Efficacy and residual activity of insect growth regulator pyriproxyfen on larvae of Aedes aegypti (Diptera: Culicidae) under laboratory conditions

SUMMARY

Pyriproxyfen  is  a  synthetic  juvenile  hormone analogue and it has been widely used in mosquito control. This re search paper describes experiments or trials carried out under laboratory conditions with a granular formulation of  pyriproxyfen  (Sumilarv  -G  0.5%  in  granules),  using  IV  instars  larvae  of  Aedes  aegypti.  This  is  a  granular formulation of pyriproxyfen with 0.5% of active ingredient. The  efficacy  and residual  activity  of  pyriproxyfen  were evaluated on larvae and pupae of Ae. aegypti using three final  concentrations:  0.002,  0.01  and  0.05  ppm;  at  (initial day = week 0) and at 1, 2, 4, 6 and 8 weeks after treatment (post-treatment).  According  to  the  results,  the  efficacy  of pyriproxyfen was very satisfactory during 8 weeks (60 days) post-treatment,  using  0.05  ppm  of  pyriproxyfen  with  77% (% IE). It was observed that mortality in the pupa stage was higher  than  larvae  mortality  for  all  three  concentrations. However, the percentage of IE in treated water diminished after the initial week (week 0) to 56.7 % (0.002 ppm) and after first week to 98.8 % (0.01ppm). The other aim of the study was to evaluate the efficacy of pyriproxyfen at 0.05 ppm, in relation to the larval density of Aedes aegypti under laboratory conditions. Five larval densities: 25, 50, 75, 100 and 125 larvae, were evaluated at 0.05 ppm. The statistical analysis not revealed significant differences between these densities,  and  did  not  reveal  a  relationship  between  the mosquito larval density and pupae mortality of Ae. aegypti. Whereby,  it  is  concluded  that  by  progressively increasing the  number  of  larvae  treated,  mortality  of  pupae  or  adult emergence inhibition do not decrease, therefore it does not adversely affect the product performance.
 
Key  words:  Insect  growth  regulators,  juvenile  hormone analogues,  pyriproxyfen,  biochemical  control,  Aedes aegypti, larvae, pupae, vectors, dengue.

Recibido el 30/03/2012  Aceptado el 09/03/2013

INTRODUCCIÓN

    Dentro  del  grupo  de  los  insecticidas bioquímicos  se  encuentran  los  reguladores  del crecimiento  de  insectos  (IGRs:  Insect  growth regulators).  Estas  sustancias  son  clasificadas  como: hormonas mímicas o análogas sintéticos de la hormona juvenil, inhibidores del desarrollo, inhibidores de la muda e inhibidores de la síntesis de quitina. La acción fundamental  de  los  reguladores  de  crecimiento,  se basa  en  la  interrupción  del  normal  crecimiento  y desarrollo, inhibiendo la emergencia de adultos y/o afectando la normal reproducción del insecto adulto (Berti & Zimmerman, 1998). Estos son considerados compuestos biológicamente específicos, no tóxicos al hombre o a los mamíferos, biodegradables y menos propensos al desarrollo de resistencia (Mulla et al., 1974, 1985, 1986; Aguilera et al., 2001).

  El  metopreno  fue  el  primer  regulador  de crecimiento  registrado  comercialmente  para  el control  de  mosquitos,  es  análogo  sintético  de  la hormona  juvenil  y  es  muy  usado  en  EE.UU.  para el control de vectores (Berti & Zimmerman, 1998). La  actividad  biológica  y  química  de  la  hormona juvenil y sus análogos fue ampliamente discutida por Menn & Beroza (1972). En los insectos, durante su metamorfosis, las mudas tienen lugar de un estadio larval al otro, siempre en presencia de altos valores de la hormona juvenil y la ecdisona (Bower, 1971). Un  exceso  de  ecdisona  causa  la  muda.  En  cambio, valores muy altos de la hormona juvenil mantienen al  mosquito  en  su  estado  normal  (Bower,  1971). Cuando  el  insecto  alcanza  el  punto  crítico  de  su metamorfosis para pasar de larva a la fase pupa, los valores  de  la  hormona  juvenil  bajan  e  igualmente cuando  se  produce  la  ultima  muda  y  tiene  lugar  la emergencia  del  adulto  (Arias,  1973;  Bower,  1971).

