Resumo

ROMERO, Freddy. Solubilización y caracterización de la ATPasa de Na+ insensible a ouabaina a partir de membranas laterobasales de células de intestino delgado. Invest. clín [online]. 2009, vol.50, n.3, pp.303-314. ISSN 0535-5133.

Ha sido propuesto que el transporte intestinal del sodio es mediado por dos mecanismos: la ATPasa de Na⁺/K⁺, inhibida por ouabaina y la ATPasa de Na⁺ la cual es insensible a la ouabaina y es inhibida por la furosemida. Con la finalidad de determinar las condiciones óptimas para solubilizar la ATPasa de Na⁺ del enterocito, membranas plasmáticas laterobasales fueron solubilizadas utilizando diferentes detergentes, octyl glucoside, Tween 20, C₁₂E₈ y C₁₂E₉. La solubilización de la ATPasa de Na⁺ y de la ATPasa de Na⁺/K⁺ fue óptima después de mezclar 1 mg de membranas con 1,5 mg de C₁₂E₉. El C₁₂E₉ solubilizó más del 60% de las proteinas de membranas y las ATPasas de Na⁺ y Na⁺/K⁺ fueron recuperadas en un 80% en la fracción soluble. Adicionalmente, cuando glicerol al 25 % y ATP 2 mM fueron utilizados, la ATPasa de Na⁺ fue estable despues de 3 dias. La ATPasa de Na⁺ soluble demostró las siguientes características cinéticas: 1) es específicamente estimulada por sales de Na⁺; 2) K_0.5 para Na⁺= 4.62 ± 0.1 mM; 3) es estimulada por todas las sales de Na⁺, 4) pH óptimo= 7.0; 5) es inhibida por furosemida (IC₅₀= 0,52 ± 0,10 nm). Las características cinéticas de la enzima solubilizada fueron similares a las descritas para la forma de la enzima unida a la membrana. Este trabajo demuestra la solubilización y caracterización de la ATPasa Na⁺ a partir de membranas laterobasales del enterocito usando C₁₂E₉.

Palavras-chave : ATPasa de Na⁺; polyoxyethylene 9-lauryl ether (C₁₂E₉); segunda bomba de sodio; célula epitelial; intestino delgado; furosemida.

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