about Pap smear, had a good attitude to have a Pap smear and to be adherent to a regularly performed screening.

El objetivo de este estudio fue investigar como el conocimiento y las actitudes que poseen las mujeres venezolanas son elementos que influencian la pesquisa del Cáncer del Cuello Uterino (CCU). La investigación consistió en un estudio descriptivo transversal basado en un cuestionario estructurado no disfrazado con preguntas cerradas, usando respuestas si/no y múltiple escogencia. Se entrevistaron 691 mujeres; 595 fueron analizadas. Cada paciente llenó el cuestionario. Cuatrocientos noventa y tres de 522 (94,4%) respondieron que sabía que la citología cervico-vaginal (CCV) es para la pesquisa del CCU. El conocimiento sobre la utilidad de la CCV fue estadísticamente significativo cuando se comparó el nivel educacional de las entrevistadas (p<0,0001), sin embargo, 185 (76%) de 244 mujeres con bajo nivel educacional respondieron que ellas tenían el conocimiento sobre la utilidad de la CCV en la pesquisa del CCU. Cuatrocientos cuatro de 595 (84,7%; p<0,001) mencionaron que ellas se había realizado al menos una CCV. Ciento noventa y dos de 504 entrevistadas (38,1%) se realizaban una CCV anual y más de la mitad (n=337, 67%) de ellas se practicaban la CCV entre 1-3 años. Las mujeres con un nivel educacional elevado fueron más inclinadas a realizarse su CCV anual (68,2%). Doscientos cincuenta y siete (87,4%) de 294 entrevistadas mencionaron que ellas recordaban cuando se enteraron de la utilidad de la CCV. Las conclusiones de esta investigación fueron que nuestras mujeres están concientes de la utilidad de la CCV, tienen una buena actitud a realizársela, así mismo de practicársela regularmente.

Diversidad genotípica de rotavirus grupo A: correlación entre el tipo G3 y severidad de la infección. Valencia, Venezuela

La variabilidad genética y antigénica de los rotavirus (RV) parece tener implicaciones en la severidad de la infección, pero los estudios no son concluyentes. Por este motivo, en el presente trabajo se compararon las medias de severidad entre los episodios de diarrea causados por RV tipo G1 y G3, durante el período 2001-2005, en la Ciudad Hospitalaria Dr. Enrique Tejera de Valencia, Venezuela. RV se detectó por ELISA, los tipos G y P por RT-PCR. La severidad de la infección se estimó utilizando el sistema de Ruuska-Vesikari, las medias de severidad se compararon mediante la prueba t de Student (2 colas, 95%IC). RV se detectó en 24,5% (3.193/13.026) de los pacientes. G3 fue más frecuente (50,3%), seguido por G1 (39,2%), G9 (6,2%), G2 (0,6%), G4 (0,6%) y 3,1% mixtos (G1+G3). El 87,3% de las muestras resultaron P[8], 10,9% P[4] y 1,8% P[6]. Al comparar los episodios G1 y G3, no se observaron diferencias significativas (P>0,05) entre los grupos etarios, frecuencia de desnutridos, deshidratación y lactancia materna. Sin embargo, el grupo G3 se caracterizó por presencia significativa (P< 0,05) de fiebre, episodios con una duración ≥ 6 días, 6 o más evacuaciones en 24 horas y 3 o más días con vómitos. La media de severidad para los episodios G3 (11,1) fue mayor significativamente (P<0,05) a la G1 (7,8). Estos resultados muestran la asociación de G3 con diarreas severas y apoyan la importancia de conocer la variabilidad y frecuencia de los tipos virales para medir el impacto de las vacunas antirotavirus.

