Boletín de Malariología y Salud Ambiental

Characterization of anophelines larval habitats in the municipality of Sifontes, Bolívar State, Venezuela

El municipio Sifontes, ubicado en el noreste del estado Bolívar, constituye el principal foco de malaria de Venezuela. Durante el quinquenio 2010-2014, se registró en el municipio un aumento considerable de la morbilidad con una fuerte tendencia al incremento, cerrando 2014 con la cifra record de 51.603 casos, 58% de la malaria del país en el año. Con el objeto de estudiar la distribución espacial de las larvas de anofelinos en los hábitats acuáticos y su relación con las variables ambientales, se hicieron colectas mensuales de larvas en hábitats representativos de los diferentes tipos existentes en la zona, entre septiembre 2002 y diciembre 2003. El Análisis de Correspondencia Canónica (CANOCO) indica que a nivel de hábitat (humedal), la presencia de las especies de Anopheles está determinada por el tipo y la dinámica hídrica del hábitat, mientras que a nivel de microhábitat (cucharonazo) las especies se ubican a lo largo de un gradiente dominado por el tipo de vegetación, y en menor grado por la luz solar y el color aparente del agua. Esto permitió establecer grupos de especies a priori, tales como las del subgénero Nyssorhynchus, asociadas a la luz solar y a ciertas plantas acuáticas, o las de los subgéneros Anopheles y Stethomyia, An. (Lophopodomyia) squamifemur y Chagasia bonneae asociadas a ambientes sombreados y carentes de vegetación. Los resultados ayudan a comprender mejor la relación de las especies de anofelinos con el medio ambiente y resaltan la importancia de variables como la dinámica hídrica, luz solar, vegetación y color aparente del agua para determinar su ocurrencia en el hábitat acuático.

The Municipality of Sifontes, located in the northeast of Bolivar State, is the main malaria foci in Venezuela. A considerable increase in malaria morbidity was recorded in the Municipality during the decade 2010-2014, with a record figure of 51.603 cases for 2014, 58% of the malaria for the country. In order to study the spatial distribution of anopheline inmature stages in the larval habitats and its relation to environmental variables, monthly collections were carried out in larval habitats representatives of the different types present in the area between September 2002 and December 2003. The Canonic Correspondance Analysis (CANOCO) showed that at the larval habitat level the Anopheles species is determined by the type and dynamics of the habitat, while at the microhabitat level (dip) the species are located along a gradient dominated by the type of vegetation, and in a lesser degree by the exposure to sun light and apparent water color. These allowed to established group of species a priori, such as those of the subgenus Nyssorhynchus associated to sun light and certain aquatic plants, or the subgenus Anopheles and Sthetomyia, An. squamifemur and Chagasia bonneae associated to shaded environments and lack of vegetation. The results help to understand the relationship of anopheline species with the environment and the importance of variables such s water dynamics, sun light, vegetation and water apparent color to determine its occurrence in the larval habitat.

**Molecular Taxonomy of Anopheles from Ecuador, using mitochondrial DNA (Cytochrome c Oxidase I) and Maximum Parsimony optimization**

La identificación de especies de Anopheles es compleja debido a la presencia de varios complejos de especies o especies cripticas cuyos ejemplares son de difícil distinción morfológica. Se corroboró o se corrigió la identificación de especies de Anopheles spp. capturadas en Ecuador, utilizando 393 secuencias de ADN mitocondrial, Citocromo Oxidasa I (COI) de 36 especies de Anofelinos neotropicales depositadas en GenBank y mediante la construcción de árboles filogenéticos usando parsimonia máxima. Se analizaron las identificaciones moleculares de cinco especies de Anopheles mediante los criterios de monofília y topología del árbol, secuencias provenientes de la localidad tipo y la divergencia genética intra/inter especies. Las topologías de los árboles resultantes corroboran la identificación de secuencias/especies de Anopheles (Anopheles) pseudopunctipennis Theobald, An. (Ano.) eiseni Coquillett y An. (Nyssorhynchus) albimanus Wiedemann; se corrige la identificación molecular de An. (Nys.) rangeli Gabaldón, Cova-García y López (no oswaldoi) y permanece en duda la identificación correcta de las secuencias relacionadas el grupo Punctimacula, hasta tener disponibles un mayor número de secuencias COI de especies relacionadas. La matriz de ADN-COI de 241 secuencias/haplotiposx36 especies construida para estos análisis resultará de utilidad para la identificación molecular de especies de Anofelinos de Ecuador y del Neotrópico con base en la porción de 520 pb entre 2.272 a 2.792pb de COI.