En muchos insectos el desarrollo del huevo también está bajo la influencia de la hormona juvenil. Existen evidencias de que esta hormona estimula el proceso de  vitelo-génesis  o  síntesis  del  vitelo  (Chen  et  al., 1976; Engelmann, 1970). En el mosquito adulto, el desa rrollo de los huevos se produce cuando la hembra realiza  su  comida  sanguínea,  esta  alimentación estimula  la  liberación  de  una  hormona  del  cerebro, llamada hormona neuro-secretora del desarrollo del huevo (Lea, 1972; Engelmann, 1970). Esta hormona estimula  al  ovario  para  liberar  la  ecdisona,  la  cual actúa sobre el cuerpo graso causando la síntesis del vitelo  o  vitelo-génesis  (Hagedorn  &  Fallon,  1973; Lea, 1972).

La  emergencia  del  adulto  de  Anopheles stephensi, fue inhibida por efecto del metopreno y de extractos  de  la  hormona  juvenil  de  áfidos  (Dash  & Ranjit, 1992). Asimismo, los adultos sobrevivientes que lograron emerger después de exponer las larvas de  la  especie  a  la  concentración  letal  50  (CL50%) del  producto  presentaron  una  clara  reducción  de su  fecundidad  y  fertilidad  (Dash  &  Ranjit,  1992). Por  otro  lado,  Arias  y  Mulla  (1975)  comprobaron que  las  hembras  resultantes  de  aquellas  larvas  de Culex tarsalis tratadas con metopreno a la dosis de 0,4  ppb,  presentaron  una  reducción  de  43%  en  la producción de huevos en comparación con las que no fueron  tratadas;  asimismo,  observaron  la  presencia de  malformaciones  y  anomalías  en  adultos  de  Cx. tarsalis  que  lograron  emerger  después  de  exponer las larvas a una concentración sub-letal del producto (Arias  &  Mulla,  1975).  En  Venezuela,  también con  una  concentración  sub-letal  del  producto,  se observó presencia de malformaciones en adultos de Anopheles albimanus y se comprobó que las hembras sobrevivientes  presentaron  una  clara  reducción  de su fertilidad (Berti & Navarro, 2008; Navarro et al.,2007).

  En  la  década  de  los  80,  fue  sintetizado  en Japón  el  regulador  de  crecimiento  Pyriproxifen,  el cual también es un análogo sintético de la hormona juvenil (Berti & Zimmerman, 1998); este actúa sobre la  fisiología  de  la  morfogénesis,  reproducción  y embriogénesis del mosquito. En Japón, su efecto fue evaluado en condiciones de campo sobre larvas del vector de malaria Anopheles farauti, con excelentes resultados (Susuki et al., 1989). En otro estudio de campo,  cinco  pozos  (charcos)  que  contenían  larvas de  Anopheles  punctimaculatus  fueron  tratados  con cuatro concentraciones de pyriproxyfen. El Pozo I y el II a 0,1 ppm; el Pozo III a 0,05 ppm; el Pozo IV a 0,02 ppm y el Pozo V a 0,01 ppm. La mortalidad ocurrió  principalmente  durante  la  fase  de  pupa  o durante la emergencia del adulto. La emergencia del adulto  (%  IE)  fue  inhibida  completamente  durante dos  meses  a  la  dosis  de  0,1  ppm;  durante  un  mes a la concentración de 0,05 ppm y por 20 días a las concentraciones de 0,02 ppm y 0,01 ppm (Okazawa et al. 1991). Pyriproxyfen es altamente activo contra gran variedad de insectos, incluyendo pulgas, moscas domésticas,  moscas  tse-tsé,  cucarachas  y  hormigas (Hirano  et  al.,  1998).  Estudios  con  pyriproxyfen realizados  bajo  condiciones  de  laboratorio,  han demostrado altos niveles de actividad residual contra Aedes aegypti (Estrada & Mulla, 1986). Este producto tiene  mayor  actividad  tóxica  que  metopreno,  el mismo fue mucho más tóxico que metopreno, cuando ambos  se  probaron  contra  larvas  y  pupas  de  Aedes albopictus, Ae. aegypti, Anopheles quadrimaculatus, Culex nigripalpus y Ochleretatus taeniorhynchus en Florida, EE.UU. (Nayar et al., 2002).

