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Revista de la Facultad de Medicina
versão impressa ISSN 0798-0469
RFM v.25 n.1 Caracas jan. 2002
R Pedroza1, W Cuotto2, O Velázquez3, L Torres2 y V Rodríguez Lemoine3.
RESUMEN:
Acinetobacter baumannii es un importante agente etiológico asociado a infecciones nosocomiales. Los patrones de resistencia a los principales agentes antimicrobianos y el perfil plasmídico fueron analizados en 34 cepas nosocomiales provenientes de tres hospitales del área metropolitana. La mayoría de los aislamientos (50%) provienen del tracto respiratorio y de la Unidad de Terapia Intensiva. Los porcentajes de resistencia obtenidos revelan la presencia de patrones complejos de resistencia múltiple incluso a los antimicrobianos imipenen, meropenen y b lactamicos, los cuales son de uso frecuente en el tratamiento de las infecciones causadas por este germen. El perfil plasmídico obtenido sugiere una alta variabilidad. Un plásmido > 23 Kb fue asociado con la resistencia en algunos aislamientos. El análisis del DNA plasmídico es de gran utilidad en la tipificación epidemiológica de las cepas de A. baumannii y puede servir como un sistema complementario a los métodos epidemiológicos tradicionales.
Palabras Clave: Acinetobacter baumannii, Resistencia, Plásmido.
ABSTRACT:
Acinetobacter baumannii is an important etiological agent causing nosocomial infections. Antibiotics resistance patterns and plasmid profiles analysis of selected 34 nosocomial strains isolated from three hospitals were determined. The majority of isolates (50%) were recovered from respiratory tract and intensive care unit. High level of resistance for different kind of antimicrobials has been observed, incluindg imipenem, meropenen and beta-lactam antibiotics. Plasmid profiles suggested a high variability. A plasmid < 23 kb was associated with the resistance in some isolates. Plasmid DNA analysis proved to be useful in epidemiological typing of A baumannii strains and may serve as a complementary typing system to traditional epidemiological methods.
Key Words: Acinetobacter baumannii, Resistant, Plasmid.
INTRODUCCIÓN
El uso indiscriminado de los antibióticos en centros hospitalarios ha tenido un efecto dramático tanto en la selección como en el aumento de las poblaciones bacterianas resistentes a estos agentes, causando graves problemas en el control de las infecciones intrahospitalarias. Esta resistencia puede ser de naturaleza intrínseca, o estar mediada por plásmidos, en cuyo caso los determinantes de resistencia pueden ser transferidos horizontalmente a poblaciones bacterianas naturalmente sensibles.
Acinetobacter baumannii es un bacilo Gram negativo, frecuentemente asociado a infecciones nosocomiales. Es considerado como el segundo germen más frecuentemente aislado en pacientes con pneumonía(1), y el séptimo causante de bacteremia e infecciones en el tracto urogenital y pulmón. Tiene una alta capacidad para acumular determinantes de resistencia a una amplia gama de agentes antimicrobianos, convirtiéndolo en un agente difícil de controlar(2).
En este trabajo se presenta un estudio comparativo sobre la multiresistencia a agentes antimicrobianos encontrada en aislados de A. baumannii provenientes de tres hospitales de la Región Capital, y se examina su contenido plasmídico mediante electroforesis en geles de agarosa.
MATERIALES Y MÉTODOS
Para este estudio fueron seleccionados 34 aislados de A. baumannii provenientes de pacientes hospitalizados durante el período octubre de 1999 y marzo de 2000. Los aislados provienen: 13 del Hospital Universitario de Caracas (HUC), 11 del Hospital Domingo Luciani (HDL) y 10 del Hospital Vargas de Caracas (HVC).
Los aislamientos fueron identificados en los laboratorios de Bacteriología de los respectivos hospitales. La identificación fue confirmada en el Centro Venezolano de Colecciones de Microorganismos (CVCM), empleando el sistema semiautomático ATBplus (Biomerux). La resistencia y susceptibilidad a los antibióticos se realizó por el método de difusión en disco(3,4). Las cepas de control fueron E. coli CVCM 788 (derivada de ATCC 25922) y S. aureus CVCM 786 (derivada de ATCC 25923). Los experimentos de conjugación se realizaron empleando cepas de P. aeruginosa (PU21-PaO38) CVCM 234 y E. coli K12 CVCM 401 como receptoras(5). El aislamiento del DNA plasmídico se realizó mediante el método de la lísis alcalína(6).
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Las infecciones por A. baumannii se ven favorecidas por el uso de dispositivos como sondas y catéteres, a los cuales el germen se adhiere provocando la colonización de la zona(7). El uso indiscriminado de antibióticos para el control de procesos infectivos afecta el conjunto de la flora microbiana minimizando el fenómeno de interferencia, favoreciendo la selección de bacterias resistentes a los agentes antimicrobianos de uso extensivo. Es frecuente encontrar que las infecciones causadas por bacterias resistentes sean de mayor gravedad que aquellas causadas por cepas sensibles.