Genetic and antigenic rotavirus (RV) variabilities may have implications in the severity of the infection caused by these agents; however the studies are not conclusive. For that purpose, the mean severity scores of diarrhea episodes caused by RV types G1 and G3 were compared, at Ciudad Hospitalaria Dr. Enrique Tejera in Valencia, Venezuela, between 2001- 2005. RV were identified by ELISA, G and P types by RT-PCR. The severity of infection was determined using the Ruuska-Vesikari system and the mean severity values were compared using the Students t-test (two-tailed, 95%CI). RV were detected in 24.5% of patients (3193/13026), being G3 the most common (50.3%), followed by G1 (39.2%), G9 (6.2%), G2 (0.6%), G4 (0.6%) and of mixed infection 3.1% (G1+G3). Type P[8] was present in 87.3% of samples, 10.9% P[4] and 1.8% P[6]. There were not statistically significant differences (P≥0.05) observed between the episodes caused by G1 and G3 when age, breast feeding, and degrees of malnutrition and dehydration were considered. Nevertheless, in the G3 positive group, fever, episodes of more than 6 days, 6 or more evacuations in 24 hours and 3 or more days with vomit, were observed. The mean severity score for the G3 episodes (11.1) was significantly higher (P< 0.05) than for G1 (7.8). These results show that G3 was associated with severe diarrhea, supporting the hypothesis that the knowledge of the variability and frequency of viral types is essential to measure the impact of an anti-rotavirus vaccine.

La intoxicación con cobre disminuye la sobrevida e induce alteraciones neurológicas en Drosophila melanogaster

La enfermedad de Wilson, es un trastorno hereditario autosómico recesivo causado por mutaciones del gen de la trifosfatasa de adenosina (ATP7B). Dicha mutación ocasiona intoxicación con cobre, generando manifestaciones clínicas por los efectos tóxicos del metal, principalmente a nivel del hígado y el encéfalo. Recientemente se han desarrollado modelos genéticos de la enfermedad para su estudio clínico. Sin embargo, la utilidad de los mismos es limitada por el hecho de que en tales modelos no se observan manifestaciones neurológicas. El presente estudio tuvo como objetivo desarrollar un modelo de la enfermedad de Wilson en Drosophila melanogaster. Inicialmente se evaluó el efecto de la suplementación con concentraciones de 31 µM y 47 µM de cobre en la sobrevida. Posteriormente se realizaron estudios de conducta para determinar si existían alteraciones en el desempeño motor asociadas al tratamiento con la dosis de 47 µM de cobre. Los resultados obtenidos sugieren que el tratamiento con cobre disminuye la viabilidad de la Drosophila. La disminución de la sobrevida estuvo asociada a un aumento y una disminución de los registros de actividad motora en las etapas tempranas y tardías de la intoxicación respectivamente. Por último, se evaluó el papel del sistema de neurotransmisión dopaminérgico sobre las alteraciones conductuales inducidas por el cobre. El tratamiento con el precursor de la dopamina, L-dopa, indujo un aumento de la actividad motora similar al inducido por el cobre. Por el contrario, el tratamiento con Flufenazina, un antagonista de los receptores dopaminérgicos D2, fue capaz de impedir las alteraciones conductuales en todas las edades evaluadas. Estos resultados sugieren que la Drosophila melanogaster podría ser empleada como modelo para el estudio de posibles intervenciones con potencial terapéutico en la enfermedad de Wilson.

Wilson disease is a hereditary disorder caused by mutations of the ATP7B gene, which leads to intoxication with copper as a result of an unbalance of copper homeostasis. The clinical manifestations resulting from this intoxication are related to the affectation of liver and the encephalon in most cases. Several animal models are currently available for the study of the malady. However, in such models no neurological symptoms are observed, which limits their use for the study of pathogenic effects of this disease on the central nervous system. The aim of the present study was to evaluate if copper feeding could induce a disease state in Drosophila melanogaster to model Wilson disease. The effect of the feeding of copper at the doses of 31 µM and 47 µM on the survival was initially evaluated. Next, behavioral experiments were conducted to determine whether the motor performance was altered by the 47 µM concentration. The results suggest that copper treatment decreases the viability of the flies. In addition, the decrease of viability was associated to an increase and decrease of spontaneous motor activity at early and late stages of the intoxication, respectively. Finally, the role of the dopaminergic neurotransmission system on the observed motor alterations was evaluated. The dopamine precursor L-dopa increased motor activity. In contrast, D2 receptor antagonist, Fluphenazine, was able to block both the increase and decrease of motor activity scores induced by copper. These results suggest that Drosophila melanogaster could be used as a model organism for the study of possible interventions with potential neuroprotective effects in Wilson disease.