The Anopheles species identification is complicated by the presence of several complexes of species and species whose specimens are difficult morphological distinction. We use 393 mitochondrial DNA sequences, Cytochrome Oxidase I (COI) of 36 Neotropical species of Anophelinae deposited in GenBank and by constructing phylogenetic trees using maximum parsimony the objective was to corroborate or correct the molecular identification of five sequences/species of Anopheles collected in Ecuador and also availables in Genbank. We identified the taxonomic units, based on monophyly, phylogenetic species definition, tree topology, ocurrence of sequences from the type locality and genetic intra/inter divergence of clades. The topologies of the resulting trees corroborate the identification of sequences of Anopheles (Anopheles) pseudopunctipennis Theobald, An. (Ano.) eiseni Coquillett y An. (Nyssorhynchus) albimanus Wiedemann, while the molecular identification of An. (Nys.) rangeli Gabaldón, Cova-García y López (not oswaldoi) is corrected and remains in doubt the correct identification of related sequences for sequences belonging to Punctimacula group, until have available a greater number of COI sequences from related species. However according to the criteria of type locality, these are not punctimacula in sensu stricto. Finally, the matrix of alignment DNA-COI haplotypes sequences of 241x36 species built for these analyzes will be useful for molecular identification of Anophelinae species from Ecuador and the Neotropics based on the portion of 520 bp COI (between 2,272- 2,792 bp).

Educational intervention to modify knowledge, attitudes and practices about malaria in Ye´kwana schools

En zonas endémicas y remotas con población indígena vulnerable, es necesario aplicar medidas que contribuyan a contrarrestar el aumento de la malaria, adicionales al diagnóstico temprano, tratamiento y control vectorial. Se evalúa el cambio en niveles de conocimiento, actitudes y prácticas (CAP) en relación a la prevención y control de la malaria en una población escolar indígena de nivel primario, luego de la aplicación de un proyecto pedagógico de aula. Se realizó una evaluación cuantitativa, siguiendo un diseño cuasi-experimental, tipo preintervención y postintervención de carácter exploratorio, con población escolar de 3er y 4to grado,en cinco comunidades del pueblo Ye´kwana de la cuenca del río Caura (Estado Bolívar, Venezuela). Docentes interculturales bilingües, previo consentimiento informado, realizaron la intervención educativa y evaluaron resultados con el uso de un cuestionario sobre conocimientos, actitudes y prácticas traducido al Ye´kwana. Se analizaron los datos de la intervención mediante prueba de rangos con signo de Wilcoxon para datos pareados (prueba de dos colas), antes de la intervención (T1), al finalizar la misma (T2) y un tiempo después de la intervención (T3=45-60 días). En el intervalo T1-T3 se registraron cambios positivos y mejoras significativas (P<0,05) en todas las preguntas de conocimiento, y en el área de actitud hubo cambios no significativos. En el área de práctica para el control de la malaria, las respuestas registradas fueron mixtas. Los resultados indican que el proyecto pedagógico de aula evaluado puede ser muy útil en la prevención y control de la malaria, desde las escuelas comunitarias indígenas.

In remote areas with endemic and vulnerable indigenous population, it is necessary to implement measures that help to offset the increase of malaria, in addition to theearly diagnosis, treatment and vector control. Here, we evaluate a classroom project to change levels of knowledge, attitudes and practices (KAP) in relation to the prevention and control of malaria in amerindian school population of primary level. We carried out a quantitative assessment, under a quasi-experimental before and after design, with children from 3rd and 4th grades in five Ye'kwana communities inthe Caura River Basin (Bolivar State, Venezuela). According to previously informed community consent, intercultural bilingual teachers performed and evaluated results of the educational intervention using a questionnaire on knowledge, attitudes and practices translated into Ye'kwana language. Intervention data were analyzed by Wilcoxon signed pairedtests. We compared differences between before intervention (T1), immediately after (T2), and also some time afterthe intervention (T3 = 45-60 days).In the T1-T3 interval significant improvements (P<0.05) were recorded in all questions of knowledge and a positive, non-significant changes in all attitude questions. Changes in practices for malaria prevention were mixed.The results show thepotentialforthe classroom-teaching project tested toassist in the prevention and control of malaria at indigenous community schools.