  En Venezuela, se realizaron estudios sobre la duración de la actividad tóxica de metopreno (Altosid-G, 1,5%)  sobre  An.  albimanus  W.  Esta  formulación presentó una corta actividad residual sobre pupas de An. albimanus. Al  aumentar  la  perma nencia  del  producto en el agua tratada (15, 30 y 60 días post-tratamiento) se afectó  negativamente  su  eficacia  (Berti y Navarro, 2008; Navarro et al., 2008). También en el país, Suárez (2008)  realizó  la  evaluación  de  la  actividad  residual de  pyriproxyfen  sobre  larvas  de  Aedes  aegypti  a  dos concentraciones, obteniéndose muy buenos resultados a  la  concentración  de  0,05  ppm,  con  porcentajes  de Inhibición de la Emergencia (% IE) mayores del 90% durante las cuatro primeras semanas y comprobándose la eficacia del producto durante 60 días (Suárez, 2008). Otros  autores,  (Oviedo  et  al.,  2007;  Suárez,  2008) observaron la presencia de malformaciones y anomalías en adultos de Ae. aegypti que lograron emerger después de que las larvas fueron expuestas a una concentración sub-letal de pyriproxyfen.

  En los últimos años, el uso indiscriminado de insecticidas a nivel mundial ha generado una fuerte presión de selección en las poblaciones de mosquitos, desarrollándose  poblaciones  con  individuos genéticamente  resistentes  a  compuestos  químicos. Ante esta situación, se presenta la alternativa del uso de  reguladores  de  crecimiento;  sobre  todo  debido a  la  disminución  de  la  susceptibilidad  al  abate (Temephos) y aparición de resistencia en poblaciones de Ae. aegypti de Brasil (Braga et al., 2004), Cuba (Rodríguez et al., 2006) y Venezuela; donde se refiere una población de Ae. aegypti resistente al temephos en Paramito, estado Trujillo (Álvarez et al., 2006). En consecuencia,  debemos  considerar  la  alternativa  de aplicar insecticidas bioquímicos como pyriproxifen, dentro de la estrategia de manejo integrado de este vector.  El  propósito  de  este  trabajo  fue  evaluar bajo condiciones de laboratorio la eficacia y acción residual  de  pyriproxyfen  (Formulación:  Sumilarv G-0,5%)  contra  Ae.  aegypti,  a  las  concentraciones de 0,002; 0,01 y 0,05 ppm del ingrediente activo, y durante  0,  1,  2,  4,  6  y  8  semanas  post-tratamiento; también se intenta determinar el efecto del aumento de la densidad larval sobre la eficacia del producto a la concentración de 0,05 ppm.

MATERIALES Y MÉTODOS

  En todos los bioensayos se utilizaron larvas del IV  instar temprano (entre 0-16  h  después de la muda),  las  cuales  se  obtuvieron  de  la  progenie  de hembras  provenientes  de  la  población  colonizada de Ae. aegypti. La población inicial de esta colonia proviene  de  hembras  y  larvas  capturadas  en  La Cooperativa,  Maracay;  colonia  que  fue  mantenida durante  cinco  años  en  el  Centro  de  Estudio  de Enfermedades  Endémicas  y  Salud  Ambiental  del IAE Dr. Arnoldo Gabaldon. En la cría de larvas y la preparación  de  todas  las  soluciones  se  utilizó  agua mineral de consumo humano embotellada en envases de plástico de 18 litros de capacidad. Las condiciones ambientales para la cría de larvas y para la realización de cada bioensayo fueron las siguientes: temperatura de 29 ± 4ºC; la humedad relativa de 80 ± 5% y el foto periodo de 12:12 hrs (luz: oscuridad).