**Prevalencia de Encephalitozoon intestinalis y Enterocytozoon bieneusi en pacientes VIH positivos de Maracaibo, Venezuela**

Los microsporidios pueden provocar infecciones emergentes y oportunistas en individuos inmunocomprometidos de todo el mundo. Se realizó éste estudio para identificar las especies de microsporidios intestinales presentes en pacientes con VIH-SIDA del Servicio Autónomo Hospital Universitario de Maracaibo (SAHUM). Se recolectaron 50 muestras fecales de individuos con diagnóstico confirmado de VIH durante los años 2007-2008; se obtuvieron las cifras de CD4 de solo 42 pacientes. Las muestras se analizaron mediante PCR separadas para la identificación de Encephalitozoon intestinalis y Enterocytozoon bieneusi. Las especies de microsporidios presentaron un 36% de prevalencia, 10 pacientes presentaron Encephalitozoon intestinalis, 4 Enterocytozoon bieneusi y 4 ambas especies. Se determinó una relación inversamente proporcional y estadísticamente significativa entre el contaje de CD4 y la presencia de microsporidios en la muestra fecal. Es destacable la elevada prevalencia de especies de microsporidios observada en los pacientes VIH estudiados, donde predominó E. intestinalis.

Microsporidioses are considered emerging and opportunistic infections in immunocompromised individuals worldwide. The purpose of this study was to identify the species of intestinal microsporidia in patients with HIV-AIDS from the Servicio Autónomo Hospital Universitario de Maracaibo, Venezuela (SAHUM). Fecal samples were collected from 50 patients with confirmed diagnosis of HIV, during the years 2007 and 2008; the CD4 values were obtained from 42 patients. The samples were analyzed by separate PCRs to identify Encephalitozoon intestinalis and Enterocytozoon bieneusi. Microsporidia species showed a 36% prevalence: ten patients had Encephalitozoon intestinalis, four Enterocytozoon bieneusi and four both species. An inverse and statistically significant relationship between the CD4 count and the presence of microsporidia in the fecal sample was also found. It is remarkable the high prevalence of microsporidia species observed in the HIV patients studied, with a predominance of E. intestinalis.

Endocarditis infecciosa por Rhizobium radiobacter: Reporte de un caso

Rhizobium radiobacter es una bacteria Gram-negativa, fijadora de nitrógeno que se encuentra principalmente en el suelo. Rara vez causa infecciones en humanos. Ha sido asociada a bacteriemia secundaria a colonización de catéteres intravasculares en pacientes inmunocomprometidos. El objetivo de este trabajo es informar un caso de endocarditis infecciosa por R. radiobacter. Se trata de paciente masculino, de 47 años de edad, con diagnóstico de enfermedad renal crónica estadio 5 en tratamiento sustitutivo con hemodiálisis, quien acude a centro asistencial por presentar fiebre de dos semanas de evolución. Es hospitalizado, se toman muestras de sangre periférica para hemocultivo y se inicia antibioticoterapia empírica con cefotaxime más vancomicina. El ecocardiograma transtorácico revelo vegetación fusiforme en válvula tricúspide con regurgitación grado III-IV/IV. Al séptimo día del inicio de la antibioterapia el paciente presenta mejoría clínica y paraclínica. La bacteria identificada por hemocultivo es Rhizobium radiobacter resistente a ceftriaxona y sensible a imipenem, amikacina, ampicilina y ampicilina/sulbactam. Debido a la mejoría clínica se decide continuar tratamiento con vancomicina y se anexa imipenem. A los 14 días de iniciada la antibioterapia el paciente es dado de alta con tratamiento ambulatorio con imipenen hasta cumplir seis semanas de tratamiento. En el ecocardiograma control se evidencio ausencia de la vegetación en la válvula tricúspide. Este caso sugiere que R. radiobacter puede ser una causa de endocarditis en pacientes portadores de catéteres intravasculares.