**Vector competence persistance of Venezuelan Aedes albopictus for an Asian dengue-2 strain**

En Venezuela, existen poblaciones de Aedes aegypti (Ae. aegypti) de diferente origen geográfico y estructura genética que difieren en la competencia vectorial para el virus dengue. Debido a que, recientemente, se reportó la presencia de Aedes albopictus (Ae. albopictus), es importante también conocer la competencia vectorial de esta especie para prever el riesgo epidemiológico el cual conlleva a su propagación. Se determinó la persistencia en la competencia vectorial de Ae. albopictus de Maracay, Venezuela a una cepa asiática dengue 2. Las especies de mosquitos Ae. albopictus y Ae. aegypti fueron alimentadas con una suspensión sangre-virus dengue 2 y luego de 20 días post-exposición viral se determinó la presencia del virus por el ensayo de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) en las diferentes partes de los insectos: abdomen (infección), patas/alas (diseminación) y cabeza (transmisión). Los resultados muestran que la cepa Ae. aegypti es más susceptible a la infección del abdomen (60 %) que la cepa de Ae. albopictus (37,5%); sin embargo, sólo en Ae. albopictus se encontró el virus presente en las patas/alas (100%) y cabezas (33%). La cepa de Ae. albopictus estudiada podría ser más competente para la transmisión del virus dengue asiático que la de Ae. aegypti. Este hallazgo es de gran importancia epidemiológica, ya que se demuestra que este vector aún no estando en su continente de origen, puede seguir siendo un vector eficiente y con el tiempo adecuarse a las cepas virales propias.

In Venezuela, there are populations of Aedes aegypti (Ae. aegypti) with different geographic origins and genetic structure that differ in vector competence for dengue virus. Since recently, the presence of Aedes albopictus (Ae. albopictus) was reported, it is also important to know the vector competence of this species to predict the epidemiological risk which would bring its spread. The objective was to determine the vector competence persistance of Ae. albopictus from Maracay, Venezuela for an Asian dengue-2 strain. The two species of mosquitoes were fed with a blood-dengue 2 virus suspension and after 20 days post-exposure to virus, the presence of the virus was determined by the polymerase chain reaction assay in different parts of the insect: abdomen (infection), legs/wings (spread) and head (transmission).The results show that the strain Ae. aegypti is more susceptible to infection in the abdomen (60 %) that the strain of Ae. albopictus (37.5%); however, only in Ae. albopictus this virus was found in the legs /wings (100%) and heads (33%). The studied strain of Ae. albopictus may be more competent vector in the transmission of the dengue 2 virus than Ae. aegypti. This finding is of great epidemiological importance as this shows that even this mosquito not being in its continent of origin, it can still be an efficient vector and eventually become adapted to the native viral strains.

**Status of resistance to organo-synthetic insecticides by an Aedes aegypti strain from Coro, Falcon state, Venezuela**

Aedes aegypti es una de las especies más estudiadas en salud pública por ser vector primario en el ser humano del virus dengue, fiebre amarilla, chikungunya y zika. Se evaluó la respuesta a los insecticidas organofosforados malatión, fenitrotión, pirimifos-metil al carbamato propoxur y al piretroide lambdacialotrina en una cepa de campo denominada Coro, conformada por un pool de material (inmaduro) colectado en barriadas con alta casuística de dengue ubicadas en municipio Miranda, estado Falcón, Venezuela; en comparación con la cepa susceptible Rockefeller. Se realizaron los bioensayos en botellas tratadas con insecticidas, según el método del CDC e igualmente se identificaron los mecanismos de resistencia in vitro a través de pruebas bioquímicas. La cepa evaluada resultó resistente a malatión (45 min), fenitrotión (75 min) pirimifos-metil (75 min) con respecto a la cepa susceptible con 30, 45 y 45 min.respectivamente, con porcentajes de mortalidad en el tiempo umbral de 89,2% malatión; 55,7% fenitrotión; 56,6%, pirimifos-metil. Se encontró susceptibilidad al carbamato propoxur y al piretroide lambdacialotrina. En cuanto a las pruebas bioquímicas se encontraron valores elevados para esterasas alfa (α) y beta (β) con diferencias estadísticamente significativas (P<0,05) al comparar con la cepa susceptible. La acetilcolinesterasa inhibida (Achei) a pesar de encontrar diferencias significativas con la cepa Rockefeller los valores están por debajo de la misma. La resistencia de la cepa Coro a los insecticidas organofosforados parece asociarse con el incremento de las esterasas alfa (α) y beta (β). Los resultados obtenidos representan un aporte valioso para monitorear la resistencia de Ae. aegypti a nivel local dentro de un programa de manejo integrado de vectores.