  El  producto  utilizado  (Sumilarv  G-0,5%) es una formulación sólida y granulada con el 0,5 % de  ingrediente  activo  (Pyriproxyfen:  S-31183).  Se probaron  tres  concentraciones  (0,002;  0,01  y  0,05 ppm) usando larvas de IV estadio temprano de Ae. aegypti,  que  después  de  ser  expuestas  en  envases plásticos  a  las  respectivas  concentraciones  se colocaban en observación (de tres a cuatro días) en estos mismos envases, hasta alcanzar la fase de pupa y/o adulto. Para tal fin, se utilizaron envases plásticos circulares de 20 x 5 cm, donde se agregó 1000 mL por cada  envase  tratado  de  la  respectiva  concentración (0,002; 0,01 y 0,05 ppm.). Se calcularon los siguientes parámetros  para  cada  concentración:  porcentaje de  mortalidad  larval,  porcentaje  de  mortalidad  de pupas, porcentaje de pupas formadas, porcentaje de mortalidad total, porcentaje de emergencia de adultos y  porcentaje  de  inhibición  de  la  emergencia  de adultos (% IE). También en el grupo control, salvo el porcentaje de inhibición de la emergencia de adultos (% IE), el cual solo se puede calcular para las larvas expuestas a la respectiva concentración.

Obtención de las larvas experimentales

  Se colocaron machos y hembras provenientes de la colonia, dentro de cestos o jaulas de metal de 19 x 29 x 32 cm, se suministró un algodón empapado en miel de abeja diluida en agua como fuente de alimento. En estas jaulas se llevó a cabo el apareamiento de adultos de ambos sexos. Las jaulas están recubiertas casi  totalmente  de  tela  metálica,  salvo  en  la  parte superior, que cuenta con una malla fina de tul, donde se inmovilizó una paloma que se colocó con la parte dorsal  descubierta,  de  modo  que  se  permitiera  su contacto  a  través  del  tul  con  las  hembras  y  poder cumplir con su alimentación. Una vez alimentadas y apareadas, en el fondo de estas jaulas se colocaron pedazos  de  papel  de  filtro  humedecido  con  agua para  mantener  la  humedad  relativa  y  estimular  la ovoposición.  Después  se  esperaron  tres  días  para iniciar  el  retiro  y  conteo  de  huevos.  Cada  día  se extraía el papel de filtro con las posturas, se procedía al conteo de huevos y se sustituía este papel por uno limpio. Las larvas emergidas de estos huevos, fueron utilizadas  para  la  realización  de  los  respectivos bioensayos. Estas fueron alimentadas con la misma fórmula usada en la alimentación de larvas de An. albimanus y An. aquasalis (Berti & Navarro, 2008).

El  alimento  consistió  de  la  mezcla  de  Ictiosan ®  (alimento  para  peces,  55  %),  levadura  de  cerveza (15 %), avena (7,5 %), germen de trigo (7,5 %) e hígado de res deshidratado en polvo (15 %). El cual se suministraba cada día entre 8:00 y 8:30 hrs; para lo  cual  se  agregaban  20  mg  de  la  mezcla  en  cada envase con larvas, tanto en envases tratados como en los controles.

Preparación  de  las  soluciones  a  las  respectivas concentraciones

  Se  realizaron  diluciones  de  8  mg  de Pyriproxyfen  al  0,5%  en  20  litros  de  agua  mineral potable  para  obtener  la  concentración  de  0,002 ppm; 40 mg/20 litros para la concentración de 0,01 ppm y de 200 mg/20 litros para la concentración de 0,05  ppm.  Cada  una  de  estas  concentraciones  fue preparada  y  almacenada  en  pipotes  plásticos  de  25 litros  de  capacidad. Adicionalmente  se  dejaba  otro pipote, pero solo con agua mineral como control para cada ensayo.