Rhizobium radiobacter is a Gram-negative, nitrogen-fixing bacterium, which is found mainly on the ground. It rarely causes infections in humans. It has been associated with bacteremia, secondary to colonization of intravascular catheters, in immunocompromised patients. The aim of this paper was to report the case of an infective endocarditis caused by R. radiobacter, in a 47-year-old male, diagnosed with chronic kidney disease stage 5, on replacement therapy with hemodialysis and who attended the medical center with fever of two weeks duration. The patient was hospitalized and samples of peripheral blood were taken for culture. Empirical antibiotic therapy was started with cefotaxime plus vancomycin. The transthoracic echocardiogram revealed fusiform vegetation on the tricuspid valve, with grade III-IV/IV regurgitation. On the seventh day after the start of antibiotic therapy, the patient had a clinical and paraclinical improvement. The bacterium identified by blood culture was Rhizobium radiobacter, ceftriaxone-resistant and sensitive to imipenem, amikacin, ampicillin and ampicillin/ sulbactam. Because of the clinical improvement, it was decided to continue treatment with vancomycin and additionally, with imipenem. At 14 days after the start of antibiotic therapy, the patient was discharged with outpatient treatment with imipenem up to six weeks of treatment. The control echocardiogram showed the absence of vegetation on the tricuspid valve. This case suggests that R. radiobacter can cause endocarditis in patients with intravascular catheters.

Presente y futuro de la estimulación magnética transcraneal

La estimulación magnética transcraneal ha llamado la atención de neurocientíficos y público en general por la posibilidad de estimular y controlar el sistema nervioso de forma no invasiva, realizar diagnósticos más exactos, y aplicar tratamientos y programas de rehabilitación más efectivos en múltiples enfermedades que afectan el sistema nervioso. Así mismo, esta novedosa herramienta ha ayudado a develar la complejidad del comportamiento neural, sus conexiones y su modulación plástica. La estimulación magnética aplicada de manera simple o pareada, se ha convertido en una alternativa útil en el diagnóstico de enfermedades como esclerosis múltiple, enfermedad de Parkinson, epilepsia, distonía, esclerosis lateral amiotrófica, enfermedad cerebro vascular, así como el sueño y sus trastornos, entre otras alteraciones. A nivel terapéutico, se ha sugerido el uso de la estimulación magnética repetitiva con diferentes niveles de evidencia en depresión refractaria a tratamiento farmacológico convencional, tinitus, afonía psicógena, enfermedad de Alzheimer, autismo, enfermedad de Parkinson, distonías, accidente cerebro vascular, epilepsia, trastornos de ansiedad generalizada, estrés post-traumático, alucinaciones auditivas, dolor crónico, afasias, trastorno obsesivo compulsivo, disquinesias inducidas por L-Dopa, manía y síndrome de Rasmussen, entre otros trastornos. Su beneficio en neurorehabilitación es una realidad inocultable, en cuyo caso se ha podido usar con efectividad y, prácticamente, sin efectos secundarios.