En este trabajo se analizó la incidencia de A. baumannii en diferentes servicios de tres hospitales de la región Capital. El gráfico 1 muestra la procedencia de A. baumannii de acuerdo al servicio (Terapia Intensiva [UTI], Neumonología [N], Cirugía [C], Pediatría [P], Medicina [M], Observación [O] y Recuperación [R]). La mayoría de los aislados proviene de UTI. En el HUC el mayor porcentaje de aislamientos procede de la UTI (54%), seguido de los servicios de Medicina I y II (15%), Neurología, Cirugía III, Observación de adultos (8% c/u). Mientras que los del HDL proceden fundamentalmente de los servicios de UTI y C (36%), P, N y R (9%). En el HVC la muestras provenientes de la UTI fueron las más frecuentes (40%) seguido de los servicios de Cirugía y Medicina (30%). Cabe destacar que los aislamientos de los servicios de Medicina y Cirugía podrían tener como fuente primaria las unidades UTI, ya que muchos de estos pacientes estuvieron previamente en estas unidades o en quirófano.
Los aislados de A. baumannii fueron agrupados de acuerdo a su procedencia clínica. El gráfico 2, muestra el número y porcentajes para cada una de las fuentes de aislamiento (secreción traqueal, abdominal, bronquial, herida, esputo, sangre y punta de catéter). En los hospitales HUC y HDL la presencia de A. baumannii fue más frecuente en las secreciones traquéales, seguido de secreción de herida, abdominal, esputo y punta de catéter.
Gráfico 1: Distribución de A. baumannii según la fuente

Gráfico 2: Distribución de A. baumannii según los diferentes servicios
Resistencia múltiple a antimicrobianos
Los porcentajes de resistencia obtenidos de A. baumannii a 19 agentes antimicrobianos revelan la presencia de patrones complejos de resistencia múltiple. Para determinar el espectro de resistencia se incluyeron antibióticos que no son de elección en terapéutica clínica. Más del 80% de las cepas presentan una elevada resistencia a la mayoría de los antimicrobianos utilizados, incluso a los antimicrobianos Ceftrioazona, Cefotaxima, Ampicilina/Sulbactam y Amoxacilina/Acido Clavulánico, los cuales son de uso frecuente en el tratamiento de las infecciones causadas por este germen. Se observó resistencia hasta de 100%, frente a fármacos como Amoxacilina y Cefotaxima. Llama la atención en el HDL el elevado porcentaje de resistencia a los antibióticos: Imepenam (45%) y Meropenem (44%), de reciente aplicación en nuestro medio. En los hospitales HUC y HVC la resistencia a estos dos agentes fue considerablemente inferior (23% y 20% respectivamente).
Presencia de plásmidos
La resistencia múltiple a antibióticos es un fenómeno frecuentemente asociado a la presencia de plásmidos transmisibles. Con el objeto de establecer una correlación entre los patrones de resistencia encontrados en la mayoría de los aislados de A. baumannii se examinó la presencia de plásmidos entre los aislados de los hospitales HUC, HDL y HVC. El análisis de extractos de DNA mediante electroforesis en geles de agarosa reveló la presencia de plásmidos de alto peso molecular. En todas las cepas se observó una banda común de aproximadamente 23 Kb y otras bandas de 9, 6, 4 y 2 Kb. Se encontró un patrón de bandas similar entre los aislados provenientes de los hospitales HDL y HVC. Esto sugiere la presencia de un plásmido de origen común (23 Kb) en dos de los hospitales bajo estudio. Sin embargo, para establecer las relaciones de parentesco es necesario hacer estudios de incompatibilidad y de los patrones de restricción enzimática.
Los resultados presentados sugieren que la presión ejercida por el uso de antibióticos en áreas restringidas como las Unidades de Terapia Intensivas, ha favorecido la diseminación y prevalencia de plásmidos que han ido acumulando determinantes de resistencia a una amplia variedad de antibióticos. En estos aislados se demostró la presencia de plásmidos, de diferentes tamaños moleculares a los cuales pudieran estar asociados los determinantes de resistencia identificados mediante pruebas de fenotipos. La presencia de plásmidos de tamaños moleculares similares en aislados provenientes de diferentes centros hospitalarios sugiere un alto grado de diseminación de la resistencia mediada por plásmidos transmisibles. La identificación y caracterización molecular de los aislados de A. baumannii y los plásmidos que contienen, permitirá establecer las relaciones de parentesco y origen de la resistencia.
AGRADECIMIENTOS
Al personal de los laboratorios de Bacteriología del HUC, HDL y HVC. CVCM. Este Proyecto fue financiado por CDCH y CONICIT Proyecto S1 96.001321.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Bergogne-Bérézin E, Towner KJ. Acinetobacter spp. as nosocomial pathogens: microbiological, clinical and epidemiological features. Clinical Microbiology Review 1996; 9: 148-165. [ Links ]
2. Towner KJ. Clinical importance and antibiotic resistance of Acinetobacter spp. Journal of Medical Microbiology. 1997; 46: 721-746. [ Links ]
3. Bauer AW, Kirby WMM, Sherris JC and Turck M. Antibiotics susceptibility testing by a standardized single disk method. Am. J. Clin. Pathol. 1966; 45: 439-496. [ Links ]
4. National Committee for Clinical Laboratory Standards. Performance Standard for Antimicrobial Disk. Eighth Informational Supplement. Villanova. Pa. 1998; 18. [ Links ]
5. Rodríguez Lemoine VA. simple method for detection of conjugative plasmids of the incompatibility group H2. Microbios Letters. 1982; 21: 35-45. [ Links ]
6. Birboim HC and Doly A. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant plasmid DNA. Nucleic Acid Res. 1979; 7: 1511-1523. [ Links ]
7. Seifert H, Baginski R, Schulze A and Pulverer G. Antimicrobial susceptibility of Acinetobacter species. Antimicrobial Agents Chemoder 1993; 37: 750-753. [ Links ]