Determinación de la residualidad de piriproxyfen a tres concentraciones
 
  Para  tal  fin,  se  realizaron  seis  ensayos sucesivos: el primer día (ensayo inicial = semana 0) y a 1, 2, 4, 6 y 8 semanas del tratamiento, es decir, que a 1, 2, 4, 6 y 8 semanas después del tratamiento inicial,  se  colocaron  nuevas  larvas,  tanto  en  los envases tratados como en los controles. Se utilizaron envases plásticos circulares de 20 x 5 cm, donde se agregó  1000  ml  de  la  respectiva  concentración  en cada envase por cada repetición.

  El número de repeticiones por concentración fue  de  cuatro.  En  cada  ensayo  (0,  1,  2,  4,  6  y  8 semanas  post-tratamiento)  fueron  establecidas  4 repeticiones por tratamiento (0,002, 0,01 y 0,05 ppm) y 4 por control. En cada ensayo (6 ensayos sucesivos) se dispuso de 4 unidades experimentales de 25 larvas por  repetición  de  cada  concentración  probada  y  4 unidades experimentales adicionales del control.

 Una  vez esperado el día previsto (0, 7, 15, 30, 45, 60 días) se  colocaron  de  forma  simultánea  25  larvas  del  IV estadio temprano en cada envase por repetición (tanto del  control  como  del  grupo  tratado).  Diariamente se  procedió  a  registrar  la  mortalidad  tanto  en  cada grupo tratado como en el control, mediante el conteo de  larvas  y  pupas  muertas.  La  mortalidad  larvaria se registró a partir del primer día de la exposición.

La mortalidad de pupas sólo fue registrada a partir del tercer día de exponer las larvas al producto. Con los  datos  obtenidos  para  las  tres  concentraciones, se  calcularon  después  los  siguientes  parámetros: 1-  Porcentaje  de  mortalidad  de  larvas  =  [(Lm/L expuestas)  x  100],  donde  Lm=  larvas  muertas;  2- Porcentaje de mortalidad de pupas = [(Pm/Pm+ ad) x 100], donde Pm= pupas muertas; 3- % de inhibición de emergencia de adultos (% IE) = (100-(100-E/C) donde, E = % de emergencia de expuestos; C = % de  emergencia  del  control.  También  se  calcularon para  cada  grupo  control,  porcentaje  de  mortalidad larval, porcentaje de pupas formadas, porcentaje de mortalidad de pupas, porcentaje de mortalidad total y porcentaje de emergencia de adultos. El porcentaje de inhibición de la emergencia de adultos (% IE) solo se puede calcular para las larvas expuestas. En cada tratamiento se determinó el porcentaje de inhibición de emergencia de adultos (% IE) y se aplicó un análisis de varianza con un solo criterio de clasificación o de una vía. Los porcentajes de inhibición de emergencia fueron transformados a arcoseno, para normalizar los datos  y  luego  aplicar  las  pruebas  de  separación  de medias de Duncan y del mínimo rango significativo con un nivel de significación del 5 %. La mortalidad observada fue corregida con la mortalidad del control, sólo en los casos en que ésta excedió el 5 % y según la fórmula siguiente: % Mortalidad corregida = (X-Y /  X)  x  100,  donde  X  =  Porcentaje  de  larvas  vivas en el control, e Y = Porcentaje de larvas vivas en el tratamiento.

Determinación del efecto del aumento de la densidad larvaria sobre la eficacia de piriproxyfen


