Resumo

PEREZ, I et al. Identificación molecular de micobacterias del complejo tuberculoso: Estandarización de un método de pcr basado en secuencias conservadas de la región espaciadora 16s-23s del operón de adn ribosomal. Rev. Soc. Ven. Microbiol. [online]. 2003, vol.23, n.1, pp.30-37. ISSN 1315-2556.

    Con la finalidad de mejorar el diagnóstico de la tuberculosis, y basados en el estudio de la secuencia de la región espaciadora 16S-23S del operón de ADN ribosomal de treinta especies de micobacterias, se diseñó un método de identificación de micobacterias pertenecientes al complejo tuberculoso utilizando la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) en combinación con enzimas de restricción. Para ello se diseñaron cuatro primers (TTS, SS2, S1A, S1B) y se emplearon las enzimas NheI y MscI. Se estandarizó la técnica de PCR y digestión enzimática, utilizando seis aislados micobacterianos (M. tuberculosis, M. kansasii, M. fortuitum, M. smegmatis, M. marinum y M. terrae), lográndose la amplificación con los primers diseñados y digestión enzimática para cada una de las micobacterias.     Podemos concluir que la PCR, en combinación con el uso de enzimas de restricción, constituye un método rápido, sencillo, sensible y específico para la identificación de especies micobacterianas pertenecientes al complejo tuberculoso (M. tuberculosis, M. africanum y M. bovis). Sin embargo, es importante tener en cuenta algunas recomendaciones que reducirán los problemas de especificidad y falsos positivos obtenidos durante el estudio. Una de ellas sería la utilización del fragmento TTS-SS2 en el PCR sólo como control de la presencia e integridad del ADN bacteriano, y el PCR en combinación con la digestión con NheI solamente en el fragmento TTS-S1B.

Palavras-chave : Micobacterias; tuberculosis; ADN; Mycobacterium tuberculosis.