Aedes aegypti is one of the most studied species in public health as the primary vector in humans the dengue, chicunguya, zyca virus and yellow fever. Response to organophosphorus insecticides malathion, fenitrothion, methyl-pirimiphos and carbamate propoxur was evaluated and the pyrethroid lambda-field strain called Coro, made up of a pool of material (immature) collected in neighborhoods with high casuistry of dengue Coro located in Miranda municipality, Falcón state, Venezuela; compared with the susceptible Rockfeller. Bioassays in insecticide-treated bottles were performed according to the method of the CDC and also the mechanisms of resistance in vitro were identified by biochemical tests. The resistant strain was evaluated to malathion (45 min), fenitrothion (75 min) methyl-pirimiphos (75 min) compared to the susceptible strain with 30, 45 and 45 min respectively, with mortality rates of 89 time threshold, 2% malathion, fenitrothion 55.7%, 56.6%, pirimiphos-methyl. Susceptibility to propoxur carbamate and pyrethroid lambda was found. As for the high values for biochemical tests esterases alpha (α) and beta (β) with statistically significant differences (P< 0.05) compared with the susceptible strain were found. Inhibited aceltilcholinesterase (Achei) despite significant differences with the Rockefeller strain values are below the same acetylcholinesterase. Falcon resistance to organophosphate insecticides strain appears to be associated with increased alpha esterases (α) and beta (β). The results represent a valuable contribution to monitor the resistance of Ae. aegypti locally within a program of integrated vector management.

**Isolation of intestinal parasites from American cockroach (Periplaneta americana) in Coro, Falcon state, Venezuela**

La cucaracha americana (Periplaneta americana)(Insecta: Dyctioptera, Blattodea) posee una amplia distribución y adaptación a los ambientes humanos, y representa un problema de salud pública en áreas con un manejo sanitario inadecuado. El objetivo del presente estudio fue identificarlos taxones enteroparásitos en tegumento y tracto gastro intestinal de ninfas y adultos de P. americana. Entre abril y noviembre de 2014 fueron recolectados 149 ejemplares (102 imagos y 47 ninfas), en tres sitios de la ciudad de Coro, estado Falcón, Venezuela: mercado municipal (N=32), recinto universitario (N= 62) y Hospital Universitario Alfredo Van Grieken (HUAVG) (N=55).El análisis parasitológico reveló la presencia en el 97,99% (146/149) de las cucarachas muestreadas de 13 taxa entero-parasitarias, de las cuales siete son consideradas de interés sanitario (Blastocystis spp., Leptomonas spp., Cyclospora spp., Cystoisospora spp., Lophomonas blattarum, Ascaris spp. y Enterobius vermicularis). Las taxa más prevalentes fueron Blastocystis spp. (82,6%: 123/149) y Leptomonas spp. (70,5%: 105/149). Se discute las implicaciones de estos hallazgos en el contexto de la salud pública.

The American cockroach (Periplaneta americana) (Insecta: Dyctioptera, Blattodea) is a specie with a cosmopolitan distribution and well adapted to human environments. Cockroaches constitute a health hazard in areas with poor sanitary facilities. The aim of this study was to identify parasitic enteric taxa on tegument and intestinal tract of nymphs and adults of P. americana. Between April and November 2014, 149 specimens (102 adults and 47 nymphs) were collected in 3 municipal environments:an out market (N= 32), a university (N=62) and a hospital (HUAVG) (N=55), from Coro city, Falcon state, Venezuela.Parasitological analysis revealed the presence of 13 parasitic taxa in 97,99% (146/149) of cockroaches; seven of these parasites are considered to be for sanitary importance (Blastocystis spp., Leptomonas spp., Cyclospora spp., Cystoisospora spp., Lophomonas blattarum, Ascaris spp. and Enterobius vermicularis). Blastocystis spp. (82,6%: 123/149) and Leptomonas spp. (70,5%: 105/149) were the most prevalent taxa.The implications of these findings for public health were discussed.