  Con  la  finalidad  de  determinar  el  efecto del aumento de la densidad larvaria sobre la eficacia del  producto  y  analizar  si  existe  disminución  del porcentaje  de  mortalidad  de  pupas  en  función del  aumento  de  la  densidad  larval,  se  realizó  el experimento de exponer las larvas de Ae. aegypti con la  concentración  de  0,05  ppm,  la  cual  se  aplicó  en los mismos envases plásticos; para después agregar a  los  mismos  diferentes  densidades  larvarias.  Las densidades  probadas  (tratamientos)  fueron  de  25, 50,  75,  100  y  125  larvas  por  litro  en  cada  envase tratado (0,05 ppm). Las larvas se colocaron de forma simultánea para todos los tratamientos y cada grupo control,  que  solo  contenía  la  respectiva  cantidad de  larvas  (25,  50,  75,  100  y  125  larvas)  por  litro de  agua  mineral.  Se  aplicó  un  diseño  experimental completamente  aleatorizado  o  aleatorio,  se prepararon  cuatro  repeticiones  por  tratamiento (densidad) y tres repeticiones en el control de cada densidad. La mortalidad larvaria se registró a partir del primer día de exposición y la mortalidad de pupas fue registrada a partir del tercer día de exponer larvas al producto. En cada repetición de los tratamientos y controles, se determinó el porcentaje de mortalidad de pupas.  Se  aplicó  un  análisis  de  varianza con un solo criterio de clasificación o de una vía; y después un  análisis  de  pruebas  de  separación  de  medias  de Duncan  y  del  mínimo  rango  significativo  con  un nivel de significación del 5 %; antes de la aplicación del ANOVA, estos porcentajes de mortalidad fueron transformados  a  arcoseno,  a  fin  de  normalizar los  datos.  No  se  aplicó  el  factor  de  corrección  de
mortalidad,  ya  que  la  misma  siempre  fue  igual  o menor del 5% en cada grupo control.

RESULTADOS

  Los  resultados  obtenidos  confirman la  eficacia  y  actividad  residual  prolongada  de pyriproxyfen  a  la  concentración  de  0,05  ppm (Tabla III). Según los mismos, la actividad residual del  producto  con  esta  concentración  fue  bastante satisfactoria  durante  8  semanas  (60  días)  post-tratamiento,  obteniéndose  valores  del  porcentaje  de Inhibición de la Emergencia (% IE) superiores al 98 % tanto el día inicial (semana 0) como en la primera semana (Tabla III); después en las semanas 2 y 4 post-tratamiento, este valor fue de 98,9 % IE y 88 % IE respectivamente; en la semana 6, el valor aumentó a 91,8% IE y finalmente en la semana 8, disminuyó a 77% IE(Tabla III). Según estos resultados, la eficacia durante las 6 primeras semanas fue muy alta, ya que sus valores fluctuaron entre 88% (semana 4) y 98,9 %  (semana  2). A  la  concentración  de  0,01  ppm,  el producto  fue  eficaz  solamente  durante  una  semana con 98,98% de Inhibición de la Emergencia (Tabla II). En cambio, con la concentración de 0,002 ppm, solo fue eficaz en la semana inicial (Semana 0); ya que solo produjo 56,7 % de inhibición de emergencia en la primera semana (Tabla I). Según estos resultados, al aumentar la perma nencia del producto en el agua tratada, se afectó negativamente su eficacia, tanto a la  concentración  de  0,002  como  a  la  concentración de 0,01 ppm (Tabla I y Tabla II). La mortalidad en la fase de pupa, fue mayor que la mortalidad larval a todas las concentraciones probadas (Tablas I, II y III).  La  mortalidad,  tanto  de  larvas  como  de  pupas fue menor del 5%, en los grupos control de todas las semanas  de  evaluación  (Tabla  IV).  En  conclusión esta formulación presenta una alta residualidad sobre larvas de Ae. aegypti a la concentración de 0,05 ppm, manteniendo su eficacia durante 8 semanas (60 días) post-tratamiento.  Con  las  demás  concentraciones probadas tiene muy corta actividad residual.

  Por  otra  parte,  el  aumento  de  la  densidad larvaria  a  la  concentración  de  0,05  ppm  no  afectó negativamente  la  eficacia  del  producto;  ya  que  el porcentaje de mortalidad de pupas a las densidades de 25, 50 y 75 larvas fue del 100%, de 93% con 100 larvas/litro y de 94% con 125/litro (Tabla V). El análisis de varianza  no  mostró  diferencias  significativas  entre las medias de los tratamientos (F = 4,53; g.l. = 4, 10; P<0,05) a un nivel de confiabilidad del 95%. Es decir, no  hubo  diferencias  estadísticamente  significativas entre  las  densidades.  Este  resultado  sugiere  que  al aumentar  progresivamente  la  cantidad  de  larvas  a tratar  con  pyriproxyfen  (0,05  ppm),  no  disminuyó la mortalidad de pupas como se esperaba y tampoco se  afectó  negativamente  la  eficacia  del  producto.