Magnetic stimulation has called the attention of neuroscientists and the public due to the possibility to stimulate and control the nervous system in a non-invasive way. It has helped to make more accurate diagnosis, and apply more effective treatments and rehabilitation protocols in several diseases that affect the nervous system. Likewise, this novel tool has increased our knowledge about complex neural behavior, its connections as well as its plastic modulation. Magnetic stimulation applied in simple or paired-pulse protocols is a useful alternative in the diagnosis of diseases such as multiple sclerosis, Parkinson disease, epilepsy, dystonia, amyotrophic lateral sclerosis, cerebrovascular disease, and sleep disorders. From the therapeutic perspective, magnetic stimulation applied repetitively has been found useful, with different degrees of efficacy, in treating resistant depression, tinnitus, psychogenic dysphonia, Alzheimer disease, autism, Parkinson disease, dystonia, stroke, epilepsy, generalized anxiety as well as post traumatic stress disorder, auditory hallucinations, chronic pain, aphasias, obsessive-compulsive disorders, L-dopa induced dyskynesia, mania and Rasmussen syndrome, among others. The potential of magnetic stimulation in neurorehabilitation is outstanding, with excellent range of safety and, in practical terms, without side effects.

Agentes patógenos responsables de trastornos gastrointestinales en sujetos infectados con VIH

Los trastornos gastrointestinales o TGI son afecciones debilitantes muy comunes en individuos infectados con el virus de inmunodeficiencia humana (VIH), que pueden conducir a muerte. Numerosos agentes etiológicos y mecanismos patofisiológicos han sido propuestos causar esta afección. A pesar del uso de terapia antirretroviral, que ha reducido enormemente la prevalencia de TGI en estos pacientes, patógenos entéricos como virus, bacterias, parásitos y hongos logran actuar todavía como agentes oportunistas. Citomegalovirus, adenovirus, calicivirus, astrovirus, rotavirus, enterovirus, picobirnavirus y algunos más recientemente descritos, como bocavirus y Aichi virus han sido detectados en pacientes con VIH. Sin embargo, a excepción del citomegalovirus, hay muy poca certeza acerca del papel que juegan algunos de ellos en estas afecciones. Varias especies de Criptosporidium, microsporidos, Salmonella, micobacterias atípicas y Campylobacter jejuni han sido reconocidos también como una importante causa de TGI en estos pacientes. La progresiva incorporación de técnicas inmunoenzimáticas y moleculares, cada vez más sensibles para la detección de antígenos, anticuerpos y agentes patógenos en heces ha mejorado el diagnóstico de las diarreas y contribuido a esclarecer la importancia etiológica de algunos microorganismos en los pacientes inmunocompetentes. En Venezuela existen algunos datos acerca de la prevalencia de patógenos entéricos en pacientes inmunodeficientes infectados con VIH. La identificación del agente etiológico responsable de TGI podría ser de gran utilidad para el manejo y tratamiento de estos pacientes, para quienes la enteritis viral es una manifestación morbosa que reduce la calidad de vida y ocasiona un elevado gasto en salud pública.

Gastrointestinal disorders or GID are debilitating conditions common in individuals infected by the human immunodeficiency virus (HIV), capable of leading to death. Numerous etiological agents and pathophysiological mechanisms have been involved in this status. Although the use of highly active antiretroviral therapy (HAART) in many countries has greatly reduced the prevalence of gastrointestinal infections, enteric pathogens such as bacteria, parasites, fungi and viruses may still act as opportunist agents in these patients. Cytomegalovirus, adenovirus, calicivirus, astrovirus, rotavirus, enterovirus, picobirnavirus and some more recently described, like bocavirus and Aichi virus, have been detected in HIV patients. However, except for cytomegalovirus, which is an established etiological agent of GID in these patients, the role of the other viruses remains unclear. Several species of Cryptosporidium, microsporidia, Salmonella, atipical mycobacteria and Campylobacter jejuni, have also been recognized as important causes of GID in HIV patients. The progressive incorporation of increasingly sensitive immunological and molecular assays for antigen, antibody and pathogens detection from faeces, has improved the diagnosis of diarrhea and contributed to clarify the etiological significance of some microorganisms in immunocompetent patients. In Venezuela, some information is available about the prevalence of enteric pathogens in immunocompromised patients infected with HIV. The identification of the etiologic agent responsible for this condition may be useful for the management and treatment of these patients, for whom viral enteritis is a disease, which reduces their quality of life and causes a high public health spending.

La redacción de un trabajo científico