Preliminary survey of anophelines (Diptera: Culicidae) in an endemic area of malaria (Atures and Autana municipalities), Amazonas State, Venezuela

Este trabajo reporta la riqueza de especies de anofelinos (Diptera: Culicidae) encontrada en los principales hábitats acuáticos (lóticos y lénticos) del noroeste del estado Amazonas, una de las principales áreas endémicas de malaria actualmente en Venezuela. Un total de 10 especies del género Anopheles Meigen fueron registradas. El subgénero Nyssorhynchus Blanchard dominó la fauna de anofelinos con seis especies, seguido por los subgéneros Anopheles Meigen y Stethomyia Theobald, con dos especies cada uno. Entre las especies encontradas destacan An. (Nyssorhynchus) darlingi Root vector principal de la malaria en la región y An. (Nyssorhynchus) albitarsis Lynch Arribalzaga sensu lato, complejo de especies dentro del cual se encuentra An. marajoara (Galvão & Damasceno), especie incriminada como vector de malaria en el estado Bolívar. Este estudio contribuye con la actualización del inventario de especies de la fauna de mosquitos en la región del Escudo Guayanés venezolano.

We report the species richness of anophelines (Diptera: Culicidae) occurring in the main aquatic habitats (lotic and lentic) of northwestern Amazonas, currently, one of the main endemic areas for malaria in Venezuela. Overall, 10 species of the genus Anopheles Meigen were identified. The dominant subgenus Nyssorhynchus Blanchard was represented by six species, followed by Anopheles Meigen and Stethomyia Theobald, both having two species. Among the species collected, we highlight An. (Nyssorhynchus) darlingi Root and An. (Nyssorhynchus) albitarsis Lynch Arribalzaga sensu lato. The former is the main vector of Plasmodium in the region and the second one has been incriminated as a malaria vector in Bolívar State. This study extends the current list of anopheline species of the Atures municipality and provides a more complete picture of the distribution of the mosquitoes of the Venezuelan Guiana Shield region.

Centipede (Chilopoda) bite in humans: a report of four cases in Mexico

Hasta la fecha no existen registros disponibles sobre casos de mordeduras y envenenamiento de ciempiés (Chilopoda) en México. Sin embargo, algunas de las especies principalmente del Orden Scolopendromorpha suelen encontrarse en zonas urbanas y ser de gran tamaño (longitud total >10 cm), lo cual puede ser de riesgo potencial para la salud de los pobladores. En este trabajo se presentan cuatro casos de mordeduras causadas por escolopendromorfos (Género Scolopendra) en diferentes lugares de la República Mexicana. El grado de envenenamiento, dependiendo del caso, provocó desde dolores intensos hasta el presunto fallecimiento de un niño. Por otra parte, se documenta por primera vez el uso de antiveneno para alacrán en el tratamiento de mordedura de ciempiés; resultado que puede estimular el desarrollo de investigaciones sobre toxinas presentes tanto en el veneno de alacrán como de ciempiés, y el uso de tratamientos similares. Aunque las mordeduras y envenenamientos de ciempiés en México son poco frecuentes, es importante establecer un protocolo médico estandarizado en los instituciones de salud pública para que puedan ser atendidos con éxito.

Currently, there is a notable paucity of information on bites and poisonings by centipede (Chilopoda) in Mexico. Some species of the Order Scolopendromorpha shows large body sizes (total length >10 cm) and commonly occurs in urban areas; which could be a latent risk for the residents. Here, we reported four cases of centipede bite (Scolopendra genus) in different regions of Mexico. The intoxication level varied in each case, from severe pains to presumed death by poisoning in a child. On the other hand, for first time, it is reported the use of scorpion antivenom in treating centipede bite; which could stimulate a new window research in relation to the toxins both scorpions and centipedes, and the application of similar treatments in accident cases. Although centipede bites and poisonings in Mexico are rare, it is important to establish a standardized medical protocol in public health institutions.