Asimismo,  el  aumento  de  la  densidad  larvaria  en el  grupo  control,  tampoco  afectó  negativamente  la sobrevivencia  de  las  pupas  de  Ae.  aegypti  (Tabla V).  Este  resultado  permite  rechazar  la  hipótesis  de que el aumento de la densidad larval aumentaría la Inhibición de la Emergencia (% IE) superiores al 98 % tanto el día inicial (semana 0) como en la primera semana (Tabla III); después en las semanas 2 y 4 post-tratamiento, este valor fue de 98,9 % IE y 88 % IE respectivamente; en la semana 6, el valor aumentó a 91,8% IE y finalmente en la semana 8, disminuyó a 77% IE(Tabla III). Según estos resultados, la eficacia durante las 6 primeras semanas fue muy alta, ya que sus valores fluctuaron entre 88% (semana 4) y 98,9 %  (semana  2). A  la  concentración  de  0,01  ppm,  el producto  fue  eficaz  solamente  durante  una  semana con 98,98% de Inhibición de la Emergencia (Tabla II). En cambio, con la concentración de 0,002 ppm, solo fue eficaz en la semana inicial (Semana 0); ya que solo produjo 56,7 % de inhibición de emergencia en la primera semana (Tabla I). Según estos resultados, al aumentar la perma nencia del producto en el agua tratada, se afectó negativamente su eficacia, tanto a la  concentración  de  0,002  como  a  la  concentración de 0,01 ppm (Tabla I y Tabla II). La mortalidad en la fase de pupa, fue mayor que la mortalidad larval a todas las concentraciones probadas (Tablas I, II y III).  La  mortalidad,  tanto  de  larvas  como  de  pupas fue menor del 5%, en los grupos control de todas las semanas  de  evaluación  (Tabla  IV).  En  conclusión esta formulación presenta una alta residualidad sobre larvas de Ae. aegypti a la concentración de 0,05 ppm, manteniendo su eficacia durante 8 semanas (60 días) post-tratamiento.  Con  las  demás  concentraciones probadas tiene muy corta actividad residual.

  Por  otra  parte,  el  aumento  de  la  densidad larvaria  a  la  concentración  de  0,05  ppm  no  afectó negativamente  la  eficacia  del  producto;  ya  que  el porcentaje de mortalidad de pupas a las densidades de 25, 50 y 75 larvas fue del 100%, de 93% con 100 larvas/litro y de 94% con 125/litro (Tabla V). El análisis de varianza  no  mostró  diferencias  significativas  entre las medias de los tratamientos (F = 4,53; g.l. = 4, 10; P<0,05) a un nivel de confiabilidad del 95%. Es decir, no  hubo  diferencias  estadísticamente  significativas entre  las  densidades.  Este  resultado  sugiere  que  al aumentar  progresivamente  la  cantidad  de  larvas  a tratar  con  pyriproxyfen  (0,05  ppm),  no  disminuyó la mortalidad de pupas como se esperaba y tampoco se  afectó  negativamente  la  eficacia  del  producto.

Asimismo,  el  aumento  de  la  densidad  larvaria  en el  grupo  control,  tampoco  afectó  negativamente  la  sobrevivencia  de  las  pupas  de  Ae.  aegypti  (Tabla V).  Este  resultado  permite  rechazar  la  hipótesis  de  que el aumento de la densidad larval aumentaría la sobrevivencia de pupas tratadas, por lo que afectaría negativamente la eficacia del producto.

DISCUSIÓN

  Se  comprobó  una  prolongada  actividad residual  de  pyriproxyfen  contra  Ae.  aegypti  a  la concentración  de  0,05  ppm.  La  eficacia  durante las  6  primeras  semanas  fue  muy  alta,  ya  que  sus valores  fluctuaron  entre  88%  IE  (semana  4)  y  98,9 %  IE  (semana  2).  Estos  resultados  confirman  una residualidad  prolongada  del  producto  durante  las  6 primeras  semanas,  pero  solamente  a  la  concentración de  0,05  ppm  (Tabla  III).  En Venezuela,  Suárez  et  al. (2011) obtienen resultados muy similares con la misma concentración (0,05 ppm), según estos autores la acción residual  del  producto  arrojó  valores  de  Inhibición  de Emergencia de Ae. aegypti, superiores al 90% durante las cuatro primeras semanas, para después disminuir a valores entre 59% IE y 73 % IE a partir de la semana 8. Los mismos autores, también señalaron una mayor mortalidad en la fase de pupa, resultado que coincide con el presente trabajo (Tablas I, II, III). Por otra parte, Carvalho  de  Resende  &  Antonaci  Gama  (2006)  en ensayos de laboratorio en Brasil, señalaron una actividad residual muy prolongada sobre larvas de Aedes aegypti a la dosis de 0,05 ppm; con valores del porcentaje de Inhibición de la Emergencia, entre 99 % y 100 % IE a 60 días (8 semanas) post-tratamiento y entre 68,5% y 98 % IE a 120 días post-tratamiento (16 semanas); resultados que difieren del presente trabajo. Probablemente esto se deba a que se trata de una población colonizada de Ae. aegypti que es altamente susceptible a este producto.

  En  estudios  de  campo,  fueron  tratados cinco  pozos  (charcos)  que  contenían  larvas  de  An. punctimaculatus,  con  cuatro  dosis  de  pyriproxyfen. Pozos I y II a 0,1 ppm; el Pozo III a 0,05 ppm; el Pozo IV a 0,02 ppm y el Pozo V a 0,01 ppm. La emergencia del adulto (% IE) fue inhibida completamente durante dos meses a la dosis de 0,1 ppm; durante un mes a la concentración de 0,05 ppm y por 20 días a 0,02 ppm y 0,01 ppm (Okazawa et al., 1991). Por otro lado, en Corea del Sur, fue evaluada su eficacia a dosis de 0,05 ppm  contra  Aedes  togoi  (Theobald)  en  criaderos  de alta salinidad, obteniéndose excelentes resultados, con porcentajes de mortalidad de pupas de 100% hasta 40 días post-tratamiento y 74,6% a 51 días del tratamiento (Dong-Kyu, 2001). La eficacia del producto disminuye en condiciones de campo, debido a los factores climáticos adversos y parámetros físico-químicos del agua, lo cual obliga a incrementar las dosis de aplicación.

Tabla  I.  Porcentaje  de  mortalidad  de  larvas,  porcentaje  de  mortalidad  de  pupas,  porcentajes  de emergencia de adultos (larvas expuestas y controles) y porcentaje de Inhibición de la Emergencia de adultos (% IE) después del tratamiento al agua con pyriproxyfen a la concentración de de 0,002 ppm.

Tabla  II.  Porcentaje  de  mortalidad  de  larvas,  porcentaje  de  mortalidad  de  pupas,  porcentajes  de emergencia de adultos (larvas expuestas y controles) y porcentaje de Inhibición de la Emergencia de adultos (% IE) después del tratamiento al agua con pyriproxyfen a la concentración de 0,01 ppm.

Tabla  III.  Porcentaje  de  mortalidad  de  larvas,  porcentaje  de  mortalidad  de  pupas,  porcentajes  de emergencia de adultos (larvas expuestas y controles) y porcentaje de Inhibición de la Emergencia de adultos (% IE) después del tratamiento al agua con pyriproxyfen a la concentración de 0,05 ppm.

Tabla IV. Porcentaje de mortalidad de larvas y pupas, porcentaje de pupas formadas (vivas),  porcentaje de mortalidad total y porcentaje de emergencia de adultos en los grupos control (sin tratamiento) de las semanas 0, 1, 2, 4, 6 y 8 post-tratamiento.

Tabla V. Porcentaje de mortalidad de larvas, Porcentaje de mortalidad de pupas, porcentaje de pupas formadas (vivas), porcentaje de mortalidad total y porcentaje de emergencia de adultos a diferentes densidades de larvas tratadas con pyriproxyfen a una concentración de 0,05 ppm.

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